Becs-de-lievre provoques chez le rat par un d6riv6 de la p6nicilline

/. Embryol. exp. Morph., Vol. 15, 2, pp. 193-211, April 1966 193
With 2 plates
Printed in Great Britain
Becs-de-lievre provoques chez le rat par un d6riv6
de
la p6nicilline, Fhadacidine
Par MADELEINE LEJOUR-JEANTY1
Laboratoire d'Anatomie et d'Embryologie humaines de
V
Universite Libre de Bruxelles.
II est aise de provoquer des fentes palatines chez les Mammiferes de labora-
toire. L'action de la cortisone (Walker & Fraser, 1957), l'hypervitaminose A
(Giroud & Martinet, 1955), la carence en niacine (Chamberlain & Nelson, 1963),
par exemple, ont permis une etude detaillee de ces malformations.
II
est par contre bien plus difficile d'obtenir des becs-de-lievre. Quelques
travaux signalent leur apparition au cours d'experiences teratogenes, mais nous
ne connaissons que deux series
de recherches qui aient abouti a un rendement
eleve en fentes labio-maxillaires: celles de Nelson, Wright, Asling
& Evans (1955)
qui administrent oralement
une substance antifolique au rat, et celles de
Chaube & Murphy (1963) qui utilisent l'hadacidine en injections intra-perito-
neales chez le meme animal.
En 1962, Gitterman
et al. decrivaient un nouvel agent anti-tumoral, le sel
monosodique d'un filtrat de Penicillum frequentans, et le nommaient hada-
cidine. En fait, l'action anti-tumorale de ce produit n'est pas intense, mais son
action teratogene, etudiee en 1963 par Chaube & Murphy, se revela importante.
Parmi les malformations provoquees
par l'hadacidine, ces auteurs obtiennent
jusqu'a 88 % de fentes labio-maxillaires.
Nous avons cherche
a reproduire leurs experiences de maniere a pouvoir
etudier
la genese des becs-de-lievre. Nous presentons ici nos premiers resultats
envisages
sur le plan strictement morphologique. Une etude histochimique
detaillee sera publiee ulterieurement.
MATERIEL ET METHODES
Dix rattes Wistar, agees de 4 a 6 mois et pesant 180 a 200 gr, ont ete selec-
tionnees
au debut de la gestation. Nous considerons que le jour 0 est celui de
la decouverte de spermatozoides dans le frottis vaginal. Le diagnostic de
fecondation est ensuite verifie par palpation avant d'administrer l'hadacidine.
1 Adresse de
Vauteur: Laboratoire d'Anatomie et d'Embryologie humaines, Universite
Libre de Bruxelles, Bruxelles, Belgique.
13 JEEM 15

194 M. LEJOUR-JEANTY
Celle-ci est injectee dans le peritoine des rattes en deux doses espacees de
6 heures, afin de limiter son effet toxique.
L'hadacidine est dissoute dans du carboxymethyl cellulose a 0,5 % peu
avant l'injection.
Une ratte temoin a ete injectee avec le solvant seul. Ses 9 embryons, preleves
le 19eme jour, ne presentaient aucune anomalie.
Huit rattes ont ete injectees le lleme jour, deux, le 12eme jour (Tableau 1).
Nous avons utilise des doses decroissantes d'hadacidine allant de 5 gr/kg
a 1,7 gr/kg.
Les embryons ont ete preleves par cesarienne entre le lleme jour et demi et
le 20eme jour de la gestation. Certaines rattes (R5, R6 et R9) ont ete operees
3 fois a 1 ou 2 jours d'intervalle pour permettre d'etudier des embryons d'age
different issus d'une meme mere et soumis a la meme dose de produit teratogene.
A cet effet, la ratte est endormie a Tether et, par une courte laparotomie, les
embryons les plus distaux sont preleves avec leurs cornes uterines, une ligature
placee sous la zone de prelevement empechant toute hemorragie. Les rattes ont
bien supporte ces interventions iteratives qui ont neanmoins provoque un
nombre excessif de resorptions embryonnaires. II n'est en effet pas rare de
trouver les embryons proches des ligatures en voie de resorption alors que ces
memes renflements avaient paru normaux au cours de l'intervention precedente.
Apres avoir ete preleves dans la solution physiologique de Locke, les em-
bryons sont etudies in toto, puis decapites. La region nasale est ensuite dessinee
a la chambre claire puis photographiee.
Les pieces ont ete fixees soit au Serra soit au Pasteels-Leonard, soit au formol
a 10 % ou a l'ethanol absolu froid en fonction des exigences de Tetude cyto-
chimique que nous comptons poursuivre parallelement a l'etude morpho-
logique. Le travail actuel se limitant a l'aspect morphologique de la region nasale,
nous reservons pour une publication ulterieure la description detaillee des
techniques cytochimiques.
L'organe olfactif a ete etudie sur des coupes frontales d'une epaisseur de
10 /*.
OBSERVATIONS PERSONNELLES
Chaube & Murphy, de meme que Nelson et al, ont decrit les malformations
observees chez Tembryon de rat a terme en fonction de la dose et du moment
d'administration du produit teratogene a la mere.
Notre but est different: nous cherchons a etudier la genese du bec-de-lievre.
Nous nous sommes done d'emblee placee dans les conditions optimales pour
l'obtention d'un grand nombre de fentes labio-maxillaires. Chaube & Murphy
en obtiennent 88 % en pratiquant des injections intraperitoneales de 5 gr/kg
d'hadacidine (fractionnee en deux doses a 6 heures d'intervalle) au cours du
lleme jour de la gestation.
Nous avons repete ces experiences sur la race de rats du laboratoire.

