Existe-t-il de vraies discordances entre détection Optique et détection Mécanique ? Marie Agnès Vanlande Dr Céline Delassasseigne Famille STA (Stago): traitement similaire de tous les échantillons Le principe consiste à mesurer la variation de l’amplitude d’oscillation d'une bille de métal Electroaimant Electroaimant Electroaimant Bille d’acier Une diminution de l’amplitude correspond à une augmentation de viscosité du milieu, soit au phénomène de coagulation Famille ACL TOP (IL): traitement similaire de tous les échantillons MAIS 8 positions de barrettes de cuvettes 22 positions de barrettes de cuvettes 4 x 4 positions de barrettes de cuvettes Zone de lecture de 4 modules de 4 positions Compartiment échantillons Compartiment réactifs Réception Photodectéteurs Choix de la longueur d’onde de 671 nm compte tenu du spectre d’absorbance des différences interférences potentielles 405 nm 671 nm Module de lecture Barette de 4 cuvettes Emission Faisceau de fibres optiques à partir de deux sources lumineuses (405 & 671 nm) Un faisceau de fibres optiques transmet l’énergie de deux sources lumineuses: - l’une émettant à 671 nm (diode électroluminescente): technique chronométrique - l’autre à 405 nm (source halogène): technique chromogénique Famille CA (Siemens): longueur d’onde optimisée en fonction de l’échantillon Système de détection des plasmas hémolysés, ictériques et lipémiques (HIL): - Lecture pré-analytique de l’échantillon à 3 longueurs d’onde (405 nm, 575 nm et 660 nm) - Lecture simultanée à 5 longueurs d’onde (340 nm, 405 nm, 575 nm, 660 nm et 800 nm) Valeur de A/D par photométrie Ex: Pour les plasmas lipémiques, la dH (amplitude) obtenue à 800 nm est plus importante que celle obtenue à 660nm : elle est plus pertinente et permet de s’affranchir de l’influence de l’interférence. Lecture multi-longueurs d’onde Photo-diode Lampe halogène Point de début de la réaction 0% 340nm 405nm 575nm 660nm 800nm 50% 100% Temps de coagulation temps Filtre d’onde Multi-longueurs Fibre optique Comparaison de méthodes Dans le cadre des validation de méthodes: - TCA (déjà abordé) - TP - Fibrinogène Dans le cadre de plasmas « particuliers »: - TP - TCA - TT Mécanique Optique CV (%) ET de fidélité intermédiaire (3ET)2 CV ET de fidélité intermédiaire (3ET)2 TP Normal 2.5 2.0 36 4.2 2.5 56.25 TP Patho 2.7 1.0 9 3.9 1.5 20.25 TCA Normal 1.8 0.02 0.0036 2.8 0.03 0.0081 TCA Patho 2.8 0.03 0.0081 3.7 0.04 0.0144 TT Normal 5 0.06 0.0324 4 0.06 0.0324 Fib Normal 3.8 0.1 0.09 4.4 0.12 0.130 Fib Patho 2.1 0.03 0.0081 3.2 0.04 0.0144 Comparaison de méthodes (SH GTA 04) Analyse du TCA Mécanique – Optique Temps de coagulation différents Temps Témoin Différents Ex: APTT® Mécanique Optique 37.1s 31.1s Mécanique Optique 29.2s 27s (Stago) Ex: Actin FS®(Siemens) MAIS Normal Probability Plot 3 Normal Quantile 2 n Range Method Mean Median SD 108 0.712 Parametric 0.991 1.000 0.100 Lower 95% Reference limit 0.796 0.769 to 0.823 Upper 1.187 1.160 to 1.214 to 1.213 0 -1 -2 -3 0.7 0.75 0.8 0.85 0.9 0.95 1 1.05 1.1 1.15 1.2 1.25 STAR Ratio 90% CI Seuil TCA mécanique Fixé à 1.19 Histogram with Reference Interval Normal Fit (Mean=0.991, SD=0.100) 95% Reference Limits (0.796 to 1.187) 20 15 Frequency 1 TCA (APTT) Seuil exploration Similaire Mécanique 10 5 0 0.7 0.9 1.1 