OSNA® dans le Cancer du Côlon – Stadification améliorée par une
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OSNA® dans le Cancer du Côlon – Stadification améliorée par une détection optimisée des métastases ganglionnaires Dans le cancer du côlon, le suivi du statut des ganglions lymphatiques constitue le principal facteur pronostic. Conformément aux recommandations thérapeutiques, tant nationales qu’internationales, une chimiothérapie adjuvante n’est pas recommandée pour les patients chez qui aucune métastase n’a été observée dans un ou plusieurs ganglions lymphatiques, à l’exception des patients à risque élevé (T4 combiné à d’autres caractéristiques tumorales). C’est pourquoi une stadification correcte du patient revêt une importance capitale pour l’optimisation des choix thérapeutiques. À l’heure actuelle, la stadification ganglionnaire du cancer du côlon consiste en un examen histopathologique post-opératoire d’un minimum de 12 ganglions lymphatiques par section colorée à l’hématoxyline-éosine. Près de 30 % des patients présentant une atteinte de stade II, développent cependant une récidive locale ou des métastases à distance dans les 5 années suivant l’intervention chirurgicale avec pour conséquence des taux de survie significativement moindres [1]. On estime que cette récidive est liée à la portée limitée de l’analyse du tissu ganglionnaire qui néglige une proportion importante des métastases entrainant ainsi un taux significatif de faux-négatifs compris entre 11 % et 24 % [2]. Le concept du ganglion lymphatique sentinelle, qui pourrait faciliter considérablement la stadification ganglionnaire à partir d’une analyse détaillée de quelques ganglions, n’est pour l’heure pas établi pour le cancer du côlon. Par ailleurs, l’examen en profondeur de tous les ganglions lymphatiques réséqués par coupes sériées et marquage IHC est long et coûteux et ne constitue donc pas un élément de pratique quotidienne. www.sysmex.fr Homogénéisation 5 minutes Centrifugation Amplification 1 minute 16 minutes ; 65 °C Détection en temps réel Fig. 1 : Principe de la méthode OSNA® Analyse des ganglions lymphatiques par OSNA® OSNA® (One Step Nucleic Acid Amplification, ou amplification d’acide nucléique en une étape) est un test moléculaire déjà couramment utilisé pour la détection des métastases ganglionnaires dans le cancer du sein. Il constitue aussi une solution de choix pour l’analyse détaillée des ganglions lymphatiques dans le cancer du côlon et donc une meilleure stadification. La méthode OSNA® est une procédure automatisée qui repose sur la technologie d’amplification rapide d’acide nucléique (RT-LAMP*) pour détecter le niveau d’expression des ARNm de la cytokératine 19 (CK19). La cytokératine 19 est un marqueur des cellules épithéliales qui n’est normalement pas détectable dans un tissu ganglionnaire sain. Le tissu ganglionnaire est simplement homogénéisé et, après une courte étape de préparation, les échantillons sont placés dans le système RD-100i de détection en temps réel. Jusqu’à quatre échantillons peuvent être analysés en parallèle, les résultats étant disponibles en 30 minutes environ (Fig. 1). Les résultats sont divisés en trois catégories (++, +, –) avec corrélation directe du nombre de copies mesurées d’ARNm CK19. Ceci permet, non seulement de différencier les échantillons positifs et négatifs, mais donne également une indication sur l’étendue de la charge tumorale. En autorisant l’analyse de l’ensemble du ganglion lymphatique, cette méthode permet d’atteindre une sensibilité maximale et fournit une base fiable pour les choix thérapeutiques. nsensibilité accrue par rapport aux méthodes conventionnelles nprocédure automatisée et standardisée nstadification améliorée nrésultats disponibles plus rapidement, en peropératoire si nécessaire nréduction de la charge de travail en pathologie * RT-LAMP = Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification ; licence d’utilisation avec l’accord d’Eiken Chemical Co., Ltd Dans le cadre de l’étude japonaise, la spécificité de la méthode a été confirmée par l’analyse de 136 ganglions lymphatiques prélevés sur des patients pN0. 