Anthocyanes

2
ème
Année de Pharmacie
2010-2011
TP de Diagnose végétale
1ère semaine
Février 2011, Joël Reynaud, Isabelle Kerzaon
1
suite
Pigments végétaux
A l'automne, le changement de couleur de nombreuses feuilles
avec passage du vert au rouge est dû à la disparition
de la chlorophylle et à l'enrichissement en pigments contenus dans
les vacuoles (anthocyanes) ou dans des chromoplastes (caroténoïdes).
Chez quelques familles (Cactacées, Chénopodiacées, Phytolaccacées,…)
les anthocyanes sont remplacées par des bétalaïnes.
• rappels sur la cellule végétale
• épiderme d’oignon
• anthocyanes chez la vigne vierge
• anthocyanes chez le sumac vénéneux, un hamamélis et le raisin noir
• anthocyanes chez Sedum sieboldii
• épiderme avec anthocyanes
• chromoplastes
• bétalaïnes chez Phytolacca americana
• épiderme avec anthocyanes (et stomates) avant et après ajout de NH4OH
• tanins dans la tige de rosier
2
suite
La cellule végétale
Dans une cellule
épidermique, la
vacuole occupe
presque tout le
volume cellulaire.
encore peu
développée ici
(ne pas retenir
les légendes, sauf
celles soulignées
en rouge qui
indiquent les
caractéristiques
de la cellule végétale).
Rappel : une cellule correspond à un ensemble d’ultra structures.
Dans le cas d’une cellule végétale âgée, toutes les ultra structures sont plaquées contre
la membrane plasmique par le développement très important de la vacuole.
3
Liste diapos
suite
Epiderme de la face interne d’une écaille d’oignon
Très grande vacuole
occupant presque
tout le volume (ici, pas
De pigments)
Membrane plasmique
non visible car collée
contre la paroi squelettique
A
Noyau visible
(ce qui signifie que
la cellule est morte)
B
A
Paroi squelettique
ou
Pectocellulosique
Paroi cellulosique cellule A
Lamelle pectique
Paroi cellulosique cellule B
Liste diapos
B
4
suite
Les ANTHOCYANES (appartenant aux Flavonoïdes)
sont contenues dans les vacuoles des cellules épidermiques
de nombreuses fleurs et de nombreux fruits
Paroi squelettique
Cellule blanche
donc sans
Anthocyanes
Cellule rose
contenant des
Anthocyanes
(roses car
milieu acide)
Quand les cellules
sont mortes, les
noyaux (toujours
présents) deviennent
visibles
Liste diapos
5
suite
Anthocyanes dans les feuilles d’une vigne vierge
ici Parthenocissus quinquefolia
(à feuilles composées palmées avec 5 folioles)
Liste diapos
6
suite
Anthocyanes
chez le sumac vénéneux
Rhus toxicodendron
(= Toxicodendron radicans)
gamme de couleurs
détail de la feuille
composée de 3 folioles
chez un Hamamélis
dans les baies
de raisin noir
Liste diapos
7
suite
Anthocyanes dans les feuilles
de Sedum sieboldii (Crassulacées)
détail des feuilles
verticillées par 3
Liste diapos
8
suite
Les BETALAÏNES (qui remplacent les anthocyanes dans certaines familles)
sont également contenues dans les vacuoles
Ex dans les feuilles (et les baies) de Phytolacca americana (Phytolaccacées)
Fin d'été
Feuilles vertes : chlorophylle
Liste diapos
Automne
Feuilles rouges : bétalaïnes
9
suite
Après ajout d'ammoniaque :
* Les anthocyanes (et les bétalaïnes) se dégradent en milieu basique (virage de rose
à brunâtre avec passage fugace par bleu-violet)
* Le contenu des stomates passe de l'incolore au jaune, ce qui révèle la présence
de flavones-flavonols (incolores avant) qui se dégradent également en milieu basique.
Les stomates devenus jaunes
Stomate
incolore
Ajout d'ammoniaque 1%
(pH > 7)
Montage dans l'eau
(pH 6-7)
Liste diapos
10
suite
Pigments dans chromoplastes
ex : tomate
chromoplastes contenant
du lycopène (caroténoïde)
grande cellule
ovoïde contenant
des chromoplastes
à sa périphérie
Liste diapos
11
suite
chromoplastes
de jonquille
chromoplastes
avec caroténoïdes
chez une algue
chromoplastes
d'alkékenge
Liste diapos
12
suite
Cellules à tanins dans la moelle de la tige de rosier
Ici, les pigments sont dans des cellules situées au centre de la tige
et non pas dans les cellules superficielles de l’épiderme
Cellules du parenchyme (+ou- rondes)
Cellules à tanins (anguleuses)
Bulle d'air !
Détail de la paroi
avec canalicules
Liste diapos
Contenu vacuolaire devenu
bleu-noir en présence de
suite
chlorure
13 ferrique
Paroi très épaisse
avec canalicules
Cellules à tanins
Bulle d'air !
Liste diapos
14
suite
CHROMATOGRAPHIE
Limite de migration
du solvant
Définition
Au cours d’une chromatographie,
un mélange de composés est déposé
sur une phase fixe au travers de
laquelle passe une phase mobile qui
entraîne les différents constituants du
mélange à des vitesses différentes
suivant les affinités qu’ils ont avec la
phase fixe et avec la phase mobile.
Composé A
Composé B
Phase fixe
(papier, poudre
de silice, de
polyamide, etc.)
Les techniques chromatographiques
permettent de séparer les différents
composés d'un extrait végétal donné
(anthocyanes, flavones, flavonols, alcaloïdes….)
dépôt :
mélange
(A+B+C+D)
Liste diapos
Composé C
Avant
migration
Phase
mobile
(liquide
ou gaz)
15
Composé D
(il n’a pas
migré)
Après
migration
suite
Chromatographie d’Anthocyanes
(ici une chromatographie sur couche mince de cellulose)
observation en lumière visible
Front de migration
(=limite de migration
du solvant)
Pour les différents termes
à connaître, voir la
chromatographie des
aglycones flavoniques
A, B, C et D
sont des pigments
anthocyaniques.
Cliquez ici
On les repère bien
dans le mélange après
migration.
A
B
C
Liste diapos
D
Mélange
(A+B+C+D)
16
suite
Chromatographie d’aglycones flavoniques
(ici une chromatographie sur couche mince de Polyamide) observation sous UV
Plaque recouverte de poudre
de polyamide (phase fixe)
On peut calculer
pour chaque produit
un Rf (" rapport
frontale ")
Front de migration du solvant
Rf = d/D
par exemple, le
Rf de ce spot = 0,78
D
Rf= 0 : pas de migration
Rf= 1 : migration jusqu'au
front du solvant
d
Sens de migration
(déplacement) du
solvant (phase mobile)
lutéoline
quercétine kaempférol apigénine mélange
Liste diapos
17
dépôt
début