OSNA® dans le Cancer du Côlon – Stadification améliorée par une

OSNA® dans le Cancer du Côlon – Stadification améliorée par
une détection optimisée des métastases ganglionnaires
Dans le cancer du côlon, le suivi du statut des ganglions
lymphatiques constitue le principal facteur pronostic.
Conformément aux recommandations thérapeutiques, tant
nationales qu’internationales, une chimiothérapie adju-
vante n’est pas recommandée pour les patients chez qui
aucune métastase n’a été observée dans un ou plusieurs
ganglions lymphatiques, à l’exception des patients à risque
élevé (T combiné à d’autres caractéristiques tumorales).
C’est pourquoi une stadification correcte du patient revêt
une importance capitale pour l’optimisation des choix
thérapeutiques.
À l’heure actuelle, la stadification ganglionnaire du cancer
du côlon consiste en un examen histopathologique
post-opératoire d’un minimum de 12 ganglions lympha-
tiques par section colorée à l’hématoxyline-éosine. Près
de 30 % des patients présentant une atteinte de stade II,
développent cependant une récidive locale ou des métas-
tases à distance dans les 5 années suivant l’intervention
chirurgicale avec pour conséquence des taux de survie
significativement moindres []. On estime que cette récidive
est liée à la portée limitée de l’analyse du tissu ganglion-
naire qui néglige une proportion importante des métas-
tases entrainant ainsi un taux significatif de faux-négatifs
compris entre 11 % et 24 % [].
Le concept du ganglion lymphatique sentinelle, qui pourrait
faciliter considérablement la stadification ganglionnaire à
partir d’une analyse détaillée de quelques ganglions, n’est
pour l’heure pas établi pour le cancer du côlon. Par ailleurs,
l’examen en profondeur de tous les ganglions lymphatiques
réséqués par coupes sériées et marquage IHC est long et
coûteux et ne constitue donc pas un élément de pratique
quotidienne.
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Fig. 1 : Principe de la méthode OSNA®
Détection en temps réelAmplificationCentrifugation
Homogénéisation
 minutes  minute  minutes ;  °C
Analyse des ganglions lymphatiques par OSNA®
OSNA® (One Step Nucleic Acid Amplification, ou amplifica-
tion d’acide nucléique en une étape) est un test moléculaire
déjà couramment utilisé pour la détection des métastases
ganglionnaires dans le cancer du sein. Il constitue aussi
une solution de choix pour l’analyse détaillée des ganglions
lymphatiques dans le cancer du côlon et donc une meil-
leure stadification. La méthode OSNA® est une procédure
automatisée qui repose sur la technologie d’amplification
rapide d’acide nucléique (RT-LAMP*) pour détecter le
niveau d’expression des ARNm de la cytokératine  (CK).
La cytokératine  est un marqueur des cellules épithéliales
qui n’est normalement pas détectable dans un tissu
ganglionnaire sain. Le tissu ganglionnaire est simplement
homogénéisé et, après une courte étape de préparation,
les échantillons sont placés dans le système RD-i de
détection en temps réel. Jusqu’à quatre échantillons
peuvent être analysés en parallèle, les résultats étant
disponibles en 30 minutes environ (Fig. 1).
Les résultats sont divisés en trois catégories (++, +, –)
avec corrélation directe du nombre de copies mesurées
d’ARNm CK. Ceci permet, non seulement de diérencier
les échantillons positifs et négatifs, mais donne également
une indication sur l’étendue de la charge tumorale. En
autorisant l’analyse de l’ensemble du ganglion lympha-
tique, cette méthode permet d’atteindre une sensibilité
maximale et fournit une base fiable pour les choix théra-
peutiques.
n sensibilité accrue par rapport aux méthodes
conventionnelles
n procédure automatisée et standardisée
n stadification améliorée
n résultats disponibles plus rapidement,
en peropératoire si nécessaire
n réduction de la charge de travail en pathologie
* RT-LAMP = Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification ; licence d’utilisation avec l’accord d’Eiken Chemical Co., Ltd

Études de validation clinique et résultats
L’adéquation de CK en tant que marqueur a été démon-
trée dans une phase de pré-évaluation au cours de laquelle
CK a été testée sur des ganglions lymphatiques positifs
et négatifs d’un point de vue histologique et comparée à
d’autres marqueurs (Fig. 2). Les résultats ont montré que
CK était le marqueur des métastases ganglionnaires
orant la plus grande sensibilité et la meilleure spécificité
dans le cancer du côlon.
Les études d’évaluation [] ont comparé la méthode
OSNA® à un examen histopathologique détaillé au cours
duquel les ganglions lymphatiques étaient coupés en
4 tranches. Les tranches étaient soumises à une analyse
OSNA® ou à une histologie multi-niveaux sur des sections
permanentes. Les sections provenaient de 5 niveaux, avec
des rubans d’intervalle de 200 m. En résumé, quelques
1 000 ganglions lymphatiques ont été analysés et ont
présenté les performances suivantes :
Dans le cadre de l’étude japonaise, la spécificité de la
méthode a été confirmée par l’analyse de 136 ganglions
lymphatiques prélevés sur des patients pN.
Le nombre de copies d’ARNm de CK sur tous les ganglions
lymphatiques négatifs, analysés dans ces conditions s’est
avéré bien inférieur à la valeur-seuil, permettant ainsi de
conclure à une spécificité de 100 %. Ce résultat indique
clairement que le risque de résultats faux positifs peut être
quasiment exclu (Fig. 3).
Cette évaluation de performance donne une première
indication du potentiel de majoration de stade oert par la
méthode. Ces performances ont été confirmées par un
second essai clinique achevé récemment et dont les
données seront bientôt publiées. L’analyse des ganglions
lymphatiques par OSNA® a révélé une majoration de stade
d’environ 26 % comparé à l’histologie conventionnelle.
Taux de concordance . 
Sensibilité . 
Spécificité . 
Fig. 2 : Analyse de 28 GL positifs prélevés sur 19 patients et 38 GL
prélevés sur 11 patients pN
Histopathologie
Concentration d’ARNm (copies/L)
Fig. 3 : Analyse de 136 GL prélevés sur des patients pN
Nombre de GL
ARNm CK19 (copies/µL)
ND
~ 20
~ 40
~ 60
~ 80
~ 100
~ 120
~ 140
~ 160
~ 180
~ 200
~ 220
~ 240
~ 260
140
120
100
80
60
40
20
0
valeur-seuil
250 copies/µL

OSNA® en utilisation quotidienne
La simplicité de la procédure de préparation et la grande
vitesse de réaction rendent le système très flexible pour
une utilisation quotidienne. Il permet une analyse peropé-
ratoire optionnelle des ganglions lymphatiques sentinelles
identifiés par cartographie in-vivo (sentinel lymph node
mapping, SLNM), un examen post-opératoire des senti-
nelles (cartographie ex-vivo) et une ultrastadification de
plusieurs ganglions lymphatiques.
Le système OSNA® constitue une solution de choix pour
diérents besoins cliniques mais avec un seul but,
l’amélioration de la stadification et de la prise de décision
au bénéfice des patients atteints d’un cancer du côlon.
n résultats rapides et précis
n amélioration de la stadification et de la prise en
charge des patients
n base fiable pour les choix thérapeutiques
n mise en place plus précoce du traitement
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Références bibliographiques
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Analyse
peropératoire
SLNM in-vivo jusqu’à  GL
en  minutes
Analyse
post-opératoire
SLNM ex-vivo jusqu’à  GL
en  minutes
Analyse
post-opératoire
GL frais ou
congelés
 GL ou plus
en  heures
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