Synopsis-type Présentation projet de mémoire de DES d’Oncologie TITRE Caractérisation des cancers de l’ovaire et du sein associés à des dégénérescences cérébelleuses paranéoplasiques à anticorps anti-Yo PROMOTEUR EVENTUEL NA COORDINATEUR EVENTUEL NA TYPE D'ETUDE Recherche translationnelle Etude clinico-pathologique de cohortes rétrospectives RATIONNEL Les syndromes neurologiques paranéoplasiques (SNP) sont des entités rares (moins de 0.01% des cancers1) et sont probablement liés à une réaction auto-immune déclenchée par le cancer sousjacent2. Cette hypothèse auto-immune est suggérée par la présence pathognomonique d’auto-anticorps retrouvés dans le LCR ou le plasma des patients et la présence d’une infiltration immunitaire massive intra-tumorale dans les rares cas publiés de SNP3-8. Un des SNP les plus fréquents et les mieux caractérisés est la dégénérescence cérébelleuse paranéoplasique à anticorps anti-Yo (DCP-Yo). Les patientes atteintes de DCP-Yo présentent une ataxie cérébelleuse subaiguë liée à une destruction des cellules de Purkinje dans un contexte de cancer du sein ou de l’ovaire. Le diagnostic est posé par la présence d’anticorps anti-Yo qui reconnaissent CDR2, une protéine exprimée physiologiquement par les cellules de Purkinje mais qui est aussi fréquemment exprimée par les cancers de l’ovaire et du sein (environ 60 % des cas9). De ce fait, la physiopathologie de cette réaction immunitaire croisée n’est pas clairement élucidée10, l’expression de CDR2 n’étant pas suffisante pour déclencher une DCP-Yo. Cet élément fait évoquer un défaut de modulation des mécanismes de tolérance immunitaire vis-à-vis de CDR2 et potentiellement CDR2L, un paralogue de CDR2 également exprimé de manière physiologique par les cellules de Purkinje et récemment décrit comme une autre cible antigénique des anticorps anti-Yo11,12. Il est donc primordial de décrypter s’il existe une immunogénicité particulière de CDR2 et CDR2L dans ces tumeurs ainsi que de déchiffrer les mécanismes immunitaires impliqués dans cette levée de tolérance immune. Nous proposons de réaliser une étude de cohorte rétrospective qui recherchera des altérations moléculaires susceptibles d’induire une lever de tolérance immunitaire de CDR2 et CDR2Lpar CGH-array et NGS dans les cancers de l’ovaire et du sein associés aux DCP-Yo et caractérisera les infiltrats immunitaires intra-tumoraux par immunohistochimie et immunofluorescence. Cette étude propose un modèle original d’interaction immunité et cancer et sera la première à caractériser sur le plan histologique et moléculaire une cohorte conséquente de patientes atteintes de DCPYo. OBJECTIF PRINCIPAL OBJECTIFS SECONDAIRES CRITERES D’EVALUATION Caractérisation moléculaire des cibles antigéniques des anticorps anti-Yo (CDR2 et CDR2L) dans les cancers de l’ovaire et du sein associés aux DCP-Yo Caractérisation des infiltrats immunitaires intra-tumoraux des cancers de l’ovaire associés aux DCP-Yo Caractérisation histologique des cancers de l’ovaire ou du sein associés aux DCP-Yo Recueil des données cliniques des patientes atteintes de DCP-Yo associées au cancer de l’ovaire ou du sein Caractérisation moléculaire de CDR2 et CDR2L : - recherche d’une anomalie du nombre de copie d’ADN par CGHarray et comparaison à une cohorte contrôle de 126 cancers de l’ovaire et 10 cancers du sein sans DCP-Yo - recherche de mutation par NGS et comparaison au data base du TCGA et Cosmic - recherche de mutations constitutionnelles de CDR2 et CDR2L Caractérisation histologique des cancers du sein et ovaire associés aux DCP-Yo: - relecture anatomopathologique de l’ensemble des blocs tumoraux par un anatomopathologiste référent - quantification de l’expression de CDR2 et CDR2L en IHC Caractérisation des infiltrats immunitaires intra-tumoraux des cancers de l’ovaire associés aux DCP-Yo - caractérisation des infiltrats lymphocytaires en IHC (CD3, CD8, CD20, CD79a, Tbet, FoxP3) et en immunofluorescence (CD3, CD20, MECA-79) - caractérisation des cellules dendritiques en IHC (BDCA2, DClamp) CRITERES D’INCLUSION Collections des données cliniques (âge, date du diagnostic de cancer, date du diagnostic DCP-Yo, diagnostic anatomopathologique, stade TNM, date des dernières nouvelles/décès) Patientes atteintes d’une DCP-Yo associée à un cancer de l’ovaire ou du sein, déclarées entre 1995 et 2015 au Centre de Référence National des Syndromes Neurologiques Paranéoplasiques et répondant aux critères diagnostiques internationaux13 Confirmation anatomopathologique par biopsie ou exérèse chirurgicale d’un cancer du sein ou de l’ovaire, concomitant ou précédant la DCP-Yo ADN constitutionnel collecté par Neurobiotec non obligatoire CRITERES DE NON INCLUSION ESTIMATION DU POTENTIEL D’INCLUSIONS Bloc tumoral non disponible Absence de consentement à la collection des données cliniques et biologiques de Neurobiotec. 