Acleiencephalie experimentale in vitro

Acleiencephalie experimentale in vitro
par HUBERT LUTZ et YVONNE LUTZ-OSTERTAG1
Laboratoire de Zoologie generate et appliquee de la Faculte des Sciences de Clermont-Ferrand
AVEC UNE PLANCHE
LE terme d'acleiencephalie (du grec /cAetco = je ferme) a ete cree par Ancel (1955)
pour designer les monstres chez qui la gouttiere nerveuse reste ouverte. C'est la
une malformation qui peut etre obtenue experimentalement par des procedes
divers: par action des rayons
X (Kaven, 1938; Snell, 1941; Warkany & Schraffen-
berger, 1947; Russell, 1950; Hicks, 1953); par action ultra-sons (Lutz & Lutz-
Ostertag,
1957); par action de substances variees (Ancel, 1955; Lefevre-Boisselot,
1951; Giroud & Martinet, 1957); par anoxie (Gallera, 1951; Buchner, Riib-
saamen,
& Rothweil, 1951; Naujoks, 1953; Mushett, 1953; Buchner, 1955; Lutz
&Lepy, 1958).
Une interessante etude
a ete consacree recemment a cette malformation par
Giroud
& Martinet (1957). Us observent en particulier que le tube encephalique
ne se ferme pas au niveau du prosencephale et du mesencephale. Malgre cela
une organogenese presque normale s'effectue: des bulbes olfactifs s'y develop-
pent ainsi que des corps stries et des plexus choroides. II se constitue ainsi un
encephale ouvert, de grande dimension. Ce n'est que secondairement que des
processus de necrose detruisent une grande partie de ces formations.
Dans des experiences anterieures nous avons deja montre que l'acleience-
phalie peut etre obtenue par action des ultra-sons sur le blastoderme non incube.
Dans ces experiences, le blastoderme est irradie a nu; l'oeuf est alors referme et
ne sera ouvert, d'apres la technique d'Et.
Wolff, qu'apres l'apparition de l'appa-
reil circulatoire
(2\ a 3 jours de developpement). II n'est done pas possible
d'assister
a la mise en place de la malformation. Nous avons done imagine de
reprendre ces experiences
in vitro, a un stade ou le blastoderme, d'apres les
donnees de nombreux auteurs, se cultive facilement, e'est-a-dire au stade
de
ligne primitive. Des experiences preliminaires in vivo nous avaient montre que
des irradiations aux ultra-sons provoquent encore
a ce stade, la malformation
desiree.
Les cultures in vitro doivent ainsi nous permettre d'observer la formation de
l'acleiencephalie.
1 Authors' address: Laboratoire de Zoologie generate
et appliquee, 1, Avenue Vercinge'torix,
Clermont-Ferrand, France.
[J. Embryol. exp. Morph. Vol. 6, Part 3, pp. 504-508, September 1958]

ACLE1ENCEPHAL1E EXPERIMENTAL^ IN VITRO 505
MATERIEL ET TECHNIQUES
Les blastodermes au stade de ligne primitive ou de prolongement cephalique
sont preleves sur des oeufs de Poule de race Gatinaise. Les irradiations aux ultra-
sons sont faites a une frequence de 1000 kHz et de 0,9 Wcm2 de puissance
pendant 5 minutes. Us sont ensuite cultives dans des salieres sur milieu gelose
(milieu standard modifie de Wolff
& Haffen, 1952).
Les embryons temoins sont cultives de la meme facon — mais sans subir
d'irradiations aux ultra-sons.
RESULTATS EXPERIMENTAL^
Le developpement des embryons temoins, non irradies, est sensiblement
normal (Planche, fig. 1), 30 embryons sur 31 sont normaux; un tel resultat peut
etre facilement obtenu a condition d'eviter toute dessiccation possible.
Par contre, les embryons irradies presentent, dans 95 pour cent des cas (100
cas sur 106) la malformation recherchee.
