Rôle de l`ADN polymérase Kappa dans la réplication du génome de

SUJET DE STAGE – MASTER BIOCHIMIE-BIOTECHNOLOGIES
UE « Initiation à la Recherche – 1er semestre 2008-2009
Titre du stage : Rôle de l’ADN polymérase Kappa dans la réplication du génome de mammifère
Responsable de l’encadrement : Marie-Jeanne Pillaire - Tél. 05
61 17 58 61
[email protected]
Nom de l’équipe d’accueil et responsables :
Instabilité Génétique et Cancer – IPBS – 205 route de Narbonne - Toulouse
Dr Jean-Sébastien Hoffmann – Pr Christophe Cazaux
Sujet d’étude :
La réplication de l’ADN permet la duplication fidèle du génome avant la division cellulaire. Cette
étape du cycle cellulaire est critique dans la mesure où les fourches de réplication sont des
structures fragiles pouvant être bloquées par de nombreux obstacles. Leur arrêt peut conduire à
leur effondrement et engendrer des cassures au sein du génome. Les mécanismes de surveillance
chargés de détecter et résoudre ces dysfonctionnements sont essentiels au maintien de la stabilité
génomique.
Des travaux réalisés ces derniers mois au sein de l’équipe mettent en évidence que l’ADN
polymérase Kappa humaine jusque là décrite pour participer à la réplication ou la réparation de
l’ADN endommagé, serait impliquée dans la mise en place des mécanismes de surveillance du
génome. Nous cherchons maintenant à comprendre, sur le plan moléculaire, le rôle de l’ADN
polymérase Kappa dans ce processus et le sujet que nous proposons y participe.
L’objectif du stage sera de déterminer si l’absence de l’ADN polymérase Kappa perturbe la
réplication du génome de mammifère spontanément ou en réponse à des traitements provoquant
l’arrêt des fourches.
L’étudiant utilisera des techniques de biologie cellulaire, biologie moléculaire et biochimie
classiques (culture cellulaire, microscopie à fluorescence, extraction d’ADN génomique, digestion
enzymatique, western blot) mais aussi et surtout une technique originale, le peignage moléculaire
de l’ADN, permettant d’analyser à l’échelle de la molécule unique le programme de réplication des
cellules (vitesse des fourches de réplication, distance entre origines). L’analyse des données
acquises par peignage moléculaire nécessitera l’utilisation d’outils informatiques et statistiques.
Parallèlement à une formation technique, une formation théorique sera assurée afin que
l’étudiant(e) évolue vers plus d’autonomie dans la gestion des expériences.