140 120 128 100 80 60 valeur-seuil 250 copies/µL 40 ~ 260 ~ 220 ~ 240 ~ 200 1 ~ 160 ~ 120 ~ 100 ~ 60 ~ 80 ~ 40 ND Concentration d’ARNm (copies/μL) 1 ~ 180 6 0 ~ 140 20 ~ 20 Nombre de GL Études de validation clinique et résultats L’adéquation de CK19 en tant que marqueur a été démontrée dans une phase de pré-évaluation au cours de laquelle CK19 a été testée sur des ganglions lymphatiques positifs et négatifs d’un point de vue histologique et comparée à d’autres marqueurs (Fig. 2). Les résultats ont montré que CK19 était le marqueur des métastases ganglionnaires offrant la plus grande sensibilité et la meilleure spécificité dans le cancer du côlon. ARNm CK19 (copies/µL) Fig. 3 : Analyse de 136 GL prélevés sur des patients pN0 Histopathologie Fig. 2 : Analyse de 28 GL positifs prélevés sur 19 patients et 38 GL prélevés sur 11 patients pN0 Les études d’évaluation [3–5] ont comparé la méthode OSNA® à un examen histopathologique détaillé au cours duquel les ganglions lymphatiques étaient coupés en 4 tranches. Les tranches étaient soumises à une analyse OSNA® ou à une histologie multi-niveaux sur des sections permanentes. Les sections provenaient de 5 niveaux, avec des rubans d’intervalle de 200 μm. En résumé, quelques 1 000 ganglions lymphatiques ont été analysés et ont présenté les performances suivantes : Taux de concordance 96.7 % Sensibilité 95.0 % Spécificité 97.1 % Le nombre de copies d’ARNm de CK19 sur tous les ganglions lymphatiques négatifs, analysés dans ces conditions s’est avéré bien inférieur à la valeur-seuil, permettant ainsi de conclure à une spécificité de 100 %. Ce résultat indique clairement que le risque de résultats faux positifs peut être quasiment exclu (Fig. 3). Cette évaluation de performance donne une première indication du potentiel de majoration de stade offert par la méthode. Ces performances ont été confirmées par un second essai clinique achevé récemment et dont les données seront bientôt publiées. L’analyse des ganglions lymphatiques par OSNA® a révélé une majoration de stade d’environ 26 % comparé à l’histologie conventionnelle. OSNA® en utilisation quotidienne La simplicité de la procédure de préparation et la grande vitesse de réaction rendent le système très flexible pour une utilisation quotidienne. Il permet une analyse peropératoire optionnelle des ganglions lymphatiques sentinelles identifiés par cartographie in-vivo (sentinel lymph node mapping, SLNM), un examen post-opératoire des sentinelles (cartographie ex-vivo) et une ultrastadification de plusieurs ganglions lymphatiques. Analyse peropératoire SLNM in-vivo jusqu’à 4 GL en 40 minutes Analyse post-opératoire SLNM ex-vivo jusqu’à 4 GL en 40 minutes Analyse post-opératoire GL frais ou congelés 12 GL ou plus en 2 heures Le système OSNA® constitue une solution de choix pour différents besoins cliniques mais avec un seul but, l’amélioration de la stadification et de la prise de décision au bénéfice des patients atteints d’un cancer du côlon. nrésultats rapides et précis de la stadification et de la prise en charge des patients nbase fiable pour les choix thérapeutiques nmise en place plus précoce du traitement namélioration Références bibliographiques [1] Jemal A et al. (2009) : Cancer Statistics, 2009. CA Cancer J Clin 59 : 225 – 249. [2] ahbari NN et al. (2012) : Molecular detection of tumor cells R in regional lymph nodes is associated with disease recurrence and poor survival in node-negative colorectal cancer : a systematic review and meta-analysis. J Clin Onco 30(1) : 60 – 70. [4] Yamamoto et al. (2011) : OSNA-Based Novel Molecular Testing for Lymph Node Metastases in Colorectal Cancer Patients. Ann Surg Oncol 8 : 1891 – 8. [5] Güller et al. (2012) : Epub – Molecular investigation of lymph nodes in colon cancer patients : a new road to better staging? Cancer doi : 10.1002/cncr.27667. [3] Croner et al. (2010) : One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA) – a new method for lymph node staging in colorectal carcinomas. J Transl Med 8 : 83. Distributeur en France : Sysmex France S.A.S. © Copyright 2016 – Sysmex Europe GmbH 22 Avenue des Nations, ZAC Paris Nord 2, CS 51414 Villepinte, 95944 Roissy CDG Cedex, France · Téléphone +33 1 48170190 · Fax +33 1 48632350 · [email protected] · www.sysmex.fr Vendeur agréé : Sysmex Europe GmbH Bornbarch 1, 22848 Norderstedt, Allemagne · Téléphone +49 40 52726-0 · Fax +49 40 52726-100 · [email protected] · www.sysmex-europe.com Fabricant : Sysmex Corporation 1-5-1 Wakinohama-Kaigandori, Chuo-ku, Kobe 651-0073, Japon · Téléphone +81 78 265-0500 · Fax +81 78 265-0524 · www.sysmex.co.jp Veuillez trouver l’adresse de votre représentant local : www.sysmex-europe.com/contacts ZE000565.FR.C.04/16 Le design et les caractéristiques techniques peuvent être sujets à des modifications dues au progrès technique. Ce dispositif médical est un produit de santé réglementé qui porte, au titre de cette réglementation, le marquage CE. 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