Les Milieux de Culture en Bactériologie

BIO303 Rédigé par Chringel
Page | 1
Les Milieux de Culture en
Bactériologie
Les Milieux de Culture
Gélose au Cétrimide - milieu sélectif
Composition
 Mélanges d’acides aminés, facteurs de croissance : peptone
 Glucide et dérivés : /
 Autres molécules carbonées : /
 Indicateurs S2- : /
 Inhibiteurs : cétrimide (antiseptique), acide nalidixique
 Divers : /
 Indicateurs de pH : /
 Ions minéraux : chlorure de magnésium MgCl2, sulfate de potassium K2PO4,
hydrogénophosphate de potassium
 Agar : oui
 Eau : oui
Caractéristiques
 Milieu proche du King A, favorise la production de pyocyanide.
 Milieu relativement pauvre.
 Acide nalixidique : inhibiteur des Gram –
 Cétrimide : inhibiteur des Grams + donc des Gram – par extension.
 Ensemencement en cadran.
Usage
 Recherche des Pseudomonas, notamment Pseudomonas earuginosa.
Lecture
 Incubation 24h à 37°C :
Développement Pseudomonas aeruginosa et éventuellement Pseudomonas putida,
Pseudomonas stutzeri et Pseudomonas maltophilia.
 Incubation 24h à 42°C :
Développement presque exclusif de Pseudomonas aeruginosa.
 Pyocyanine : milieu bleu
 Pyoverdine : milieu jaune-vert  indicateur de la présence de Pseudomonas

BIO303 Rédigé par Chringel
Page | 2
Gélose de Chapman – milieu sélectif
Composition
 Mélanges d’acides aminés, facteurs de croissance : Peptones, extrait de viande
 Glucides et dérivés : /
 Autres molécules carbonées : mannitol
 Indicateur S2- : /
 Inhibiteurs : NaCl à 75g/L
 Divers : /
 Indicateurs de pH : rouge de phénol
 Ions minéraux : NaCl
 Agar : oui
 Eau : oui
Caractéristiques
 Permet la croissance des bactéries halophiles.
 Très forte concentration en NaCl permettant l’inhibition des Gram-
 Permet l’étude de l’attaque du mannitol (si baisse du pH, alors teinte jaune)
 Ensemencer richement en stries ou cadran.
 Incubation : 24-48h
Usage
 Isolement de Staphylococcus aureus.
 Numération des staphylocoques.
Lecture
 Si Staphylococcus aureus : colonie jaunes avec halo clair. Mannitol +
Les autres colonies sont Mannitol -.
Contamination possible par Enterococcus et certains Bacillus.

BIO303 Rédigé par Chringel
Page | 3
Drigalski – milieu sélectif
Composition
 Mélanges d’acides aminés, facteurs de croissance : Peptones, extraits de viande et levure
 Glucide et dérivés : Lactose
 Autres molécules carbonées : /
 Indicateurs S2- : /
 Inhibiteurs : Cristal violet, Désoxycholate de sodium
 Divers : /
 Indicateurs de pH : Bleu de Bromothymol
 Ions minéraux : Thiosulfate de sodium
 Agar : oui
 Eau : oui
Caractéristiques
 Cristal violet : inhibe les bactéries Gram +
 Désoxycholate de sodium : inhibe les bactéries Gram +
 Sélectionne les bactéries Gram –
 Inoculation en cadran.
Usage
 Isolement des entérobactéries.
Lecture
 Bactéries lactose + : colonies jaunes (utilisation du lactose)
 Bactéries lactose - : colonies bleu-vert
Lexique
Mannitol : utilisé pour étudier sa voie d’attaque par les bactéries (fermentation…).
Bleu de Bromothymol : vert (basique) et jaune (acide)
Entérobactéries : bactéries se trouvant dans les cavités internes des êtres vivants comme
l’appareil digestif.
Rouge de phénol : rouge (basique) à jaune (acide)

BIO303 Rédigé par Chringel
Page | 4
Hektoen – milieu sélectif
Composition
 Mélanges d’acides aminés, facteurs de croissance : Peptones, extraits de levure
 Glucide et dérivés : salicine, lactose, saccharose
 Autres molécules carbonées : /
 Indicateurs S2- : citrate de fer
 Inhibiteurs : sels biliaires
 Divers : /
 Indicateurs de pH : Bleu de bromothymol, fuschine acide
 Ions minéraux : Thiosulfate de sodium, NaCl
 Agar : oui
 Eau : oui
Caractéristiques
 Sels biliaires : limitent le développement des Gram +
 Fuschine : vire au rose s’il y a production d’aldéhyde.
 Favorise Salmonelle et Shigella du fait des peptones.
 Mise en évidence de la production d’H2S
Usage
 Isolement des entérobactéries pathogènes : principalement pour vérifier la présence de
Shigella et Salmonella.
Lecture
 Aspect des colonies :
H2S
Attaque
glucide
Production
aldéhyde
Saumon
-
+
+
Saumon et
centre noir
+
+
+
Bleu-vert
-
-
-
Bleu-vert
et centre
noir
+
-
-
 Interprétation :
o Saumon : Escherichia, Levinea, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia,
Yersinia.
o Saumon et centre noir : Proteus vulgaris.
o Bleu-vert : suspicion de Shigella ou Salmonella.
o Bleu-vert et centre noir : suspicion de Salmonella.

BIO303 Rédigé par Chringel
Page | 5
Hugh et Leifson – milieu différentiel
Composition
 Mélanges d’acides aminés, facteurs de croissance : peptones, extrait de levures
 Glucide et dérivés : glucose
 Autres molécules carbonées : /
 Indicateurs S2- : /
 Inhibiteurs : /
 Divers : /
 Indicateurs de pH : bleu de bromothymol
 Ions minéraux : NaCl, K2HPO4
 Agar : oui
 Eau : oui
Usage
 Détermination de la voie d’attaque des Glucides, utilisés comme principale source
d’énergie par les bactéries.
L’utilisation du glucose acidifie le milieu, le BBT va alors virer au jaune.
Technique
 Régénérer les 2 tubes : création gradient d’oxygène.
 Les ramener à 45°C.
 Ajouter aseptiquement quelques gouttes d’une solution de glucose stérile.
Concentration finale dans le tube environ 10g/L.
 Agiter le tout pour répartir le glucose dans tout le tube.
 Solidifier les deux tubes en les plongeant dans l’eau froide.
 Ensemencer chaque tube par piqûre centrale avec la pipette Pasteur.
 Recouvrir l’un des deux tubes de paraffine ou vaseline stérile.
 Incubation 24h à 37°C.
Tube recouvert = tube fermé
Tube non recouvert = tube ouvert
NE PAS REVISSER A FOND LES BOUCHONS.
Lecture
Il peut y avoir formation de gaz par les bactéries.
Résultats après
cultures 24h à 37°C
Interprétation
Le glucose est
dégradé en
aérobiose et en
anaérobiose :
bactérie
fermentative du
glucose.