Présentation PowerPoint - IJPB

http://www.versailles-grignon.inra.fr/pciv/
Institut National de la Recherche Agronomique,
Centre de Versailles-Grignon,
RD10, 78026 Versailles CEDEX
Atelier cytogénétique
Arabidopsis thaliana
. Caryotypage de nouvelles lignées.
. Etudes cytologiques de la méiose (DAPI,
Immunodétection et FISH)
FISH sur chromosomes
Chromosome 1 sonde : 10 BACs
13,5
12,5
11
9,5
8,5
7
5,
5
3,5Mb
2,5Mb
0
Pachytène
Atelier microscopie et imagerie
Rh123 et PI
GUS en réflection
Méristème
Observation de matériel fixé Observation de matériel vivant
- Protéines fluorescentes :
- Simple marquage
- Multi marquage
- Sondes vitales :
CFP GFP YFP RFP
Peroxysome Vacuoles Nucléole
Noyau Cytoplasme RE + golgi Actine
Noyau + cytopl.Chloroplaste
Memb. plasmique
Golgi Endosome + PM
Localisome
527 nm
Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC)
N-YFP C-YFP YFP
Atelier Immunolocalisation
La PCIV compte 7 permanents INRA (2 IR, 1 IE, 4 AI) et regroupe les activités et les équipements d'imagerie cellulaire nécessaires aux recherches menées par les équipes de l'IJPB :
microscopie confocale, analyse d'images, histologie, immunocytochimie, hybridation in situ, cytogénétique appliquées à la recherche en biologie végétale. Le laboratoire dispose
d'équipements de haute technologie permettant l'imagerie sur cellules végétales vivantes et fixées. La plateforme est organisée en 4 activités distinctes (Microscopie,
Cytogénétique, Hybridation in situ et Immunolocalisation). Les prestations sont variables selon ces activités et peuvent être de différent types :
Complet : réalisation complète de l’expérience par les agents de la plateforme selon les protocoles en cours.
Environné : la personne vient sur la plateforme et réalise l’expérience sous la direction et avec l’aide des agents de la plateforme, les protocoles de la plateforme et tout
l’environnement nécessaire.
Solo (non environné) : Utilisation du matériel et des protocoles seuls. Ceci n’est possible que si une prestation environnée a déjà été réalisée dans des conditions satisfaisantes. Le
Solo n’est pas applicable pour toutes les techniques. Les prix des prestations sont indiqués sur la page « tarifs » du site web de la plateforme.
L'équipement disponible comprend 3 microscopes confocaux à balayage laser (dont deux microscopes spectraux), un microscope confocal à technologie spinning disk, une station
de microdissection laser, 2 microscopes à épifluorescence rapides, dont un équipé en lumière structurée, 5 microscopes à épifluorescence classiques, une loupe à fluorescence, 4
microtomes, un ultramicrotome, un vibratome, et divers petits matériels et pièces optiques nécessaires aux opérations d’inclusion et de traitement des échantillons. Les images
réalisées sont stockées sur un serveur dédié d’une capacité de 10 To utiles, sauvegardé de façon journalière. Au sein de la plateforme, les mises au point techniques, la
maintenance, la gestion, la formation et l'encadrement des utilisateurs sont assurés par le personnel permanent.
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Whole mount
Embryon
Sur coupes
S. lycopersicum
A. caerulea
S.tuberosum
P. sativum
Hybridations in situ Immuno-histochimie
Sur coupes Whole mount
-En routine sur A. thaliana et sur d’autres espèces
l’ancolie, la tomate, la pomme de terre, la cardamine, le
pois, le melon…
- Développement : plantes entières et RT-PCR in situ.
-En routine chez A. thaliana (marquages simples et multiples)
-Développement sur plantes entières
Histologie et cytologie
Création d’une banque de colorants
spécifiques sur différents organes de
différentes espèces.
Colza
2n=38
AACC
Navette
2n=20
AA
Etude de la méiose chez le Colza et la Navette
Brassicacae
Etude cytologique de la méiose chez les polyploïdes
naturels et les hybrides synthétiques de Brassica.
L. Gissot, O. Grandjean L. Chelysheva, D. Vezon
K. Belcram, A. Berger, H. Morin
GFP libre
Forte anisotropie :
Pas d’interaction
0,01
0,39
Anisotropie d’émission de fluorescence
Interactions protéine-protéine
Tandem GFP
Faible anisotropie :
Interaction
Reconstruction 3D
EmbryonPointe racinaire Chromosomes
Immunodétection de différentes
protéines au cours de la méiose
DMC1MRE11 RAD51
MER3 ZYP1 MLH1
Analyse du taux de recombinaison et de
l’interférence chez A. thaliana
Lignine
Noyaux, réserves protéiques
Gus Amidon, callose
Bleu de toluidine
Amidon et Tanins Mucilage
Callose
Simple marquage: Marquages multiples:
C. melo
A. thaliana
A. thaliana
A. thaliana
Plateforme de Cytologie et Imagerie Végétale
Atelier Hybridation in situ A. Berger, H. Morin