96 cas déclarés depuis 1995 au Centre de Référence des Syndromes Neurologiques Paranéoplasiques, dont 57 cancers de l’ovaire et 22 cancers du sein. HYPOTHESE STATISTIQUE NA NOMBRE DE PATIENTS Blocs tumoraux récupérés : - cancer de l’ovaire : n = 25 - cancer du sein : n = 11 4 ans DUREE PREVISIBLE DE L'ETUDE CALENDRIER Date de début : novembre 2014 PREVISIONNEL AVEC Date de fin prévue : mai 2018 DATE DE DEBUT ET DE FIN Ce travail a été initié dans le cadre d’un master 2 de Recherche en Cancérologie entre 2014 et 2015 (recueil des données clinicobiologiques des cancers de l’ovaire associés au DCP - Yo, CGHarray sur les cas et contrôles, quantification et analyse des infiltrats immunitaires des cancers de l’ovaire DCP - Yo). Ce travail s’est poursuivi au delà du master 2 avec l’extension de la cohorte aux cancers du sein DCP-Yo (collecte des blocs tumoraux et des données clinico-biologiques, quantification des infiltrats immunitaires, collection de la cohorte contrôle, CGH-array sur les cas et contrôles) et réalisation d’un séquençage en NGS sur ADN somatique et constitutionnel des cibles antigéniques des cohortes seins et ovaires DCP-Yo. La contribution à ce travail regroupe l’acquisition des données, l’analyse et interprétation des données et la rédaction du manuscrit pour publication (premier auteur, en cours). TUTEUR Dr Virginie Desestret MCU-PH, Neurologie-Histologie Service de Neurologie D, Hôpital neurologique Pierre Wertheimer, Lyon Faculté de Médecine Lyon-Sud, Histologie Institut NeuroMyoGène, Équipe Synaptopathies et Autoanticorps (SynatAc) INSERM U1217 / UMR CNRS 5310 tél: 0472118041 [email protected] FINANCEMENT ASPECTS REGLEMENTAIRES CPP ANSM CNIL Lyric Grant INCa-DGOS-4664 Avis favorable du CPP de Lyon (Sud-Est IV). NA Base de données Neurobiotec du Centre de Référence des Syndromes Neurologiques Paranéoplasiques accréditée pour le recueil des données cliniques et biologiques. BIBIOGRAPHIE 1. Darnell RB, Posner JB. Paraneoplastic syndromes involving the nervous system. N Engl J Med 2003;349(16):1543–54. 2. Dalmau J, Rosenfeld MR. Paraneoplastic syndromes of the CNS. The Lancet Neurology 2008;7(4):327–40. 3. Cooper R, Khakoo Y, Matthay KK, et al. Opsoclonusmyoclonus-ataxia syndrome in neuroblastoma: histopathologic features-a report from the Children's Cancer Group. Med Pediatr Oncol 2001;36(6):623–9. 4. Verschuuren J, Chuang L, Rosenblum MK, et al. Inflammatory infiltrates and complete absence of Purkinje cells in anti-Yo-associated paraneoplastic cerebellar degeneration. Acta Neuropathol 1996;91(5):519–25. 5. Storstein A, Krossnes BK, Vedeler CA. Morphological and immunohistochemical characterization of paraneoplastic cerebellar degeneration associated with Yo antibodies. Acta Neurologica Scandinavica 2009;120(1):64–7. 6. Sutton IJ, Steele J, Savage CO, Winer JB, Young LS. An interferon-γ ELISPOT and immunohistochemical investigation of cytotoxic T lymphocyte-mediated tumour immunity in patients with paraneoplastic cerebellar degeneration and anti-Yo antibodies. Journal of Neuroimmunology 2004;150(1-2):98–106. 7. Cao Y, Abbas J, Wu X, Dooley J, van Amburg AL. Anti-Yo positive paraneoplastic cerebellar degeneration associated with ovarian carcinoma: case report and review of the literature. Gynecologic Oncology 1999;75(1):178–83. 8. Peterson K, Rosenblum MK, Kotanides H, Posner JB. Paraneoplastic cerebellar degeneration. I. A clinical analysis of 55 anti-Yo antibody-positive patients. Neurology 1992;42(10):1931–7. 9. Darnell JC, Albert ML, Darnell RB. Cdr2, a target antigen of naturally occuring human tumor immunity, is widely expressed in gynecological tumors. Cancer Research 2000;60(8):2136–9. 10. Zaborowski MP, Spaczynski M, Nowak-Markwitz E, Michalak S. Paraneoplastic neurological syndromes associated with ovarian tumors. J Cancer Res Clin Oncol 2014; 11. Eichler TW, Totland C, Haugen M, et al. CDR2L Antibodies: A New Player in Paraneoplastic Cerebellar Degeneration. PLoS ONE 2013;8(6):e66002. 12. Schubert M, Panja D, Haugen M, Bramham CR, Vedeler CA. Paraneoplastic CDR2 and CDR2L antibodies affect Purkinje cell calcium homeostasis. Acta Neuropathol 2014;128(6):835–52. 13. Graus F. Recommended diagnostic criteria for paraneoplastic neurological syndromes. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry 2004;75(8):1135–40.