PRESENTATION D'UN MODELE PERMETTANT DE DETERMINER LA DATE DE VACCINATION CONTRE LA MALADIE DE GUMBORO DU POULET DE CHAIR UTILISANT UN VACCIN VIVANT A SOUCHE « INTERMEDIAIRE » Lemière Stéphane Laboratoire Merial, Antenne aviaire et cunicole, Saint-Herblon 44153 Ancenis Résumé L’objectif de l’étude est de vérifier expérimentalement chez le poulet standard et le poulet label si les dates cibles de vaccination contre la maladie de Gumboro, recommandées par le fabricant pour un vaccin à souche intermédiaire, sont bien adaptées. La vérification consiste à déterminer les titres ELISA moyens, minima et maxima des anticorps d’origine maternelle anti-Gumboro autour de J1 puis d’en déduire, à partir d’abaques de décroissance de ces taux d’anticorps, la date cible de vaccination à encadrer. Les élevages recrutés pour l'étude proviennent de différentes régions de production avicole en France. Aucun critère de recrutement n'est proposé si ce n'est la prescription par le vétérinaire traitant du vaccin Gumboro produit par le laboratoire Merial. La date cible recommandée de J14 pour le poulet standard correspond parfaitement au résultat expérimental obtenu dans les conditions du terrain de J15+/-0,5 jours (95% des valeurs moyennes comprises dans cet intervalle.) Chez le poulet label la recommandation de vaccination aux dates de J21 et J28 seront révisées pour mieux correspondre au résultat expérimental et seront J20 et J24 correspondant respectivement aux résultats de J20+/-0,6 et de J24+/0,6 (95% des valeurs moyennes comprises dans cet intervalle.) Néanmoins en l'absence de données historiques en sérologie Gumboro sur un site de production il sera recommandé d'établir vers J1 (entre J1 et J3) un diagnostic sérologique afin de contrôler le statut immunitaire des poussins mis en place. Introduction La maladie de Gumboro est une maladie virale du poulet due à un Birnavirus. Il s'agit d'un virus à ARN double brin non enveloppé d'un diamètre d'environ 60 nm. On décrit deux sérotypes de Birnavirus, le sérotype 1 et le sérotype 2. Le pouvoir pathogène des virus est éminemment variable. Ce virus omniprésent est très persistant dans le milieu extérieur des volailles. Il est très résistant aux agents physiques (pH extrêmes, température élevée, etc…) et chimiques (désinfectants usuels non virucides.) Le virus se transmet par voie orale et se multiplie in vivo dans les organes lymphoïdes du poulet, notamment la bourse de Fabricius, source des lymphocytes B chez les oiseaux. Les lymphocytes B sont les cellules effectrices de l'immunité à médiation humorale et sont les cellules souches des plasmocytes producteurs d'anticorps. La maladie de Gumboro se manifeste cliniquement suivant deux formes et selon la date de contamination : immunodépression plutôt durant les deux premières semaines d'âge et forme clinique classique de la maladie de Gumboro plutôt entre 3 et 6 semaines d'âge. L'immunodépression est due à une atteinte sélective de la lignée lymphocytaire B. Les conséquences cliniques de l'immunodépression sont l'apparition d'affections à germes opportunistes, à virus ou bactéries, la diminution de l'efficacité des vaccinations et les retards de croissance. Dans la forme classique de la maladie de Gumboro il est décrit chez le poulet une diarrhée profuse à l'origine d'une dégradation de la litière et une baisse de performances. Le tableau lésionnel est caractéristique : les masses musculaires sont maculées de pétéchies dues à des hémorragies et la bourse de Fabricius présente une inflammation aiguë dans les jours suivant la multiplication virale puis s'atrophie. La vaccination contre la maladie de Gumboro du poulet