STAR Ratio - R1 Normal Probability Plot 3 n Range Method Mean Median SD Lower 118 0.765 Parametric 0.998 1.003 0.094 95% Reference limit 0.813 Upper 1.186 Normal Quantile 2 to 1.193 0 -1 -2 -3 0.75 0.8 0.85 0.9 0.95 1 1.05 0.789 to 0.838 1.158 to 1.207 1.2 Seuil TCA optique Fixé à 1.19 TCA (APTT) Seuil exploration Similaire 15 Optique 10 5 0.85 1.15 Némo Ratio Normal Fit (Mean=0.998, SD=0.094) 95% Reference Limits (0.813 to 1.183) 20 0 0.75 1.1 90% CI Histogram with Reference Interval Frequency 1 0.95 1.05 Némo Ratio 1.15 Analyse du TP Mécanique – Optique Temps de coagulation différents Temps Témoin Différents Ex: Thromborel® (Siemens) Mécanique Optique 12.6s 11.2s Ex: Innovin® (Siemens) Mécanique Optique 9.8s 9.4s MAIS Mécanique Optique Moyenne Différence 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 22 25 32 39 43 44 46 47 51 55 58 60 62 65 66 68 69 70 70 71 72 73 73 74 75 76 79 80 82 82 83 83 84 84 84 86 87 87 88 88 89 89 92 94 94 94 97 99 103 105 20 21 28 39 40 40 42 45 52 55 55 58 58 61 65 67 69 67 65 65 71 69 73 69 70 75 78 78 83 80 75 80 81 79 85 84 88 81 88 85 86 83 85 98 92 98 93 97 100 103 21,0 23,0 30,0 39,0 41,5 42.0 44,0 46,0 51,5 55,0 56,5 59,0 60,0 63,0 65,5 67,5 69,0 68,5 67,5 68,0 71,5 71,0 73,0 71,5 72,5 75,5 78,5 79,0 82,5 81,0 79,0 81,5 82,5 81,5 84,5 85,0 87,5 84,0 88,0 86,5 87,5 86,0 88,5 96,0 93,0 96,0 95,0 98,0 101,5 104,0 2 4 4 0 3 5 4 2 -1 0 3 2 4 4 1 1 0 3 5 6 1 4 0 5 5 1 1 2 -1 2 8 3 3 5 -1 2 -1 6 0 3 3 6 7 -4 2 -4 4 2 3 2 % Dif Max toléré Comparaison de méthodes TP Mécanique - Optique 5.4 y = 1.0088x - 3.0603 Régression linéaire R² = 0.985 120 100 80 60 40 9.6 20 0 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Optique 1 31 38 38 43 49 56 61 63 64 64 65 72 75 75 77 77 78 79 79 82 83 84 87 87 87 88 88 89 92 92 93 93 93 96 97 97 97 98 100 105 Optique 2 31 38 39 42 50 59 62 63 66 65 66 74 77 77 77 78 82 80 83 83 84 86 88 92 88 89 87 92 94 90 98 92 94 98 100 97 98 100 103 106 Moyenne 31,0 38,0 38,5 42,5 49,5 57,5 61,5 63,0 65,0 64,5 65,5 73,0 76,0 76,0 77,0 77,5 80,0 79,5 81,0 82,5 83,5 85,0 87,5 89,5 87,5 88,5 87,5 90,5 93,0 91,0 95,5 92,5 93,5 97,0 98,5 97,0 97,5 99,0 101,5 105,5 Différence 0 0 -1 1 -1 -3 -1 0 -2 -1 -1 -2 -2 -2 0 -1 -4 -1 -4 -1 -1 -2 -1 -5 -1 -1 1 -3 -2 2 -5 1 -1 -2 -3 0 -1 -2 -3 -1 % Dif Max toléré 6.3 Comparaison de méthodes TP Optique - Optique y = 1.0185x - 0.0425 Regression linéaire R² = 0.99 120 100 80 60 10.6 40 20 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 Diagramme des différences 10 8 6 4 Différence Mécanique-Optique 2 0 20 30 40 50 60 -2 -4 -6 -8 -10 Moyenne 70 80 90 100 Optique1-Optique2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 Mécanique 1.03 1.19 1.19 1.35 1.46 1.71 1.88 1.92 2.11 2.18 2.21 2.22 2.37 2.37 2.39 2.41 2.45 2.51 2.66 2.92 2.95 3.06 3.17 3.45 3.52 3.60 3.6 3.62 3.65 3.68 3.88 3.94 4.07 4.07 4.28 4.28 4.31 4.73 4.97 5.24 5.42 5.89 5.89 5.96 7.2 Optique 1.00 1.10 1 1.20 1.5 1.6 1.78 1.70 1.96 2.00 2.23 2.3 2.10 2.10 2.20 2.4 2.20 2.7 2.45 3 3.1 2.90 3.4 3.52 3.56 3.60 3.9 3.52 3.45 3.7 3.86 3.7 4.10 4.00 4.00 4.27 4.1 4.40 4.85 5.16 5.24 6.02 5.42 5.7 7.2 Moyenne 1.02 1.15 1.10 1.28 1.48 1.66 1.83 1.81 2.04 2.09 2.22 2.26 2.24 2.24 2.30 2.41 2.33 2.61 2.56 2.96 3.03 2.98 3.29 3.49 3.54 3.60 3.75 3.57 3.55 3.69 3.87 