Stage proposé par Pr Florence BRUGNON

Stage proposé par
Pr Florence BRUGNON
IMOST (Imagerie moléculaire et Stratégie Théranostique)
Inserm 1240
Biologie de la Reproduction
Faculté de médecine
CBRV
Place Henri Dunant
63000 CLERMONT-FERRAND France
Et
Laboratoire CECOS-AMP
CHU Clermont Ferrand
CHU Estaing
1 place Aubrac
63000 Clermont Ferrand
Téléphone : 04 73 75 02 31
Mail : [e-mail]
Directeur du Laboratoire : Elisabeth Niot-Noirault
Responsable du stage : Pr Florence Brugnon
Coencadrement : Aicha Metchat
Intitulé de l ‘équipe d’accueil :
Prénom et NOM du Responsable de l’équipe :
IMOST (Imagerie moléculaire et Stratégie Théranostique)
Inserm 1240
Biologie de la Reproduction
Faculté de médecine
CBRV
Place Henri Dunant
63000 CLERMONT-FERRAND FRANCE
Chef d'équipe : Pr Florent CACHIN
Directeur du laboratoire : Dr Elisabeth MIOT NOIRAULT
Résumé du thème de recherche de l’équipe
L’équipe de recherche a pour but de mettre en place et d’évaluer des techniques innovantes de
théranostiques moléculaires et d’imagerie dans le cadre du cancer en prenant pour modèle d’étude
principal le cancer du sein et le sarcome d’Ewing.

Evaluation de l’impact de la vitrification sur la méiose des ovocytes humains maturés in vitro
Responsable du stage:
Pr Florence BRUGNON ([e-mail])
Tél : [phone]
Ou 04 73 75 02 32
Co-encadrement :
Aicha METCHAT (aicha.metch[email protected]), Attaché Temporaire d’Enseignement et de Recherche
Projet de stage :
La congélation des ovocytes par méthode de vitrification peut aujourd’hui être proposée aux femmes
pour préserver leur fertilité avant la mise en place d’un traitement stérilisant comme la chimiothérapie.
La vitrification a clairement démontré son efficacité pour les ovocytes dits « matures », bloqués en
métaphase de deuxième division de méiose (Kuwayama et al., 2007 ; Cobo et al., 2008). Néanmoins,
dans certaines situations, la stimulation de l’ovulation n’est pas possible du fait de l’urgence du cancer
à traiter ou de la contre-indication du traitement de stimulation comme cela peut être le cas dans le
cancer du sein. Un prélèvement d’ovocytes immatures peut alors être envisagé. Les données
actuelles de la littérature montrent un impact potentiel de la vitrification sur la reprise de la méiose des
ovocytes immatures (Song et al., 2016). Par notre sujet, nous proposons d’évaluer l’impact de la
vitrification sur la méiose d’ovocytes humains maturés in vitro avant et après vitrification. Une analyse
des mécanismes cellulaires et moléculaires sera envisagée afin d’analyser l’effet de la vitrification sur
la cinétique de maturation, la ségrégation chromosomique et la stabilité des facteurs maternels
impliqués dans la maturation ovocytaire. Ainsi, les temps de maturation, de la rupture de la vésicule
germinale à l’expulsion du globule polaire, seront analysés par imagerie en time lapse. Dans un
second temps, la ségrégation des chromosomes homologues durant la méiose sera analysée par
FISH multicouleur (Hybridation in situ en Fluorescence multi couleurs). Dans un troisième temps, la
stabilité de facteurs maternels impliqués dans la régulation du processus méiotique sera quantifiée par
transcription reverse et PCR quantitative à partir d’une liste de gènes candidats identifiés par un crible
in silico . Ce travail nous permettra d’une part de mieux comprendre l’impact de la vitrification sur la
reprise de la méiose des ovocytes immatures et d’autre part d’améliorer la prise en charge de la
préservation de la fertilité de ces patientes.
Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
Culture cellulaire, time lapse, extraction ARN, RT-qPCR, FISH multi couleur.
Publications du Responsable de stage au cours des 5 dernières années :
Rives N, Walschaerts M, Setif V, Hennebicq S, Saias J, Brugnon F, Auger J, Berthaut I,
Szerman E, Daudin M, Bujan L (2017) Sperm aneuploidy after testicular cancer treatment:
data from a prospective multicenter study performed within the French Centre d'Étude et de
Conservation des Oeufs et du Sperme network. Fertil Steril 107:580-588.
Martinez G, Walschaerts M, Le Mitouard M, Borye R, Thomas C, Auger J, Berthaut I,
Brugnon F, Daudin M, Moinard N, Ravel C, Saias J, Szerman E, Rives N, Hennebicq S,
Bujan L (2017) Impact of Hodgkin or non-Hodgkin lymphoma and their treatments on sperm
aneuploidy: a prospective study by the French CECOS network. Fertil Steril 107: 341-350.
Greze V, Brugnon F, Chambon F, Halle P, Canis M, Amiot C, Gremeau AS, Pereira B,
Yanez Peralta Y, Tchirkov A, Kanold J (2017) Highly sensitive assessment of neuroblastoma
minimal residual disease in ovarian tissue using RT-qPCR-A strategy for improving the safety
of fertility restoration. Pediatr Blood Cancer 64: 5-11.

