DS 3 - Biologie

DS 3 - Biologie
NOM :
11a
But = connaître le rôle de l'internaline
1
Bactéries attachées à 100% (normalisé) pour WT et mutant (incertitudes) => pas d'effet de Inl sur la fixation
des bactéries sur la membrane.
2
Bactéries intracelluaires à 100 % pour WT mais 35% pour le mutant => rôle de l'internaline = permettre
l'entrée de la bactérie pathogène dans la cellule hôte.
2
11b
But = trouver sur quelle molécule de la cellule épithéliale se lie l'internaline
1
gel de chromatographie contenant de l'internaline qui va "pêcher" la protéine cible, retenue puis éluée
1
extrait cellulaire total : nombreuses protéines des cellules épithéliales Caco-2
1
La colonne permet de récupérer 2 protéines P110 et P80, dans les fractions 4 à 11
1
témoin = BSA : rien ne s'est lié au BSA. Donc spécificité de la liaison internaline / P110 ou P80
1
Comparaison de séquence pour identifier P110 et P80 : E-cadhérine
1
11c
But = relier la E-cadhérine avec l'internalisation de Listeria
1
Ac rouges révèle la E-cadhérine en surface de la cellule : pareil pour des cellules avec ou sans internaline =>
il y a de la E-cadhérine dans tous les cas
2
Ac verts révèlent les E-cadhérines qui sont à l'intérieur des cellules (rendues perméables aux Ac) : pas de E-
cadhérine si pas d'internaline mais de la E-cadhérine si internaline => l'internaline est nécessaire pour faire
entrer la E-cadhérine, protéine membranaire.
2
Hypothèse d'endocytose spécifique par liaison E-cadhérine / internaline de la mb bactérienne
1
12a
Comparaison des clichés bleu et vert : la bactérie de gauche est présente en vert mais pas en bleu donc elle
n'est pas extracellulaire mais intracellulaire. Elle a été internalisée.
2
la concentration de clathrine est importante qu niveau des bactéries, surtout celle internalisée. Pour celle de
droite, elle est probablement en cours d'endocytose.
2
Donc l'internalisation de Listeria ne se fait pas par phagocytose mais endocytose spécifique.
1
12b
But = préciser l'interaction E-cadhérine / clathrine
1
figure 6a - Cellules sauvages = témoin : 85% des bactéries ont lié la E-cadhérine 55% la clathrine
1
figure 6a - si la E-cadhérine est mutée, la bactérie peut la lier (% équivalent aux incertitudes près) mais ne
recrute plus que 5% de clathrine => les tyrosines de la E-cadhérine sont importantes pour lier la clathrine.
2
figure 6b - dans les 2 cas, la bactérie est internalisée => plus complexe ? Autre voie que endocytose ?
1
12c
Ac anti-tyrosine phosphorylée absent en début d'infection : absence de molécule phosphorylée
1
Ac anti-tyrosine visible entre 5 et 30 minutes et se lie à une protéine de 130 kDa
2
Absence de marquage si PP1 : Listeria induit donc la phosphorylation de tyrosine par la kinase Src
1
Identification de la protéine phosphorylée = E-cadhérine car même PM (130 kDa)
1
Cette phosphorylation des tyrosines est nécessaire pour recruter la clathrine (cf 12b)
1
SCHEMA BILAN
5
21a
Travail sur des membranes => protéines membranaires
1
détergent => on peut récupérer les protéines intrinsèques
1
western blot => identification de GLUT1 = une bande de protéine de 55 kDa environ
1
PM de GLUT1 = 220 kDa donc GLUT1 = protéine quaternaire de 4 sous-unités identiques de 55 kDa
1
21b
protéine intrinsèque avec des segments hydrophobes donc idée d'hélices transmembranires
1
12 hélices alpha transmembranaires (ou brins béta) car 12 domaines d'indice = 2 et 3 grandes boucles
extérieuresà la membrane car hydrophiles
2
21c
Ac fluorescent dirigé contre la boucle C-terminale. Ac ne traverse pas la membrane.
1
témoin sans ajout d'AC : jamais de fluorescence
1
Ac ne se fixe que si la membrane est inversée donc la boucle est cytosolique
2
SCHEMA DE GLUT1 : 4 sous-unités et les boucles + orientation
3
22
Membrane artificielle perméable => entrée proportionnelle à la concentration = diffusion simple avec une
pente = coefficient de perméabilité
1
membrane d'hématie : imperméable au L-glucose donc pas de diffusion, la membrane d'hématie est
imperméable au glucose
2
entrée de D-glucose très importante à faible concentration : GLUT1 fixe spécifiquement le D-glucose et
permet son entrée à travers la membrane imperméable = transporteur spécifique
2
effet de saturation pour plus de 8 mM de glucose avec un flux maximal de 500 mmol/s => idée d'un
transporteur saturé : à forte concentration en glucose, tous les GLUT1 sont occupés
2
glycémie de 1 g/l = 5,5 mM = presque le plateau
1
Rôle de GLUT1 = favoriser l'entrée du D-glucose donc l'approvisionnement des hématies
1
TOTAL
61
Compétences
A - recueillir des informations, analyser et hiérarchiser
2
B - Mobiliser les connaissances, structurer le raisonnement, maîtriser la causalité
2
C - Exercer son esprit critique, identifier un problème et remettre en cause un modèle
1
D - Présenter graphiquement les conclusions des analyses
2
E - Communiquer (syntaxe, précision, concision, soin, orthographe, présentation...)
2
TOTAL
70