101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies PLAN D’ÉTUDE Contrôle individuel (15%) CULTURE CELLULAIRE, VIROLOGIE ET MICROSCOPIE À FLUORESCENCE 1. Notions générales de culture cellulaire. (Doc #1 : Intro à la culture cellulaire) 1.1. But et défi de la culture cellulaire. o Quels sont les principaux facteurs à contrôler in vitro permettant de recréer les conditions essentielles à la survie des cellules? 1.2. Types de cellules cultivées in vitro. o Indiquer la relation générale entre le niveau de différenciation cellulaire et la capacité de reproduction. Cellules souches. o Décrire leurs caractéristiques générales. o Distinguer deux grands types selon leur origine. o Distinguer deux grands types selon la capacité de différenciation. o Décrire brièvement comment les cellules souches constituent le système de régénération du corps. Cellules transformées. o Distinguer transformation génétique naturelle et artificielle. o Indiquer la principale utilité de travailler avec des cellules transformées. 1.3. Cellules normales adhérentes et non adhérentes. o Montrer l’importance pour la culture de cellules normales in vitro d’un point d’ancrage, d’une concentration initiale minimale et du phénomène d’inhibition de contact. o Décrire le principal mode chimique utilisé pour le décollement des cellules adhérentes. o Indiquer dans quelle circonstance il faut effectuer un changement de milieu et/ou un passage. o Indiquer comment se distingue le pouvoir reproducteur des cellules tumorales de celui des cellules normales en considérant les points d’ancrage et l’inhibition de contact. 1.4. Matériel et appareils importants. o Décrire la composition générale du milieu de culture des cellules animales. o Indiquer les 2 principales caractéristiques physicochimiques essentielles d’une solution de lavage. o Indiquer deux raisons favorisant l’utilisation de flacons de types rectangulaires. o Indiquer l’importance de cultiver les cellules animales dans des incubateurs à CO 2. o Expliquer brièvement la nécessité d’utiliser des microscopes de type «inversé» en culture cellulaire. 2. Types cellulaires et virus utilisés à Lionel. (Doc #2 : Chroniques DBT #1 – La Banque de Lionel.) o Indiquer le type de cellules utilisées du point de vue de l’adhérence, de leur transformation génétique et de leur pouvoir de reproduction. o Décrire brièvement la fonction cérébrale des astrocytes. o Caractériser brièvement le virus utilisé, le MHV A59. 3. Congélation. (Doc #3 : Chronique DBT #2 – Une histoire de cristaux) o Expliquer pourquoi la congélation peut être fatale pour la majorité des cellules animales. o Indiquer les facteurs à considérer pour congeler des cellules avec succès concernant la température, la vitesse de congélation et la composition chimique du milieu de congélation. o Décrire brièvement le principe utilisé au labo concernant la vitesse de congélation. o Décrire brièvement le principe d’action d’une substance protectrice comme le DMSO. Revoir l’exercice #1 pour compléter l’étude de ces 3 premières sections. Département de biologie 1 Collège Lionel-Groulx 101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies 4. Comptage. (Doc #4 : Comptage et Protocole de Passage) o À partir d’une image au microscope de cellules sur un hémacytomètre, Suivre les règles de comptage et différencier les cellules mortes et viables. Évaluer le % de viabilité Évaluer la concentration de cellules viables Évaluer le volume à transférer lors d’un passage Évaluer le volume de milieu nécessaire pour compléter au volume final. Revoir l’exercice #2. 5. Infection virale. o Définir un syncytium et expliquer brièvement comment une infection au MHV peut entraîner la formation de syncytiums. 6. Immunofluorescence. (Protocole de Fixation et marquage à la phalloïdine) o Préciser le rôle De la fixation au paraformaldéhyde De la perméabilisation au Triton X. Du marquage à la phalloïdine. BACTÉRIOLOGIE ET PHAGES 7. Culture sur gélose. (Labo 1) o La culture bactérienne sur gélose offre certains avantages par rapport à d’autres moyens. Quel est l’avantage D’utiliser des boîtes de Pétri plutôt que des tubes (éprouvettes)? D’utiliser de l’agar plutôt que de la gélatine? 8. Coloration et microscopie. (Labo 2) o Préciser le rôle de l’huile minérale en microscopie à immersion. o Décrire le principe de la coloration de Gram en tenant compte de la composition de la paroi des bactéries. o Indiquer l’utilité d’effectuer une coloration de Gram plutôt qu’une coloration simple. o Identifier les principaux arrangements possibles des coques et des bacilles. 9. Identification bactérienne. (Labo 4) o Parmi les milieux utilisés pour les tests bactériologiques, distinguer milieux sélectifs et différentiels. o Indiquer en quoi la composition des milieux suivants les rend sélectifs et/ou différentiels : Géloses McConkey, Mannitol-sel, gélose au sang. o Décrire le principe de l’antibiogramme et indiquer son utilité. o Du point de vue de leurs besoins en oxygène, distinguer les bactéries aérobies, anaérobies, facultatives. 10. Isolation de bactériophages. (Labo 3) o Lors de la reproduction de phages par des bactéries, distinguer les cycles lytique et lysogénique. o Indiquer le rôle de chacune des étapes du protocole utilisé au labo: amplification, purification, dilution, culture. ______________________________________ Département de biologie 2 Collège Lionel-Groulx