standard s'effectue par voie orale via l'eau de boisson en élevage à l'aide d'une souche vaccinale dite "intermédiaire." Dans le cas de la souche proposée par le laboratoire Merial il s'agit de la souche atténuée S706 (Mazariegos L.A. et Al., 1990.) Le titre de la dose vaccinale du vaccin est tel qu'il permet d’obtenir dans les conditions de laboratoire sur poussins SPF 100% de protection contre la souche hypervirulente de référence F52/70 et une souche terrain hypervirulente Algérie 93. Les témoins contemporains non vaccinés montrent une totale absence de protection (0% dans les deux cas.) En comparaison à l’aide d’une souche « intermédiaire » classique la protection obtenue est respectivement de 70% contre la souche F52/70 et de 35% contre la souche Algérie 93 (données expérimentales Merial non publiées.) 1. Matériels et méthodes Le programme de vaccination des bandes incluses dans l'étude en poulet standard est basé sur l'administration dans les conditions habituelles d'un vaccin vers J14, voire de deux vaccins si nécessaire, en cas de mise en place d'un programme Cinquièmes Journées de la Recherche Avicole, Tours, 26 et 27 mars 2003 en milieu à risques. Le programme de vaccination en poulet label est basé sur l'administration de deux vaccins vers J21 puis J28. En effet l'âge de la vaccination dépend du titre en anticorps d'origine maternelle du poussin, à cause de la neutralisation in vivo par les anticorps des virus vaccinaux, et de la vitesse d'élimination de ces anticorps. Les anticorps anti-Gumboro sont titrés à partir de prélèvements de sérum au laboratoire par la technique ELISA. Quel que soit le kit ELISA utilisé, la cinétique d'élimination des anticorps d'origine maternelle chez le poulet standard est modélisée par la technique dite des "demi-vies." Le titre en anticorps ELISA du poussin durant les premiers jours de vie diminue suivant le modèle proposé. Des abaques de détermination de date cible ont été à cette fin mis au point (figures 1 et 2.) La demi-vie estimée chez le poulet standard est égale à 4 jours. Tous les 4 jours le titre initial diminue de moitié. Ainsi par exemple à J5 le titre est la moitié de celui présent à J1 et ainsi de suite. Le seuil retenu quel que soit le kit ELISA utilisé est de 500. La valeur du seuil retenu dans le cadre de l’étude est justifiée en théorie par les résultats de protection obtenus in vivo chez le poussin EOPS (cf. § Introduction.) La date à laquelle ce seuil est atteint est la date cible de vaccination. La demi-vie estimée chez le poulet label est égale à 6 jours. La date théorique chez le poulet standard correspond à J14 s'il est issu de reproducteurs « chair » vaccinés à l'aide d'un vaccin inactivé Gumboro en émulsion huileuse avant l'entrée en ponte. Les dates théoriques sont dans ce cas J21 et J28 chez le poulet label. Si une sérologie est effectuée à J1 pour affiner le calcul, il est déterminé la date cible de vaccination (Jvaccination) que l'on encadrera de 2 jours au cas où le coefficient de variation serait inférieur à 30%. La première vaccination sera pratiquée à Jvaccination - 2 jours et la seconde à Jvaccination + 2 jours. Au cas où le coefficient de variation serait supérieur à 30%, la date de vaccination est encadrée de 3 jours. Dans ce cas la première vaccination sera pratiquée à Jvaccination 3 jours et la seconde à Jvaccination + 3 jours. Les élevages recrutés pour l'étude proviennent de différentes régions de production avicole en France. Aucun critère de recrutement n'est proposé si ce n'est la prescription par le vétérinaire traitant du vaccin Gumboro produit par le laboratoire Merial. Les données relatives au suivi clinique