Chauffour C, Pouly JL, Brugnon F, Dejou L, Gremeau AS, Janny L, Philippe A (2016)
Effect of endometriosis on IVF outcomes in cases of single embryo transfer for first IVF
attempt in patients under 35. (2016) Journal of endometriosis and pelvic pain disorders 8:13-
18.
Chambon F, Brugnon F, Grèze V, Grémeau AS, Pereira B, Déchelotte P, Kanold J (2016)
Cryopreservation of ovarian tissue in pediatric patients undergoing sterilizing chemotherapy.
Hum Fertil19:23-31.
Kemeny S, Brugnon F, Eymard-Pierre E, Goumy C, Janny L, Tchirkov A, Francannet
C, Vago P, Pebrel-Richard C (2016) Characterization by microarray and meiotic segregation
study of a der(10)t(10;18) in a patient with infertility and normal phenotype. Asian J
Androl.19:135-137.
Maqdasy S, El Hajjaji FZ, Baptissart M, Viennois E, Oumeddour A, Brugnon F, Trousson A,
Tauveron I, Volle D, Lobaccaro JM, Baron S (2015) Endocrinology 156:4545-57
Sanfilippo S, Canis M, Smitz J, Sion B, Darcha C, Janny L, Brugnon F (2015) Vitrification
of human ovarian tissue : a practical and relevant alternative to slow freezing. Reprod Biol
Endocrinol 13, 67-74
Daudin M, Rives N, Walschaerts M, Drouineaud V, Szerman E, Koscinski I, Eustache F,
Saïas-Magnan J, Papaxanthos-Roche A, Cabry-Goubet R, Brugnon F, Le Lannou D,
Barthélémy C, Rigot JM, Fréour T, Berthaut I, Giscard d’Estaing S, Touati F, Mélin-
Blocauaux MC, Blagosklonov O, Thomas C, Benhamed M, Schmitt F, Kunstman JM,
Thonneau P, Bujan L (2014) Sperm cryopreservation in adolescents and young adults with
cancer: results of the French national sperm banking network (CECOS) Fertil Steril 103, 478-
486.
Bujan L, Walschaerts M, Brugnon F, Daudin M, Berthaut I, Auger J, Saias J, Szerman E,
Moinard N, Rives N, Hennebicq S (2014) Impact of lymphoma treatments on
spermatogenesis and sperm deoxyribonucleic acid: a multicenter prospective study from the
CECOS network. Fertil Steril 102, 667-674.
Pons-Rejraji H, Brugnon F, Sion B, Maqdasy S, Gouby G, Pereira B, Marceau G, Gremeau
AS, Drevet J, Grizard G, Janny L, Tauveron I (2014) Evaluation of atorvastatin efficacy and
toxicity on spermatozoa, accessory glands and gonadal hormones of healthy men: a pilot
prospective clinical trial. Reprod Biol Endocrinol 12, 65-77.
Dupont C, Ralliard-Rousseau D, Tarrade A, Faure C, Dahirel M, Sion B, Brugnon F, Levy R,
Chavatte-Palmer P (2014) Impact of maternal hyperlipidic hupercholestrolaemic diet on male
reproductive organs and testosterone concentration in rabbits. J Dev Orig Health Dis 5, 183-
188.
Rondanino C, Ouchchane L, Chauffour C, Marceau G, Déchelotte P, Sion B, Pons-Rejraji H,
Janny L, Volle DH, Lobaccaro JM, Brugnon F (2014) Level of liver X receptors in testicular
biopsies of patients with azoospermia. Fertil Steril 102, 361-371.
Brugnon F, Ouchchane L, Pons-Rejraji H, Artonne C, Farigoule M, Janny L (2013) Density
gradient centrifugation prior to cryopreservation and hypotaurine supplementation improve

