Technique de prélèvements bactériologiques - CClin Sud-Est

22/10/2013
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Les prélèvements en bactériologie:
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PRESCRIPTION
MEDICALE
A visée diagnostic,
épidémiologique
Prélèvement
Laboratoire de
Bactériologie
Etape pré analytique
Etape analytique :
Mise en culture
Etape post analytique
Acheminement
Variable selon
l’ organisation interne
Les étapes de l’analyse :
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L'acte de biologie médicale comprend plusieurs étapes :
 Prescription médicale
 Etape pré analytique :
Prélèvement d’un échantillon
Recueil des éléments cliniques pertinents
Préparation,
Conservation
Transport de l’échantillon jusqu’au laboratoire
Etape analytique : Processus technique permettant l’obtention
du résultat d’analyse microbiologique
Etape post analytique : Validation, interprétation des résultats,
communication au prescripteur
Etape pré analytique :
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1. La prescription
2. Le prélèvement
3. L’envoi des échantillons au laboratoire
4. Les examens abordées :
ECBU
ECBC
Hémoculture
Prélèvement de plaie
Écouvillonnage rectal
La prescription :
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Doit être claire, précise (selon la nomenclature des actes de biologie médicale)
Doit comporter :
Nature de l’échantillon : urine, selle, crachat…..
 Origine anatomique,
 Mode de recueil
Nom et qualité du prescripteur
Identité du malade (nom, prénom, sexe, date de naissance, date d’hospitalisation,
numéro d’identification
L’objectif de l’analyse :
oDiagnostic ou épidémiologique
Degré d’urgence
Informer le préleveur et le biologiste
Exemple : prélèvement urine sur sonde , ECBC par tubage gastrique etc..
Ordonnance
Prescription médicale
Bon pré établi à remplir
Le prélèvement :
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Acte clé de la phase pré analytique
Par une personne habilitée
Respect des conditions préconisées par le laboratoire : Manuel du prélèvement
Procédures connues, accessibles par toutes les personnes en charge des
prélèvements
Convention laboratoire/ Etablissement : acte technique et condition hygiène
Respect des PRECAUTIONS STANDARD
Protéger le professionnel
Protéger le patient
Tout produit biologique doit être considéré comme potentiellement infectieux

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Vous les connaissez tous !
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Cas particulier :
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 Respecter les PCH relatives à l’infection connue
ou suspectée chez le patient :
GOUTELETTES, AIR, CONTACT
Exemple :
Port du masque chirurgicale pour réaliser les prélèvements de
diagnostic coqueluche, grippe, varicelle
 Port du masque FFP2 en cas de tuberculose
 Infection ou colonisation due à des MO dont il est souhaitable de
limiter la propagation : patient porteur d’un CD 027
Recommandations :
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Porter un équipement de protection adapté aux diverses
situations (gants, blouse, masque, lunettes, etc.)
Hygiène des mains avant et après chaque acte technique
Ne pas recapuchonner les aiguilles.
Utiliser du matériel stérile à UU
Manipuler avec soins les objets coupants et piquants et les
déposer immédiatement après usage dans des conteneurs
adaptés.
Ranger, nettoyer, désinfecter le matériel rentré dans la chambre
Individualisation du soin (réduction de la contamination de l’env)
Personnel réalisant l’acte de
prélèvement :
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Infirmièr(e)s diplômés d’état :
 Sur prescription ou sur application d’un protocole
Décret de compétence n°2004-802 du 29 juillet 2004 : article R 4311-7
Techniciens de laboratoires titulaires du certificat
de prélèvement (sanguin uniquement)
Médecins, pharmacien
Internes….
Dispositif de recueil :
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Conditionnement spécifique en fonction des
échantillons à analyser :
Solide/liquide
Système stérile ou non
Système clos ou non
Tube sec +/- avec des réactifs
Micro organismes recherchés (ensemencement
+/-)
Avec ou sans milieu de conservation
Etiquetage de l’échantillon biologique :
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 Au lit du patient
 Informations patients :
 nom, prénom,
 date de naissance du patient,
 date, heure
 site de prélèvement
Informations préleveurs :
 nom ou initiales