des lots vaccinés sont transmises par le vétérinaire au laboratoire Merial. Les paramètres de suivi sont les suivants : La moyenne arithmétique des moyennes des titres ELISA Idexx, KPL et Guil’Hay quel que soit le type de production, standard ou label, est respectivement de (risque alpha = 5 %) : 5526 +/543 (n = 44), 5698 +/- 498 (n=27) et 5217 +/- 231 (n=85.) a) moyenne arithmétique des titres ELISA à J1 suivant utilisation de kits disponibles au laboratoire (Idexx, KPL, Guild'Hay, voire CIV dans le cadre de l'étude) pour poulets standard et label, b) moyenne arithmétique des titres ELISA minimum et maximum au même âge de l'ensemble des séries pour poulets standard et label, c) moyenne arithmétique des coefficients de variation de l'ensemble des séries pour poulets standard et label, d) jour cible moyen pour poulets standard ou jour moyen de la première vaccination et de la deuxième vaccination pour poulets label. 2. Résultats Pour les poulets standard (n = 79) : a) moyenne arithmétique des titres ELISA = 5249+/-360 (risque alpha = 5%), b) moyenne arithmétique des titres minimum = 2846 et moyenne arithmétique des titres maximum = 8243, c) moyennes arithmétique des coefficients de variation = 28%, d) jour cible moyen = J15+/-0,5 jour (risque alpha = 5%.) 47 % des analyses sont effectuées à l'aide du kit Idexx, 30 % en KPL et 23 % en Guild'Hay. Pour les poulets label (n = 88) : a) moyenne arithmétique des titres ELISA = 5331+/-275 (risque alpha = 5 %), b) moyenne arithmétique des titres minimum = 3735 et moyenne arithmétique des titres maximum = 7119, c) moyenne arithmétique des coefficients de variation = 20 %, d) jour cible moyen = J22 donc jour moyen de la première vaccination = J20+/-0,6 jour et jour moyen de la deuxième vaccination = J24+/-0,6 jour (risque alpha = 5 %.) 76% des analyses sont effectuées à l'aide du kit Guild'Hay, 8% en KPL, 3% en Idexx et 11% avec un autre kit non pris en compte dans l’analyse des résultats pour cause d’effectif trop faible (11 moyennes sur 167 au total.) Aucun échec de vaccination n’est rapporté dans le cadre de l’étude, que ce soit en poulet standard ou en poulet label, dégradation de performances ou maladie de Gumboro clinique. 3. Discussion La modélisation de la décroissance des anticorps anti-Gumboro d'origine maternelle a déjà fait l'objet de recherches et a montré que celle-ci était possible (Kouwenhoven B. et Al., 1992.) Selon cette méthode, à la base, chez le poulet standard, il est considéré que la racine carrée des titres calculés en anticorps anti-Gumboro à J1 ou J2 diminue en moyenne de 2,82 par jour. Le seuil de titre à atteindre est de 500. Seul le titre le plus élevé des trois premiers quartiles correspondant au titre du sérum situé en position ¾ de la série de sérums classés par ordre croissant de titre est pris en compte pour le calcul de la date cible de vaccination. Cinq exemples sont présentés dans le tableau 1. Les résultats montrent la similitude entre les deux modèles chez le poulet standard. Les résultats de sérologies proviennent de la mise en œuvre au laboratoire de différents kits de diagnostic ELISA Gumboro. L'étude prend en compte un échantillon représentatif de la répartition par types de kits d'analyses proposés en sérologie Gumboro vers J1 dans les laboratoires d'analyses vétérinaires en France. Les résultats obtenus provenant de régions diverses et de sites de production tout venant montrent une homogénéité remarquable aussi bien en production standard qu'en production label. Cette homogénéité des titres ELISA vers J1 liée au statut immunitaire des reproducteurs "chair" permet de mettre à l'épreuve des conditions du