post-thaw sperm quality of infertile men with oligoasthenoteratozoospermia. Hum Reprod 28,
2045-2057.
Bujan L, Walschaerts M, Moinard N, Hennebicq S, Saias J, Brugnon F, Auger J, Berthaut I,
Szerman E, Daudin M, Rives N (2013) Impact of chemotherapy and radiotherapy for
testicular germ cell tumors on spermatogenesis and sperm DNA: a multicenter prospective
study from the CECOS network. Fertil Steril 100, 673-680.
Sanfilippo S, Canis M, Romero S, Sion B, Dechelotte P, Pouly JL, Janny L, Smitz J,
Brugnon F (2012) Quality and functionality of human ovarian tissue after cryopreservation
using an original slow freezing procedure. J Assisted Reprod Genet 30, 25-34.
Kuentz P, Vanden Meerschaut F, Elinati F, Nasr-Esfahani MH, Gurgan T, Iqbal N, Carré-
Pigeon F, Brugnon F, Gitlin SA, Velez de la Calle J, Kilani Z, De Sutter P, Viville S (2013)
Assisted oocyte activation overcomes fertilization failure in globozoospermic patients
regardless of the DPY19L2 status. Hum Reprod 28, 1054-106.
Rives N, Perdrix A, Hennebicq S, Saias-Magnan J, Melin MC, Berthaut I, Barthélémy C,
Daudin M, Szerman E, Bresson JL, Brugnon F, Bujan L (2012) The semen quality of 1158
men with testicular cancer at the time of cryopreservation: Results of the French National
CECOS Network. J Androl. 33, 1394-1401.
Elinati E, Kuentz P, Redin C, Jaber S, Vanden Meerschaut F, Makarian J, Koscinski I, Nasr-
Esfahani MH, Demirol A, Gurgan T, Louanjli N, Iqbal N, Nisharah M, Pigeon FC, Gourabi H,
De Briel D, Brugnon F, Gitlin SA, Grillo JM, Ghaedi K, Deemeh MR, Tanhaei S, Modarres
P, Heindryckx B, Benkhalifa M, Nikiforaki D, Oehninger SC, De Sutter P, Muller J, Viville S
(2012) Globozoospermia is mainly due to DPY19L2 deletion via non-allelic homologous
recombination involving two recombinations hotspots. Hum Mol Genet 21, 3695-3702.
Gremeau AS, Brugnon F, Bouraoui Z, Peikrishvili R, Janny L, Pouly JL (2012) Outcome and
feasibility of elective single embryo transfer (eSET) policy for the first and second IVF/ICSI
attempts. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 160, 45-50.
Brugnon F, Pons-Rejraji H, Artonne C, Janny L, Grizard G (2012) The limits for detection of
activated caspases of spermatozoa by western blot in human semen. Andrologia 44, 265-272.
Ouvrier A, Alves G, Damon-Soubeyrand C, Marceau G, Cadet R, Janny L, Brugnon F, Kocer
A, Pommier A, Lobaccaro JM, Drevet JR, Saez F (2011) Dietary-cholesterol-induced post-
testicular infertility. PLoS One 6(11):e26966.
Sanfilippo S, Canis M, Ouchchane L, Botchorishvili R, Artonne C, Janny L , Brugnon F
(2011) Viability assessment of fresh and frozen/thawed isolated human follicles : reliability of
two methods (Trypan blue and Calcein AM/ethidium homodimer-1) J Assisted Reprod Genet
28, 1151-1156.

Autres informations:
Etudiants actuellement en thèse ou en M2 dans l’équipe d’accueil.
Laure Chaput, Master 2 -« Mise au point de la détection de la maladie résiduelle du sarcome d’Ewing
dans le tissu ovarien et testiculaire » (encadrement : F Brugnon).
Bérénice CASTANO, Master 2 -Valeur pronostique de l’expression des protéines caractérisant
les péricytes, dans les résidus des cancers ovariens séreux de haut grade après la
chimiothérapie néoadjuvante (encadrement : F Penault Llorca).
Farah El Sayegh ,Master 2 - Rôle de l'hétérogénéité tumorale dans l'échappement métastatique des
carcinomes mammaires triples négatifs (encadrement : Y Bidet).
Solène Delorme, Master 2 - Impact de thérapies ciblées anti-EGFR sur le profil migratoire de différents
modèles cellulaires de cancer du sein « triple négatif » (YJ Bignon)
Mona DHAOU, thèse depuis 2016 - Transition épithélio-mésenchymateuse et diversité génétique
des cancers du sein (encadrement : N Robin).
Clémence Dubois, thèse depuis 2016-. Développement de cultures cellulaires en trois dimensions à
partir des lignées cellulaires du cancer du sein BLTN : Outils prédictifs de sensibilité/résistance
des thérapies ciblées (encadrement : M Bahmdad).
L’équipe de recherche IMoST (INSERM 1240) a été créée et labélisée au 01/01/2017.
Cette proposition de stage s’adresse-t-elle spécifiquement à un étudiant scientifique, médecin
ou vétérinaire ou bien est-il ouvert à tous les profils ?
Non ; cette proposition de stage est ouverte à tous les profils.
Ce sujet peut-il donner lieu à une thèse ?
Non- recherche de financement en cours.