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Transfert des échantillons au laboratoire :
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 Emballage primaire (contenant le liquide biologique)
récipient étanche, hermétique : tubes, flacon stérile…
 Emballage secondaire :
sachet plastique avec double compartiment
oUn compartiment pour le prélèvement
oUn compartiment pour la demande d’examen
Emballage tertiaire : par route
Fonction de la catégorie de l’échantillon :
agent infectieux +/- pathogène (CAT A ou B)
Réception au laboratoire :
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Réception des prélèvements et contrôle
Anomalies sur prélèvement :
Échantillon sans identité / illisible/incomplète
Discordance entre identité échantillon et feuille de
prescription
Quantité insuffisante, échantillons inappropriés aux
analyses prescrites
Echantillons reçus dans des récipients
endommagés et non étanches…………….
Appel du prescripteur
En résumé :
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Choisir le dispositif de prélèvement adapté
Cf manuel de prélèvement du laboratoire
Appliquer les précautions standards
Joindre la fiche de demande d’examen avec les
informations précises
Acheminer le prélèvement au laboratoire
Délai compatible avec les analyses demandées
ECBU :
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Examen Cyto Bactériologique des Urines
ECBU :
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Contexte et indication :
Mode de recueil:
Patient continent
Patient avec sonde à demeure
Patient incontinent
Chez le nourrisson et jeune enfant
Cas particulier :
Urétérostomie, néphrostomie
Conservation /transport
La demande
Contexte et indication :
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Analyse micro biologique la plus fréquemment
réalisée …… infection la plus fréquente !!!
Permet de faire un diagnostic biologique d’infection
urinaire
D’isoler le(s) et d’identifier micro organismes
responsable
Déterminer leur sensibilité aux anti infectieux et
d’adapter le traitement

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Quelques rappels :
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Colonisation ou bactériurie asymptomatique :
Présence de ou de plusieurs MO dans l’arbre urinaire sans
manifestation clinique
Infection urinaire
Correspond à l’agression d’un tissu par un ou plusieurs MO
entrainant une réponse inflammatoire et des signes cliniques
associées :
Au moins un des signes suivants : fièvre, impériosité mictionnelle,
pollakiurie, brûlure mictionnelle ou douleur sus pubienne en
l’absence d’autre cause infectieuse ou non
A une uro culture positive
Définition Conférence de Consensus SPILF/AFU 2002
Patient continent :
matériel et méthode
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Miction :
 Milieu de jet représentatif de l’urine vésicale normalement stérile.
De préférence miction du matin sinon 2 à 4 h après la dernière miction
Matériel :
• Gants et serviettes propres ou à UU
• Gans à UU
• Compresses stériles
• Dispositif de recueil stérile
• SHA
• Savon liquide, eau du robinet
• Solution antiseptique non alcoolique
• Sac de transport et bon d’examen
Méthode :
• Vérifier l’identité,
• Informer et installer le patient (patient autonome peut
pratiquer sa toilette et le prélèvement lui-même en
respectant les mêmes précautions d’hygiène
• Faire une friction hydro alcoolique
• Mettre les gants à UU
• Réaliser la toilette des organes génito- urinaires au
savon liquide : élimination flore commensale
• Rincer, sécher
•Appliquer l’antiseptique avec des compresses stériles
sur le méat urinaire
• Eliminer le 1er jet d’urine (20 ml)
• Recueillir aseptiquement les urines (20 à 30 ml) dans
le dispositif stérile : ne pas toucher bord sup du flacon,
fermer hermétiquement
• Oter les gants , faire une FHA
•Identifier le flacon et acheminer
Patient continent :
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Cas particulier :
Urine du premier jet :
 Suspicion d’infection urétrale ou prostatique
 recherche de mycoplasmes urogénitaux
Recherche de mycobactérie dans les urines :
Examen de 2nde intention, sur prescription spécifique
Recueillir la totalité des urines de la 1ère miction du mâtin
après restriction hydrique, 3 jours de suite.
Patient SAD : Matériel et Méthode
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Vérifier la date de pose de la SU
Clamper la sonde en aval du site de prélèvement 15 à 20 min avant le
recueil
Matériel :
Méthode :
• Seringue de 10 ml
• Aiguille trocard selon le site de
prélèvement
• Dispositif de recueil
• Compresses stériles
• Gants à UU
• Antiseptique non alcoolique
• Dispositif élimination des déchets
• Sachet de transport et bon
d’examen
• Vérifier l’identité
• Informer et installer le patient
• Faire une friction hydro alcoolique
• Mettre des gants à UU
• Désinfecter le site de prélèvement
• Prélever les urines selon la
technique adaptée au site
• Transférer les urines dans le
dispositif de recueil
•Déclamper la sonde
•Oter les gants et faire une friction
hydro alcoolique
Mode de recueil : patient SAD
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Ce qu’il Faut faire :
Recueillir les urines par ponction après désinfection sur le site
spécifique du dispositif de sonde.
En cas de demande d’ECBU à l’occasion d’un changement de
sonde
 Recueillir l’urine sur la sonde nouvellement posée
Ce qu’il NE Faut PAS faire
 Prélever dans le sac collecteur (pullulation microbienne
importante)
Rompre le système clos en déconnectant la sonde du sac pour
prélever les urines
L’analyse bactériologique des embouts de sondes urinaires
n’est pas recommandé.
Mode de recueil : Patient incontinent
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Chez la femme :
Sondage aller/ retour ou itératif (utiliser sonde de petit
calibre)
Uniquement si le recueil des urines lors de la miction est
impossible
Chez l’homme :
Afin d’éviter le risque de prostatite lié au sondage, préférer
le collecteur pénien propre, voir le cathétérisme sus-pubien
en cas de rétention d’urine.