terrain la définition des dates théoriques de vaccination. La moyenne des titres moyens et l’intervalle de confiance (risque alpha = 5 %) dans lequel se trouvent les moyennes des 3 kits pris en compte montrent que le calcul de la date cible de vaccination à l’aide des abaques se fera dans 2 cas sur 3 cas à partir de la valeur arrondie de 5500 et dans l’autre cas à partir de la valeur 5000. Le résultat ne variera que d’un jour cible pour un Moyenne arithmétique Titre le plus élevé des trois premiers quartiles** (cf § Discussion) Date cible selon calcul Merial Date cible encadrée pour deux vaccinations selon calcul Merial Date cible selon calcul Deventer ensemble de 156 élevages de poulets standard et label, ce qui dans les conditions diverses d’élevage est le signe d’une remarquable homogénéité. Conclusion La recommandation des dates cibles de vaccination des bandes de poulets en production standard ou label est confirmée par les résultats de l'étude. La date recommandée de J14 correspond parfaitement à la date de J15+/-0,5 jours (95 % des valeurs moyennes comprises dans cet intervalle.) Chez le poulet label la recommandation de vaccination aux dates de J21 et J28 seront révisées pour mieux correspondre à la prédiction de basée sur les titres des anticorps à 1 jour d’âge et seront J20 et J24 correspondant respectivement aux résultats de J20+/-0,6 et de J24+/-0,6 (95 % des valeurs moyennes comprises dans cet intervalle.) Néanmoins en l'absence de données historiques en sérologie Gumboro sur un site de production il sera recommandé d'établir vers J1 (entre J1 et J3) un diagnostic sérologique afin de contrôler le statut immunitaire des poussins mis en place. Ces résultats seront interprétés à l'aide des abaques de détermination de date cible de vaccination à encadrer. Références bibliographiques Mazariegos L.A., Luckert P.D. & Brown J., 1990, Avian Dis., 34, 203-208. Kouwenhoven B. & van den Bos J., 1992, World Poultry Congress, Amsterdam, the Netherlands, 465-468. Exemple 1 817* 1049 1582 2227 2246 2381 2672 2602 2828 3461 3601** 4285 4631 4672 4754 Exemple 2 2248 3570 3680 3990 4146 4956 5206 5251 5548 5685 5845** 6121 6863 7212 7329 Exemple 3 1723 1744 2270 2270 2654 2676 3066 3175 3570 4191 4213** 4370 4572 5024 15216 Exemple 4 3613 3657 4707 4922 5157 5194 5285 5330 5547 5674 6133** 6168 6260 7389 9876 2927 3601 J11 ou J12 J10 puis J14 5177 5845 J14 ou J15 J13 puis J17 J13 ou J14 4049 4213 J13 ou J14 J12 puis J16 J12 ou J13 5659 6133 J14 ou J15 J13 puis J17 J13 ou J14 J10 ou J11 Exemple 5 2294 2556 2821 3030 3287 3322 3415 3439 3451 3462 3698 3900 4007 4126 4584** 5174 5247 5259 5300 5304 3884 4584 J12 ou J13 J11 puis J15 J11 ou J12 * moyenne des titres ELISA d’anticorps anti-Gumboro par ordre croissant pour chaque série de sérums TABLEAU 1 : Exemples de calculs de dates de vaccination selon modélisation Merial et Deventer . ABAQUE DE DETERMINATION DE DATE CIBLE DE VACCINATION GUMBORO POULET STANDARD* 10000 9500 9000 8500 8000 7500 7000 6000 5500 5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 J7 J8 J9 J10 J11 J12 J13 J14 J15 J16 J17 J18 J19 J20 FIGURE 1 : Abaque de détermination de date cible de vaccination Gumboro en production poulet standard ABAQUE DE DETERMINATION DE DATE CIBLE DE VACCINATION GUMBORO POULET LABEL* 10000 9500 9000 8500 8000 7500 7000 6500 titres ELISA Gumboro entre J1 et J3 titres ELISA Gumboro entre J1 et J3 6500 6000 5500 5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 J7 J8 J9 J10 J11 J12 J13 J14 J15 J16 J17 J18 J19 J20 J21 J22 J23 J24 J25 J26 J27 J28 J29 J30 FIGURE 2 : Abaque de détermination de date cible de vaccination Gumboro en production poulet label