Des le stade 3 somites la plaque nerveuse, situee en avant des somites, est plus
etalee que normalement (fig. 2) et reste sur le meme plan que l'epiderme voisin.
Mais l'acleiencephalie ne devient vraiment caracteristique et facilement recon-
naissable qu'a partir du moment ou le tube nerveux troncal se ferme (stade 7 a 8
somites) (fig. 3, 4, et 5). L'encephale reste aplati; ses bords sont legerement
releves du fait meme que le soulevement de l'embryon s'effectue normalement;
les bords de la plaque nerveuse semblent alors etre legerement epaissis, alors
que la region centrale laisse voir la chorde par transparence.
Or a un stade tel que celui-la, les bords de la plaque nerveuse devraient etre
entierement releves et soudes dorsalement; les principales vesicules de l'ence-
phale devraient etre apparentes.
On remarque cependant que meme le 'plateau cephalique' des acleiencephales
presente quelques differentiations; les regions anterieures, moyennes et pos-
terieures sont separees par de legeres constrictions visibles macroscopiquement;
de meme, au niveau du diencephale on entrevoit, dans certains cas, sur le bord
du plateau, des invaginations correspondant aux evaginations laterales du dien-
cephale pour la mise en place des vesicules optiques primaires.
Ces caracter.es ne font que s'accentuer aux stades suivants; ainsi a un stade
de 20 a 21 somites (fig. 6 et 7), les bords du plateau cephalique presentent des
constrictions tres nettes, divisant, dans tous les cas, le 'plateau cephalique' en
3 regions; l'ensemble ressemble a une feuille lobee. Sur les bords de ce plateau
on observe un leger soulevement; c'est a ce niveau que se place la separation
entre le materiel nerveux et le materiel ectoblastique. Ce soulevement est plus
marque dans la region anterieure; les vesicules optiques sont, dans certains cas,
visibles lateralement.
Enfin, vers le
3feme jour de culture (stade 30 a 40 somites), s'effectue la flexion
caracteristique de la tete; dans la region anterieure l'ectoderme
s'est fortement

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souleve et recouvre partiellement la region anterieure du 'plateau cephalique';
a ce niveau l'encephale de l'embryon parait alors etre normal. Lateralement
l'ectoderme effectue un soulevement analogue, sans pourtant recouvrir le sys-
teme nerveux.
La mise en place des vesicules auditives et dans certains cas, la formation des
vesicules optiques (fig. 8 et
9) avec differentiation du cristallin est facile a suivre
en etude histologique. Pres du diencephale, des epaississements de la lame ner-
veuse correspondent au debut de la formation des corps stries.
Dans les experiences que nous signalons ici, nos observations ne portent que
sur l'encephale. Mais comme il
s'agit de resultats obtenus a partir d'irradiations
totales, des malformations peuvent aussi etre relevees
au niveau du systeme
nerveux troncal (formation de spina bifida), du materiel somitique
et de l'em-
placement des bourgeons des ailes et des pattes.
DISCUSSION ET CONCLUSION
Le blastoderme de Poulet, pris au stade de la ligne primitive, se cultive bien in
vitro', ce fait a deja ete signale par Waddington (1932) et par Spratt (1948) qui
ont employe differents milieux,
a base de plasma sanguin, de jus d'embryon,
de jaune d'ceuf ou meme des milieux synthetiques. Le developpement de ces
embryons est sensiblement normal.
Si ces embryons sont prealablement irradies aux ultra-sons,
on observe la
formation d'embryons acleiencephales. II est ainsi possible de suivre heure par
heure le developpement de cette malformation. La non-fermeture de la gouttiere
nerveuse anterieure provoque la formation d'une sorte de 'plateau cephalique'.
