Soutenance de thèse de Mlle Samia Boukhenouna Le 17

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Soutenance!de!thèse!de!Mlle!Samia!Boukhenouna!
!Le!17!Novembre!2014!à!14h30!
Amphi!B250,!Faculté!de!médecine!
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Enzymologie+des+étapes+clés+de+régulation+du+système+Peroxyrédoxine+/+
Sulfirédoxine+dans+le+contexte+de+la+signalisation+cellulaire+redox.+
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Les!peroxyrédoxines!(Prx)!sont!des!peroxydases!à!thiol,!ubiquitaires,!qui!jouent!
un!rôle!central!dans!la!physiologie!du!peroxyde!d’hydrogène.!Une!famille!de!Prx!dite!"2F
CysFPrx! typique"! possède! une! propriété! unique! de! suroxydation! de! la! Cys! catalytique!
sous!forme!acide!sulfinique,!qui!constitue!un!mécanisme!de!régulation!des!fonctions!des!
2FCysFPrx!typiques!en!tant!que!peroxydase,!capteur!de!peroxyde!ou!protéine!chaperon.!
La!réduction!des!2FCysFPrx!typiques!suroxydées!est!catalysée!par!la!Sulfirédoxine!(Srx),!
une!sulfinyl!réductase!ATPFdépendante!dont!la!constante!catalytique!est!de!l’ordre!de!1F
2!minF1,!une!valeur!faible!qui!doit!être!corrélée!au!rôle!de!Srx!dans!la!régulation!redox.!
L’objectif! de! ce! travail! était! d’analyser! l’enzymologie! de! la! régulation! du! système!
Prx/Srx! au! niveau,! du! processus! de! suroxydation! des! 2FCysFPrx! typiques,! de! l’étape!
limitante!de!la!Srx,!et!de!son!recyclage!par!les!systèmes!redox!cellulaires.!
Dans! un! premier! temps,! nous! avons! caractérisé! les! deux! étapes! du! cycle!
catalytique! de! la! 2FCysFPrx! typique! majeure! de! S.# cerevisiae# Tsa1,! dont! la! compétition!
contrôle!la!sensibilité!à!la!suroxydation,!par!une!stratégie!combinant!cinétiques!rapides,!
système!enzymatique!couplé!et!modélisation!cinétique.!Ces!travaux!suggèrent!que!cette!
compétition! est! contrôlée! par! une! réorganisation! conformationnelle! au! cours! du! cycle!
catalytique! de! la! Tsa1.! Dans! un! second! temps,! l’étude! de! la! première! étape! du!
mécanisme! catalytique! de! Srx,! qui! consiste! en! l’activation! ATPFdépendante! du!
groupement!acide!sulfinique!de!la!2!CysFPrx!a!permis,!i)!de!montrer!que!l’étape!limitante!
de! la! réaction! catalysée! par! Srx! était! associée! au! processus! chimique! de! transfert! de!
phosphate,! et! ii)! de! proposer! un! modèle! d’assemblage! du! complexe! Michaelien!
Prx/Srx/ATP!formé!lors!de!ce!processus.!Enfin,!par!une!approche!combinant!cinétiques!
enzymatiques! in# vitro# et! génétique! de! la! levure! in# vivo,! nous! avons! établi! que! le!
mécanisme! de! recyclage! des! Srx! à! 1! Cys! existant! chez! les! plantes! ou! les! mammifères!
implique!le!rôle!du!glutathion!comme!réducteur!cellulaire,!contrairement!à!la!Srx!de!S.#
cerevisiae#qui!est!recyclée!par!le!système!thiorédoxine.!De!façon!inattendue,!la!spécificité!
du!glutathion!dans! ce!mécanisme! est! assurée!par! un!événement!de! reconnaissance!au!
sein!du!complexe!Prx/Srx.!
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