RECHERCHE D`UN DÉFICIT EN G6PD (glucose 6 phospho

RECHERCHE D'UN DÉFICIT EN G6PD (glucose 6 phospho-déshydrogénase)
Introduction :
Le déficit enzymatique le plus répandu du globule rouge est le déficit en G6PD
Il se traduit par une hémolyse importante suite à l'ingestion de certains médicaments ou de substances
oxydantes. L'hémoglobine est transformée en methémoglobine laissant apparaître des corps de Heinz dans
les hématies. La transmission de cette maladie est liée au sexe (chromosome X), les hommes seront donc
plus touchés que les femmes.
Principe :
L'hémoglobine est transformée en methémoglobine puis colorée par le bleu de méthylène.
Les hématies normales sont colorées, celles déficitaires en G6PD ne le sont pas.
Matériel :
6 tubes en verre à bouchon, réactifs.
Prélèvement:
 Pratiquer un prélèvement de sang veineux recueilli sur héparine ou mieux, sur citrate. L'héparine est
davantage conseillée, mais est plus chère que le citrate... voir le chapitre anticoagulants
 Pratiquer l'examen dans les 30 minutes qui suivent le prélèvement.
Technique :
Préparer trois tubes : témoin normal, témoin positif et patient. Le sang des tubes témoins proviennent d'un
individu ne possédant pas de déficit (personne ayant pu prendre de la quinine sans crise hémolytique par
exemple). Pour ne prélever le témoin qu'une seule fois, il est conseillé de pratiquer le diagnostic une fois par
semaine et donner rendez-vous aux patients le même jour à la même heure, l'analyse ne pouvant pas
attendre après le prélèvement.
TÉMOIN NORMAL
TÉMOIN POSITIF
PATIENT
 Déficit homozygote : la coloration du tube patient est brun / gris sombre comme le témoin positif.
 Déficit hétérozygote : la coloration va du rouge au brun selon l'intensité du déficit.
Causes d'erreurs
Le taux d'enzyme étant beaucoup plus élevé dans les réticulocytes que dans les hématies matures, il peut
être trouvé normal bien que les sujets soient porteurs d'un déficit en cas de forte réticulocytose après une
crise hémolytique. En cas de doute, réaliser une numération des réticulocytes.
Ne pas réaliser l'examen avant ingestion de drogues oxydantes.
Note :
La solution de nitrite ne se conserve pas bien (15 jours au réfrigérateur en flacon brun). On peut préparer
d'avance plusieurs tubes destinés aux témoins positifs et aux patient :
TÉMOIN POSITIF
PATIENT
On laisse ces tubes couchés sécher au soleil puis on les bouche hermétiquement. Ils restent stables 6 mois.
On peut utiliser la solution de bleu de méthylène pour des colorations.
Réactifs :
Solution de nitrite de sodium 0.18 M glucosée 0.28 M :
 Glucose : 4 grammes
 Nitrite de sodium : 1 gramme
 Eau distillée : 80 ml
Solution de bleu de méthylène :
 Bleu de méthylène trihydraté : 0.15g
 Eau distillée : 1 litre