Temps 2 : Etude de l’ultrastructure de la paroi
Support
Electronographie de la paroi des cellules végétales : doc.3 p115 Manuel SVT Bordas 1S 2001
Observations
Chaque cellule possède, à l’extérieur de la membrane plasmique, une paroi. La lamelle moyenne sépare et
joint les parois de 2 cellules adjacentes.
Temps 3 : Mise en évidence de la composition et du rôle de la paroi par production
et observation de protoplastes
L'utilisation d'enzymes spécifiques, la pectinase (enzyme hydrolysant la pectine) et la cellulase (enzyme
hydrolysant la cellulose), va permettre de vérifier la présence de différents constituants pariétaux et de mettre
en évidence leur fonction …
Supports
- petites boîtes de Pétri, pipette compte goutte, étuve,
- feuilles de Poireau,
- solutions enzymatiques
Solutions enzymatiques (pour 100 ml de tampon phosphate 10 mM à pH 5,8)
- Solution : 10,2 g de pectinase + 10 g de mannitol
- Solution : 20,2 g de cellulase + 10 g de mannitol
- Solution : 30,2 g de pectinase + 0,2 g de cellulase + 10 g de mannitol
Consignes
- Distribuer 5 mL de chaque solution dans 3 boîtes de Pétri.
- Faire des tranches tangentielles fines dans une feuille de poireau
- Plonger les tranches immédiatement dans les différentes solutions, face sectionnée vers la solution.
Incuber 12 heures les boites de pétri à l’étuve à 30°C.
- Prélever une goutte de solution d’incubation, la déposer dans une lame à concavité, sous lamelle et
observer au microscope.
Schématiser les différents aspects des cellules obtenues. A partir de l’ensemble de vos observations,
identifier les composants chimiques des différentes parties de la paroi cellulaire, mises en évidence sur la
photographie de microscopie électronique …
Résultats
On obtient par action enzymatique combinée de la cellulase et de la pectinase des cellules rondes,
dépourvues de paroi : les protoplastes.
Soumis à l’action de la seule pectinase, les
protoplastes conservent leur forme géométrique Soumis à l’action de la seule cellulase, les
protoplastes apparaissent jointifs.
Hypothèses : la lamelle moyenne de composition pectique est responsable de la cohésion du tissu végétal ; la
paroi cellulosique constitue un squelette rigide responsable de la forme géométrique de la cellule végétale.