Les équipements de la plateforme PIC-GIN

Grenoble Institut des Neurosciences
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Les équipements de la plateforme PIC-GIN
Les microscopes simples d'utilisation
Pour un simple contrôle, ou une acquisition d'image...
Le Nikon Eclipse TS100
Microscope de contrôle pour vérifier les échantillons avant toute utilisation d'un système plus performant.
Vidéomicroscopes
Les microscopes champs large sont dédiés au suivi du développement de cellules fluorescentes ou non, sur de courtes
ou longues durées. Pour limiter la dégradation des échantillons observés lors de l'acquisition, un compromis doit être
trouvé en favorisant des temps d'exposition courts et les changements d'illumination rapides. Certains microscopes à
champs large sont équipés d'un système de régulation de température et/ou de CO2 garantissant la survie des
échantillons sur de très longues durées. Les platines motorisées permettent de mémoriser plusieurs zones et de les
acquérir les unes après les autres au cours d'une même expérience. Ces outils sont simples d'utilisation et répondent à
la majorité des besoins. Leur limitation provient du fait de l'illumination de tout le champs d'observation qui induit un
manque de résolution notamment sur les échantillons épais, ce qui peut conduire à utiliser des microscopes confocaux
à
balayage
laser
ou
un
spinning
disk.
Services :
Observation XYZT
Acquisitions sur de courtes ou longues durées
Images à multi-marquages
Thermorégulation & contrôle CO2 pour maintien des échantillons
Déplacement en profondeur rapide et repositionnement précis (Piezo)
Multi-positionnement pour suivre plusieurs champs au cours d'une acquisition
Échantillons fixés ou vivants
Nombreux support d'échantillon utilisables (boite pétri, lame, boite multi-puits…)
Mode d'accès :
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Assistance
Autonomie (après formation)
Prestation de service
Equipements :
LEICA DMI6000 / ROPER
Inversé, thermorégulation, multipositions, scanslides, FRAP et photoactivation, imagerie calcique
ZEISS Axiovert 200M / ROPER
Inversé, thermorégulation & contrôle CO2, multi-positions, acquisitions longues durées
ZEISS Axiovert 200M (2) / ROPER
Inversé, thermorégulation, acquisitions courtes durée
Microscope confocal Spinning Disk
Le compromis idéal pour ceux qui recherchent la résolution et une faible phototoxicité. Le « spinning-disk » allie la
rapidité du microscope champ large à la résolution d'un confocal. Cette technique utilise des lasers pour illuminer les
échantillons et des caméras ultra-sensibles pour détecter le signal fluorescent. A la différence du confocal à balayage
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laser, le spinning disk illumine l'ensemble de la zone d'observation de manière simultanée permettant de réduire la
durée d'acquisition et de réduire la photo-toxicité et permet d'accéder ainsi à l'imagerie 4D (3D + temps).
Services :
Acquisition XYZT en fluorescence et lumière blanche
Multi-marquage
Acquisitions sur de courtes ou longues durées
Images à multi-marquages
Thermorégulation & contrôle CO2 pour maintien des échantillons
Déplacement en profondeur rapide et repositionnement précis (Platine Piezo)
Multi-positionnement pour suivre plusieurs champs au cours d'une acquisition
Échantillons fixés ou vivants
Nombreux supports d'échantillon utilisables (boite pétri, lame …)
Mode d'accès :
Assistance
Autonomie (après formation)
Prestation de service
Equipements :
SPINNING DISK ZEISS Axio Observer Z1 / ROPER
Alliance d'une bonne résolution et d'une faible phototoxicité
Microscopes confocaux / Biphoton
La plateforme de microscopie photonique PIC GIN dispose de plusieurs microscopes confocaux. Ils permettre la
réalisation de coupes optiques fines au sein d'un tissu/d'une cellule et capturent uniquement le signal fluorescent issu
du plan focal en se débarrassant de la fluorescence parasite des plans supérieurs et inférieurs contrairement à la
microscopie à champ large. Ceci donne une très bonne résolution axiale, mais les échantillons vont souffrir de la
phototoxicité induite par les sources lasers diminuant la capacité d'observation au cours du temps. Les inconvénients de
la microscopie confocale et la relative lenteur d'acquisition (balayage laser point par point) pouvant être contrecarré par
des systèmes de type spinning disk pour les études sur le vivant.
Parmi les microscopes à balayage laser on distingue deux catégories, les microscopes confocaux mono-photon et
microscopes confocaux bi-photons.
La microscopie bi-photonique utilise un laser IR pulsé femtoseconde permettant de pénétrer l'échantillon plus en
profondeur (1mm) et de limiter le photobleaching des fluorophores ainsi que le photodommage de l'échantillon.
L'excitation en microscopie biphotonique provient uniquement du point focal permettant d'obtenir une section optique
d'échantillons épais (sans pinhole) et ainsi de faire une reconstitution 3D. La microscopie biphotonique couplée à la
photoactivation (optogénétique, décageage de glutamate…) et à l'électrophysiologie permet l'imagerie fonctionnelle
(imagerie calcique…) in vivo de cellules individuelles (neurones, astrocytes) dans le cerveau de rongeurs anesthésiés.
Services :
Observation XYZT (multipositions) et dans le temps
Images multi-marquages
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Lasers UV pour marquage nucléaires (type DAPI, Hoechst)
Thermorégulation et controle CO2pour maintien des échantillons
Échantillons vivants ou fixés
Analyse spectrale
FRAP, FRET
Mode d'accès :
Assistance
Autonomie (après formation)
Prestation de service
Equipements :
ZEISS LSM710
Inversé, analyse, spectrale, thermorégulation, FRAP, FRET
LEICA TCS SPE
Inversé, pas de laser UV, pas de régulation
NIKON Eclipse
Inversé, FRAP
ZEISS 7MP
Droit, 3 NDD (épicollection), large platine motorisée, aesthésie gazeuse, laser IR 680-1080m
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Microscopie TIRF
La microscopie TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) permet d'imager une section optique d'une épaisseur de
l'ordre comprise entre 20 et 200nm. En TIRF, seule la surface de l'échantillon en proximité immédiate de la lamelle est
observée. La haute résolution axiale offerte par cette technique en fait un instrument de choix pour les observations
membranaires
ou
les
études
du
cytosquelette.
Services :
Étude de récepteurs membranaires
Étude de l'exocytose/endocytose
Étude de l'adhésion cellule/substrat
Étude du cytosquelette sous membranaire
Équipement :
NIKON / ROPER
Inversé, thermorégulation
Microscope AIRYSCAN
Nouvelle technologie confocale pour une microscopie plus sensible et de haute résolution
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Avec le nouveau détecteur AIRYSCAN installé sur le confocal LSM 710 ZEISS, les utilisateurs peuvent obtenir une
résolution 1,7× plus élevée dans toutes les dimensions spatiales. Une sensibilité améliorée donne une meilleure qualité
d'image. L'ensemble du processus d'imagerie peut être réalisé avec des protocoles de préparation d'échantillons et de
m a r q u a g e s
s t a n d a r d s .
Microscopie PALM/STORM
Nouvelle génération de microscopes permettant de visualiser des objets à une résolution dont l'observation était limitée
par la diffraction de la lumière (environ 200nm). Le principe du microscope de super-résolution (PALM/STORM) est
basé sur l'observation de molécules uniques.
Équipement :
ZEISS / ROPER
Inversé, techniques super résolution PALM/STORM et également TIRF, FRAP, Spinning Disk, thermorégulation
et contrôle CO²
Mise à jour le 16 mai 2017
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