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Mode de recueil :
Nourrisson et jeune enfant :
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En cas de miction volontaire
privilégier le prélèvement d’urine au milieu du jet après
désinfection soigneuse de la vulve, du prépuce.
Collecteur d’urine (enfant de moins de 3 ans) :
méthode la plus utilisée
Dispositif à UU adaptée à l’anatomie,
Préparation du site
désinfection soigneuse de la vulve, du méat urinaire et du
périnée / du gland et prépuce.
A changer après 1h en l’absence d’urine
Urine transvasée avec asepsie dans le flacon stérile
Acheminer vers le laboratoire
Cas particulier :
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Urétérostomie :
Après nettoyage soigneux de la stomie on met en
place un collecteur stérile et l’on procède comme
pour le nourrisson
Néphrostomie :
 Obtenir urine du rein droit et gauche
Conservation ECBU :
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Après recueil l’acheminer au laboratoire :
1. Si utilisation d’un milieu de conservation
tube boraté = bloque la multiplication bactérienne
Possibilité de conservation des urines à t° ambiante pd
48h
1. Pas de milieu de conservation
 les urines sont conservées à + 4°C maxi 24h
Renseignements à recueillir pour le
biologiste :
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Mode de recueil de l’échantillon :
milieu de jet, 1er jet, sur SAD, par cathétérisme, sur dispositif
collecteur (poche nourrisson, collecteur pénien urétérostomie, KT sus
pubien et sa durée de mise en place)
Information patient : identité
Terrain physiologique : âge, sexe, grossesse
Renseignements cliniques : température ,atteinte neurologique,
anomalie fonctionnelle (vessie de Bricker), intervention chir
Date et heure du prélèvement
Traitement antibiotique
Notion d’hospitalisation récente ou de vie en institution
Terrain particulier : diabète, immunodépresseion
Dépistage sur bandelette urinaire :
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Méthode de dépistage rapide par réactif
Réalisée au lit du malade, au cabinet médical ou par l le patient lui-même
La BU ne doit pas être faite par application sur la protection, sur sonde
Doit être réalisé immédiatement après le prélèvement d’urine
Respecter les conditions de lecture
Les BU doivent disposer du marquage DMDIV (dispositif médical pour diagnostic
in vitro)
Peuvent être réalisées par des IDE (art R.4311-539 du CSP – recueil des
données biologiques obtenues par lecture instantanée)
Méthode applicable pour :
Dépistage des personnes asymptomatiques : femmes enceintes (en cas de positivité complèter par un
ECBU)
Cystite aigue simple (communautaire)
La BU NE PEUT PAS ETRE RETENUE COMME METHODE DE
DIAGNOSTIC DE L’INFECTION URINAIRE
Ce qu’il faut retenir :
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Quand réaliser un ECBU :
en cas de symptômes uniquement et sur PM
Ne doit pas être réalisé en cas d’urines
nauséabondes, troubles, fuites …
Le prélèvement se fait après une toilette
périnéale au savon doux , suivi d’une désinfection
du méat.
Acheminer au laboratoire selon les
recommandations du manuel