Microbiologie appliquée et culture cellulaire - Collège Lionel

101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies
Département de biologie Collège Lionel-Groulx
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PLAN D’ÉTUDE
Contrôle individuel (15%)
CULTURE CELLULAIRE, VIROLOGIE ET MICROSCOPIE À FLUORESCENCE
1. Notions générales de culture cellulaire. (Doc #1 : Intro à la culture cellulaire)
1.1. But et défi de la culture cellulaire.
o Quels sont les principaux facteurs à contrôler in vitro permettant de recréer les conditions essentielles à la
survie des cellules?
1.2. Types de cellules cultivées in vitro.
o Indiquer la relation générale entre le niveau de différenciation cellulaire et la capacité de reproduction.
 Cellules souches.
o Décrire leurs caractéristiques générales.
o Distinguer deux grands types selon leur origine.
o Distinguer deux grands types selon la capacité de différenciation.
o Décrire brièvement comment les cellules souches constituent le système de régénération du corps.
 Cellules transformées.
o Distinguer transformation génétique naturelle et artificielle.
o Indiquer la principale utilité de travailler avec des cellules transformées.
1.3. Cellules normales adhérentes et non adhérentes.
o Montrer l’importance pour la culture de cellules normales in vitro d’un point d’ancrage, d’une
concentration initiale minimale et du phénomène d’inhibition de contact.
o Décrire le principal mode chimique utilisé pour le décollement des cellules adhérentes.
o Indiquer dans quelle circonstance il faut effectuer un changement de milieu et/ou un passage.
o Indiquer comment se distingue le pouvoir reproducteur des cellules tumorales de celui des cellules
normales en considérant les points d’ancrage et l’inhibition de contact.
1.4. Matériel et appareils importants.
o Décrire la composition générale du milieu de culture des cellules animales.
o Indiquer les 2 principales caractéristiques physicochimiques essentielles d’une solution de lavage.
o Indiquer deux raisons favorisant l’utilisation de flacons de types rectangulaires.
o Indiquer l’importance de cultiver les cellules animales dans des incubateurs à CO2.
o Expliquer brièvement la nécessité d’utiliser des microscopes de type «inversé» en culture cellulaire.
2. Types cellulaires et virus utilisés à Lionel. (Doc #2 : Chroniques DBT #1 – La Banque de Lionel.)
o Indiquer le type de cellules utilisées du point de vue
 de l’adhérence,
 de leur transformation génétique et de leur pouvoir de reproduction.
o Décrire brièvement la fonction cérébrale des astrocytes.
o Caractériser brièvement le virus utilisé, le MHV A59.
3. Congélation. (Doc #3 : Chronique DBT #2 – Une histoire de cristaux)
o Expliquer pourquoi la congélation peut être fatale pour la majorité des cellules animales.
o Indiquer les facteurs à considérer pour congeler des cellules avec succès concernant la température, la
vitesse de congélation et la composition chimique du milieu de congélation.
o Décrire brièvement le principe utilisé au labo concernant la vitesse de congélation.
o Décrire brièvement le principe d’action d’une substance protectrice comme le DMSO.
 Revoir l’exercice #1 pour compléter l’étude de ces 3 premières sections.

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4. Comptage. (Doc #4 : Comptage et Protocole de Passage)
o À partir d’une image au microscope de cellules sur un hémacytomètre,
 Suivre les règles de comptage et différencier les cellules mortes et viables.
 Évaluer le % de viabilité
 Évaluer la concentration de cellules viables
 Évaluer le volume à transférer lors d’un passage
 Évaluer le volume de milieu nécessaire pour compléter au volume final.
 Revoir l’exercice #2.
5. Infection virale.
o Définir un syncytium et expliquer brièvement comment une infection au MHV peut entraîner la
formation de syncytiums.
6. Immunofluorescence. (Protocole de Fixation et marquage à la phalloïdine)
o Préciser le rôle
 De la fixation au paraformaldéhyde
 De la perméabilisation au Triton X.
 Du marquage à la phalloïdine.
BACTÉRIOLOGIE ET PHAGES
7. Culture sur gélose. (Labo 1)
o La culture bactérienne sur gélose offre certains avantages par rapport à d’autres moyens. Quel est l’avantage
 D’utiliser des boîtes de Pétri plutôt que des tubes (éprouvettes)?
 D’utiliser de l’agar plutôt que de la gélatine?
8. Coloration et microscopie. (Labo 2)
o Préciser le rôle de l’huile minérale en microscopie à immersion.
o Décrire le principe de la coloration de Gram en tenant compte de la composition de la paroi des bactéries.
o Indiquer l’utilité d’effectuer une coloration de Gram plutôt qu’une coloration simple.
o Identifier les principaux arrangements possibles des coques et des bacilles.
9. Identification bactérienne. (Labo 4)
o Parmi les milieux utilisés pour les tests bactériologiques, distinguer milieux sélectifs et différentiels.
o Indiquer en quoi la composition des milieux suivants les rend sélectifs et/ou différentiels :
 Géloses McConkey, Mannitol-sel, gélose au sang.
o Décrire le principe de l’antibiogramme et indiquer son utilité.
o Du point de vue de leurs besoins en oxygène, distinguer les bactéries aérobies, anaérobies, facultatives.
10. Isolation de bactériophages. (Labo 3)
o Lors de la reproduction de phages par des bactéries, distinguer les cycles lytique et lysogénique.
o Indiquer le rôle de chacune des étapes du protocole utilisé au labo: amplification, purification, dilution, culture.
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