Tableau 1. Resultats de Vinjection d'hadacidine a 10 rattes gestantes
Experience
Rl R2
R3
R4
R5 R6 R7
R8 R9
RIO
Dose
H.
(gr/kg)
5 5
4
3,5
3
2,5
2
2
1,9
1,7
Age
des
embryons
au
moment
de
Finjection
(jours)
11 11
12
12
11
11
11
11 11
11
Age des
embryons
lors
du
prelevement
(jours)
18
13 14
14
12;
13;
14
12;
13;
14
19
20
11,
5;
13;
14
14
Nombre
total
d'embryons
9 9
9
8
10
8
8
9
8
8
—
86
Normaux
— — — — — —
1 1
—
2
—
4
Anomalies
diverses
— —
9
7
—
1
— — —
3
—
20
Anomalies
d'organe
olfactif
—
9 7
3 5
1
2
5
—
—
32
Resorptions
9 9
—
1
7
3
6 6
3
3
—
47
•<
1
05

196M. LEJOUR-JEANTY
La dose de 5 gr/kg injectee le lleme jour nous est apparue trop elevee. Les
embryons preleves le 18eme jour sont entierement resorbes (experience Rl,
Tableau 1). Lorsqu'on preleve les embryons
2 jours apres les injections, ils sont
grossierement malformes et en voie de resorption (experience R2). Nous avons
done administre des doses decroissantes d'hadacidine, dont les resultats sont
representes sur le tableau 1, et qui s'echelonnent de 4 gr a 1,7 gr/kg.
Coupes sagittalesCoupes frontales (fosse droite)
11 jours
12 i.
13 j.
14
j.
Fig. 1. Etapesdu developpement des fosses nasales et du palais primaire chez le
rat. La region olfactive est representee schematiquement en coupes frontales et
sagittales. Le niveau des coupes frontales numerote de a a d correspond pour chaque
stade aux traits verticaux des coupes sagittales. 11 jours: apparition de Pepaississe-
ment epithelial de la placode olfactive. \\\ jours: invagination placodique, plus
marquee a l'arriere. 12 jours: debut de la fusion caudo-cephalique des levres de la
gouttiere olfactive. 13 jours: nouveau contact epithelial posterieur, preparant la
membrane bucco-nasale. 14 jours: allongement du palais primaire dont la formation
s'acheve. Apparition et rupture de la membrane bucco-nasale.
On constate que, sur 86 embryons preleves, 47 (55,8 %) sont resorbes, 32
(37 %) presentent des anomalies de l'organe
olfactif, 20 (23,2 %) d'autres
malformations externes et 4 (4,6 %) seulement sont normaux. Nous n'avons pas
compte parmi les malformations
1'oedeme parfois extreme qui se manifeste
chez les embryons ages (Planche 1, fig. A
2).
En dehors des anomalies de l'organe olfactif, nous avons rencontre des
kystes sous-epiblastiques symetriques au niveau des otocystes (experiences

Becs-de-liewe provoques par Vhadacidine 197
R3 et R4), une hypogenesie des membres posterieurs (experience R6) et divers
cas d'omphalocele (experience RIO).
Les malformations de la region nasale sont comparables dans toutes nos
experiences. Seuls leur intensite et le nombre d'embryons atteints varient avec
la dose d'hadacidine injectee. Nous pourrons done decrire stade par stade les
anomalies que l'hadacidine a entrainees. Nous nous referons, pour serier les
etapes du developpement, au travail que nous avons publie precedemment sur la
morphogenese du palais primaire du rat (Lejour-Jeanty,
1965). La figure 1 resume
ces etapes.
Comme le montre le Tableau 1, la plupart des embryons ont ete preleves aux
stades qui precedent ou accompagnent la constitution du palais primaire:
placode
(11 j.), invagination placodique (12 j.), formation et rupture du mur
epithelial et apparition de la membrane bucco-nasale (13-14
j.). Nous n'avons
laisse evoluer que 3 portees jusqu'a 19 et
20 j. (Rl, R7 et R8). On remarquera
la proportion importante de resorptions obtenue dans ces experiences. Parmi les
5 embryons qui ont pu atteindre ce stade foetal avance, 3 sont porteurs d'un
bec-de-lievre unilateral complet (Planche 1, fig. C2).
Avant de passer a la description des stades, plusieurs remarques s'imposent.
(1) L'hadacidine provoque un retard global du developpement; e'est ainsi que
les embryons preleves paraissent toujours avoir 1 a 2 jours de retard par rap-
port a des embryons normaux du meme stade.
(2) On observe peu apres l'administration du produit une dilatation vasculaire
intense surtout dans la region cephalique.
(3) II existe un ralentissement de la croissance de l'organe
olfactif. Ceci nous
permet d'etudier, etalees sur 2 ou
3 jours, des phases du developpement qui ne
durent normalement que quelques heures (la formation de la placode et son
invagination). Ce phenomene est toutefois complexe et variable. Nous verrons
par exemple des embryons de 14 jours presenter une membrane bucco-nasale
longue et deja rompue, alors que l'aspect de leur fosse olfactive evoque plutot
un stade de
13 jours.
(4) L'hadacidine provoque enfin des anomalies de la region olfactive: absence
de fusion des bourgeons nasaux, necrose du bourgeon nasal externe, kystes
prenant leur origine dans les ganglions de Gasser et progressant jusque dans les
bourgeons maxillaires. Ces anomalies s'accompagnent de pyenoses cellulaires,
particulierement abondantes et diffuses chez les embryons jeunes qui viennent
de subir l'action de la drogue. Plusieurs de ces embryons n'auraient certaine-
ment pas atteint le terme, mais leur etude facilite l'analyse des localisations
preferentielles de l'action teratogene de l'hadacidine.
(5) Nous n'avons pas observe de relation entre les anomalies des embryons
et leur emplacement dans la corne uterine.