ds_cinetique enzymatique par colorimetrie

CINETIQUE ENZYMATIQUE DE L’AMIDON PAR COLORIMETRIE
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Un faisceau lumineux d’intensité I , de longueur d’onde donnée, traversant une solution qui absorbe spécifiquement cette longueur d’onde, subit une perte d’intensité en fonction de la
concentration de la solution; seule une partie de l’intensité est transmise : « I ». Selon la loi de BEER-LAMBERT, l’absorbance A est proportionnelle à la concentration de la substance
absorbante. On parle aussi de D.O (densité optique)
L'amidon (Substrat) est coloré en bleu par l’iode alors que le maltose (Produit) ne l’est pas. On peut suivre ainsi la disparition du substrat et de ce fait l’apparition du produit.
PROTOCOLE
PRODUITS ET MATERIEL
MANIPULATION.
PARAMETRAGE ET ACQUISITION
PRODUITS :
AMIDON

 A partir d’empois d’amidon à 10%
réaliser 5 dilutions à :
-1
0.02/0.05/0.20/0.3/0.5 g. L
 Pour chaque dilution : 100ml d’amidon
dilué + 10 gouttes d’eau iodée

MAXILASE



 Solution d’amylase : enzyme du
commerce en sirop
EAU IODEE :
 Iodure de potassium (KI) = 10g. L
-1
 Iode = 5g. L
-1

*Voir notes fin de document








SCHEMA DU MONTAGE
PARAMETRAGE ………………….
Cliquer sur le bouton « configurer » de la barre de tâche de
« DATASTUDIO » et sélectionner « Transmittance rouge »
(660nm)

MATERIEL
Erlenmayer
T.A.E + portoir
Pipette de 5ml/ propipette
Microseringue (1ml)
Cuves pour spectroscope
 Matériel expérimental assisté par
z
ordinateur adapté
 Colorimètre
 REGLAGE DU « BLANC »…………………
Insérer une cuve contenant le « blanc » (5ml H2O + 1ml
amylase)
Fermer le couvercle
Presser el bouton vert situé sur le colorimètre
Une lumière s’allume : l’étalonnage est en cours

EAU DISTILLEE





PARAMETRAGE DE L’ORDINATEUR………………….
 Cliquer sur « démarrer DATASTUDIO »
 Une fenêtre « % de transmission » s’ouvre
ACQUISITION………………………….
Introduire 5ml de solution d’amidon dans 1 cuve
Injecter 1ml d’enzyme avec une microseringue
Fermer la cuve et agiter en retournant la cuve entre le
pouce et l’index. (il est essentiel d’être très rapide et de ne
pas toucher les parois de la cuve)
Placer la cuve dans l’emplacement prévu
Fermer le couvercle
Lancer la mesure
Enregistrer les données acquises (fichier / enregistrer
l’activité sous*)
eme
Lancer la 2 acquisition
COLORIMETRE
Couvercle
Emplacement de la cuve
Bouton de calibration
Cuves pour
colorimètre
Courbe paramétrique : Construire la courbe vi=f [substrat]
vi (vitesse initiale) = la pente de la courbe de la cinétique étudiée dans les premiers temps de la réaction.
 A l’aide de l’outil d’analyse, lire sur les courbes la disparition du substrat sur la zone où la pente est maximale
 Tracer la courbe « vitesse de réaction en fonction de la concentration de substrat »
 L’option tableur du logiciel « DATASTUDIO » peut vous aider à tracer cette courbe, il suffit d’introduire ces valeurs dans un tableau vierge puis d’effectuer un
glisser coller des données vers un nouveau graphique
RESULTATS
Résultats proposés par le fournisseur :
 Penser à agrandir la fenêtre afin d’avoir accès à la totalité des infos.
NOTES
 *Enregistrer un fichier : ne pas choisir « enregistrer l’activité » au risque d’écraser l’expérience du cahier
 Eviter les artéfacts en injectant le plus lentement possible l’enzyme
 Enzyme : on peut se procurer l’enzyme en pharmacie sans ordonnance (économique et parfaitement adaptée à la manipulation)