TP XX

SVT, 2nde, 2006-2007
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TP 10
Extraction de l’ADN
1.
but de la manipulation
La réalisation des expériences de transgenèse montre qu’il est possible de manipuler l’ADN. Ces manipulations sont pour
l’essentiel non réalisables en lycée, mais il est toutefois possible de les aborder. Le but ici est donc de montrer la possibilité de
manipuler l’ADN, en procédant à son extraction à partir de divers matériaux vivants.
2.
données de départ
On sait que toutes les cellules possèdent de l’ADN. On sait de plus que cet ADN est porteur de l’information génétique.
Il est possible de colorer l’ADN par un colorant rouge : le carmin acétique.
Confirmation :
Il est possible de monter entre lame et lamelle un fragment d’épiderme d’oignon dans
une goutte de carmin acétique : on observe bien une coloration au niveau du noyau, là où se
trouve le matériel génétique.
3.
protocole d’extraction de l’ADN
Matériel :
Tomate, kiwi, foie de porc
Mortier et pilon
Entonnoir, gaze, coton, tubes à essai
Gros sel, liquide vaisselle, eau distillée
Pipette pasteur, papier Joseph, carmin acétique
A la paillasse professeur :
Alcool froid (- 20°C)
Protocole :
-
éplucher le végétal, puis le couper en petits morceaux dans le mortier ;
rajouter quelques grains de gros sel, et écraser avec le pilon, jusqu’à obtenir
une bouillie épaisse ;
rajouter un peu de liquide vaisselle, et de l’eau (pas trop : une bonne
quantité est de 1 mL de liquide vaisselle et 10 mL d’eau) ;
Î destruction des cellules
-
filtrer sur coton + gaze, dans l’entonnoir ; récupérer le filtrat (= liquide)
dans un ou plusieurs tubes à essai ;
Î isolement des liquides intracellulaires, comprenant l’ADN et d’autres molécules
-
précipiter l’ADN en rajoutant au filtrat un volume égal d’alcool froid ;
Î purification : on ne garde que l’ADN
-
une fois la « méduse » d’ADN bien visible, rajouter une goutte de carmin
acétique ;
récupérer la pelote d’ADN grâce à la pipette pasteur, et la poser sur le papier
Joseph ; laisser sécher.
Î vérification de la molécule extraite : l’ADN doit être filamenteux et coloré en rouge
4.
quelques remarques
Le protocole utilisé ici utilise les mêmes principes que ceux suivis en laboratoires. Toutefois, l’ADN obtenu est plus dégradé et
moins pur que ce qui réalisé en laboratoire. En fait, cet ADN ne serait que difficilement utilisable…
Dans un laboratoire, une telle extraction peut prendre, selon le protocole et la quantité d’ADN à extraire en particulier, d’une
grosse demi-heure à quelques heures : Cela reste donc quelque chose de simple. L’ADN obtenu, pur, est alors manipulable : on
peut le découper, recoller des morceaux, etc. (quelques informations là-dessus sont dans le cours de Terminale S, spécialité
SVT)