Identification et caractérisation fonctionnelle de deux gènes

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Université Bordeaux I
Année 2004 Thèse n° 2839
THESE
pour le
DOCTORAT DE L’UNIVERSITE BORDEAUX 1
Mention: Sciences du Vivant, Géosciences, Sciences de l’Environnement
Option: Sciences des Aliments
Présentée et soutenue publiquement le12 Juillet 2004
par
Laurent DELUC
Identification et caractérisation fonctionnelle
de deux gènes régulateurs du métabolisme
des composés phénoliques de la baie de raisin
Membres du Jury:
M. Serge DELROT Président
M. Mondher BOUZAYEN Rapporteur
M. Jean Michel MERILLON Rapporteur
M. Bernard GALLOIS Examinateur
M. François BARRIEU Co-directeur de thèse
M. Saïd HAMDI Directeur de thèse

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A Lisa et Carine.

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REMERCIEMENTS
Ce travail a été effectué à l’Unité Mixte de Recherche de Physiologie et Biotechnologie
Végétales de l’INRA de Bordeaux dans l’équipe Biologie de la Vigne sous la direction
scientifique du professeur Saïd Hamdi.
Je remercie vivement Saïd Hamdi pour m’avoir confié ce travail, pour ses encouragements
tout au long de ces quatre années de thèses, ses discussions scientifiques ainsi que son soutien
permanent dans les moments délicats. Je lui exprime ma plus profonde gratitude.
Je remercie chaleureusement Francois Barrieu pour m’avoir initié à la recherche et m’avoir
promulgué ses conseils judicieux au cours de mon parcours, aux bons moments passés à
parler d’autres choses que de science (Allez le SUA!!!). Encore merci de m’avoir donné la
chance de prouver mes compétences. Qu’il trouve ici l’expression de mes plus vifs et sincères
remerciements.
Je remercie Messieurs Mondher Bouzayen et Jean Michel Mérillon d’avoir accepté de juger
ce travail.
Je remercie également, messieurs Serge Delrot et Bernard Gallois d’avoir porté un intérêt à
mon travail en étant examinateurs de ce manuscrit.
Enfin, je voudrais remercier tous les membres de l’équipe biologie de la Vigne. Romain et
Chloé, pour leur disponibilité de tous les jours, leur gentillesse. Je leur souhaite bon courage
et plein de bonnes choses pour l’avenir. Qu’il trouve en ces mots, mes plus sincères amitiés.
Virginie, pour avoir toujours été disponible et m’avoir aidé lors de la rédaction du manuscrit.
Claudine, pour sa constante bonne humeur et pour le dernier mais précieux rush des
corrections.
Rim, qui s’est toujours montrée disponible pour me donner un coup de main.
Aux autres membres du laboratoire, je leur adresse un chaleureux coucou.
Jean-Pierre Carde pour l’étude cytologique de cette thèse et pour sa patience face à un
profane.
Linda, pour sa gentillesse et sa disponibilité pendant ces quatre années.
Sandrine alias biquette, ta bonne humeur et ton rire me manqueront énormément.
Philippe, pour ses conseils scientifiques, qui m’ont permis de prendre un peu de recul par
rapport à mon travail.
Les autres membres du labo, un grand merci, pour m’avoir supporté.
Michel Hernould, qui m’a initié l’hybridation in situ et Isabelle Farbos pour les superbes
photos en microscopie à balayage.
Philippe Picard pour ses lumières de «structuraliste» en ce qui concerne l’étude du mutant
de VvMybCs2b.

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Enfin, tous mes stagiaires, en premier lieu, Mohsen. Qu’il trouve ici, mes plus sincères
amitiés.
Julie, Mélanie, Caroline, Ivan, qui ont contribué à certains des résultats qui sont présents sur
cette thèse.
Un grand merci à Pierre Coutos-Thévenot pour m’avoir accueilli dans son laboratoire et
formé à la transgenèse Vigne, et à Christelle Pascal qui après moult péripéties a réussi à
régénérer ces fameuses vignes. Qu’il trouve ici mes plus sincères remerciements.
J’adresse aussi mes plus vifs remerciements à Alain Decendit pour les études HPLC
concernant les anthocyanes et les flavonols ainsi qu’à Laurence Geny qui a contribué aux
derniers résultats sur les dosages de tanins.
Je tiens enfin à adresser mes plus sincères remerciements au Conseil Interprofessionnel du
Vin de Bordeaux qui a mis à ma disposition les moyens financiers pour réaliser ce travail.
Enfin, je ne saurai oublier d’exprimer mon amour et ma reconnaissance à mon épouse qui
s’est montrée très compréhensive durant ces quatre années et surtout lors de la rédaction de
la thèse, je lui dédie ce mémoire.

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ABREVIATIONS:
Unités:
b, pb, kb base, paires de bases, kilo base
rpm rotation par minute
cpm coup par minute
DO densité optique
°C degré celsius
nm nanomètre
µg microgramme
M molaire
mM millimolaire
µM micromolaire
Acides nucléiques et nucléotides:
ADN Acide désoxyribonucléique
ADNc Acide désoxyribonucléique complémentaire
T-ADN Acide désoxyribonucléique transféré
ARN Acide ribonucléique
ARNm Acide ribonucléique messager
ARNt Acide ribonucléique de transfert
ATP Adénosine 5’ triphosphate
DNTP Désoxynucléoside 5’ triphosphate (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Composés chimiques et solution:
KMnO3Permanganate de potassium
BCIP 5-Bromo-4-Chloro-3-Indoyl-Phosphate, Na2
BSA Sérum Albumine bovine
DEPC diéthylpyrocarbonate
DTT Dithiothréitol
EDTA Acide éthylène diamine tétraacétique
HEPES Acide N-2 HydroéthylpipérazineN’2 éthane sulfonique sodique
IPTG Isopropyl--thiogalactopyranoside
LB milieu de Luria-Bertani
NBT Nitro-bleu de tétrazolium
PBS Tampon phosphate salin
PSA Persulfate d’ammonium
SDS Sodium dodécyl sulfate
TBS Tampon tris salin
TE Tris-EDTA
TEMED N, N, N’, N’Tétramethyl-éthylène diamine
Tris Trihydroxyméthylaminométhane
X-Gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyl -D galactoside