3.82 4.09 4.04 4.14 4.28 4.21 4.57 4.91 5.20 5.33 5.96 5.66 5.83 7.20 Différence -0.03 -0.09 -0.19 -0.15 0.04 -0.11 -0.10 -0.22 -0.15 -0.18 0.02 0.08 -0.27 -0.27 -0.19 -0.01 -0.25 0.19 -0.21 0.08 0.15 -0.16 0.23 0.07 0.04 0.00 0.30 -0.10 -0.20 0.02 -0.02 -0.24 0.03 -0.07 -0.28 -0.01 -0.21 -0.33 -0.12 -0.08 -0.18 0.13 -0.47 -0.26 0.00 % Dif Max toléré 0.15 Comparaison de méthodes Fibrinogène Mécanique - Optique y = 0.9909x - 0.0536 Régression linéaire R² = 0.99 7.5 6.5 0.56 5.5 4.5 3.5 2.5 1.5 0.5 0.5 1.5 2.5 3.5 4.5 5.5 6.5 7.5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 Optique 1 0.63 0.65 0.71 1.13 1.19 1.23 1.84 2.16 2.52 2.60 2.60 2.65 2.80 2.82 2.88 2.90 2.90 2.91 3.00 3.18 3.40 3.59 3.60 3.60 3.60 3.68 3.80 4.13 4.20 4.30 4.31 4.60 4.70 4.70 4.70 4.90 5.80 6.86 6.86 7.02 9.86 Optique 2 0.68 0.65 0.69 1.56 1.28 1.30 2.00 2.30 2.60 2.60 2.60 2.60 2.80 2.90 2.80 3.00 3.00 3.00 3.20 3.20 3.60 3.80 3.80 3.50 3.80 3.80 4.00 4.10 4.40 4.30 4.30 4.80 4.90 5.00 4.80 4.90 5.60 7.04 6.68 6.75 9.40 Moyenne 0.63 0.67 0.72 1.17 1.22 1.27 1.97 2.18 2.56 2.58 2.56 2.73 2.96 2.91 2.90 2.94 2.97 3.01 3.20 3.29 3.50 3.62 3.70 3.72 3.72 3.82 3.79 4.12 4.22 4.30 4.41 4.60 4.70 4.71 4.92 4.82 5.62 6.70 6.91 7.06 9.87 Différence 0.01 -0.04 -0.02 -0.07 -0.05 -0.07 -0.26 -0.04 0.08 0.05 -0.08 -0.15 -0.09 -0.18 -0.20 -0.12 -0.13 -0.21 -0.40 -0.22 -0.19 -0.03 -0.21 -0.24 -0.24 -0.04 -0.22 0.03 -0.04 0.01 -0.19 0.01 0.00 -0.02 -0.04 -0.24 0.37 0.33 -0.09 -0.08 -0.02 % Dif Max toléré 0.16 Comparaison de méthodes Fibrinogène Optique - Optique Régression linéaire y = 0.9608x + 0.2007 R² = 0.99 9.5 8.5 0.51 7.5 6.5 5.5 4.5 3.5 2.5 1.5 0.5 0.5 2.5 4.5 6.5 8.5 Diagramme des différences 0.60 0.40 Mécanique-Optique Différence 0.20 Optique1-Optique2 0.00 0.50 2.50 4.50 6.50 -0.20 -0.40 -0.60 Moyenne 8.50 10.50 Cas de patients dont l’aspect est « particulier » 16 plasmas sélectionnés d’après leur aspect (indépendamment des résultats biologiques) - 7 plasmas hémolysés - 4 plasmas lactescents - 5 plasmas ictériques TT ratio Aspect TCA ratio Mécanique Optique Différence % max= Mécanique Optique Différence TP % % max = Mécanique Optique Différence % max = 1 Hémolysé 1.01 0.97 0.04 0.87 0.86 0.01 116 119 -3 2 Lactescent 0.92 0.93 -0.01 0.89 0.90 -0.01 128 122 6 3 Hémolysé 0.99 0.99 0.00 0.89 0.92 -0.03 129 138 -9 4 Hémolysé 0.89 0.92 -0.03 0.89 0.87 0.02 84 83 1 5 Hémolysé 0.97 1.00 -0.03 0.92 0.90 0.02 91 100 -9 6 Hémolysé 0.94 0.99 -0.05 0.85 0.84 0.01 123 126 -3 7 Hémolysé 0.97 0.95 0.02 0.92 0.92 0.00 100 110.00 -10 8 Lactescent 0.90 0.89 0.01 1.02 0.99 0.03 100 105 -5 0.11 12.1 0.25 9 Ictérique 1.10 1.19 -0.09 1.19 1.21 -0.02 61 61 0 10 Ictérique 1.16 1.08 0.08 1.29 1.31 -0.02 93 90 3 11 Ictérique 1.52 1.73 -0.21 1.40 1.39 0.01 55 57 -2 12 Hémolysé 2.66 2.86 -0.20 1.70 1.83 -0.13 50 50 0 13 Ictérique 1.09 1.16 -0.07 1.74 1.77 -0.03 38 35 3 14 Lactescent 1.25 échec #VALEUR! 1.95 2.03 -0.08 15 Lactescent 1.51 échec #VALEUR! 2.20 16 Ictérique 1.63 1.63 3.05 0.15 5.1 0.00 12 échec #VALEUR! échec #VALEUR! 10 échec #VALEUR! 2.95 11 0.10 13 -2 Conclusion Pas de différence significative entre automates à détection optique et à détection mécanique sur TP-TCA-TT de plasmas particuliers hormis quelques cas extrêmes: prélèvements lactescents +++ et IHC +++