Malgre cette grave perturbation, ce systeme tend
a realiser ses prestations nor-
males: dans certains cas, l'evagination des vesicules optiques primaires apparait
ici sous forme d'invaginations qui peuvent cependant induire un cristallin; cette
invagination s'effectue tres lateralement,
au contact meme de l'ectoderme, si
bien que l'oeil pourra se former a son emplacement normal (fig. 8). Des constric-
tions apparaissent lateralement qui vont diviser
le cerveau en ses principales
regions; sur
le 'plancher' on voit des differentiations — peu caracteristiques
encore
a ces stades — mais qui correspondent aux corps stries.
Giroud
& Martinet (1957) ont parfaitement analyse ces formations chez l'em-
bryon de Rat, sur des stades de developpement plus avances, et
y ont reconnu
des corps stries, des plexus choroides.
Ces monstres acleiencephales peuvent done subir
au niveau de l'encephale
une organogenese tres poussee; Ancel (1955) signale deja que l'encephale ouvert
des Oiseaux prend un developpement normal.
La culture
in vitro de cette malformation permet ainsi une analyse du de-
veloppement de l'acleiencephalie.
II n'y a pas reduction du materiel nerveux
ou de ses possibilites comme le nom d'anencephalie, generalement donne a cette
malformation, pourrait le faire admettre; il y a seulement absence de ces mouve-
ments morphogenetiques qui transforment la plaque nerveuse en un tube ner-

ACLE1ENCEPHAL1E EXPERIMENTALE IN VITRO 507
veux. Cela n'empeche pas l'organogenese et l'histogenese dans leur ensemble.
Les differentes parties de la 'feuille lobee' qui se developpe, correspondent aux
hemispheres, aux lobes optiques et au cervelet. Enfin, il est interessant de signa-
ler la flexion de la tete; elle aura pour effet un leger recouvrement — mais
secondaire — de la region anterieure de la plaque encephalique; elle simule, a
ce niveau, Peffet obtenu normalement par la fermeture de la plaque neurale.
Cette flexion aura aussi pour effet le relevement des bords lateraux de la plaque
encephalique — mais dans la region moyenne de cette plaque, elle ne pourra
subvenir aux deficiences morphologiques anterieures.
RESUME
Les auteurs decrivent dans ce travail les premiers stades du developpement de
l'acleiencephalie; l'absence de mouvements morphogenetiques anterieurs, qui
ferment la gouttiere nerveuse, entraine la formation d'une plaque encephalique;
celle-ci subit cependant des differentiations morphologiques et histologiques
comparables a celles d'un embryon normal. Les phenomenes de flexion de la
tete pourront entrainer une fermeture anterieure de cette plaque ainsi que le
relevement de ses bords lateraux.
SUMMARY
In this work the authors describe the early stages of development of acleien-
cephaly. The absence of the morphogenetic movements which normally close
the neural tube leads to the formation of a plate-like brain which undergoes
morphological and histological differentiation comparable to that of a normal
embryo. The usual phenomena of flexure of the head can cause an anterior
closure of this plate into a tube and also the elevation of its lateral borders.
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EXPLICATION DE LA PLANCHE
FIG. 1. Embryon de Poulet de 3 somites obtenu en culture in vitro a partir d'un blastoderme au
stade de ligne primitive.
FIG. 2 a 7. Embryons de Poulet acleiencephales a differents stades du developpement, obtenus
en culture in vitro apres irradiation aux ultra-sons du blastoderme au stade de ligne primitive.
L'embryon de la figure 2 pre"sente une region anterieure (futur materiel cephalique) plus e'tale'e
qu'un embryon normal du meme stade (fig. 1). Dans les figures 3 a 7 il y a de"jsi, formation d'une
veritable plaque cephalique lobe'e.
FIG. 8. Coupe transversale du 'plateau ence"phalique' au niveau du dience"phale avec l'invagina-
tion formant les ve"sicules optiques primaires.
FIG. 9. Formation de cristallin chez un embryon acleience'phale.
(Manuscript received 24: ii: 58)