Culture et transfert de blastocystes Françoise Urner Centre de Procréation Médicalement Assistée & Fondation F.A.B.E.R. Lausanne, Suisse Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 Contexte helvétique • Limite de 3 embryons en culture • Congélation d’embryons interdite • Conséquences sur les traitements par FIV: • Sélection d’ embryons aptes à donner une grossesse: difficilement réalisable • Diminution du nombre de grossesses gémellaires: difficilement réalisable • Nombreux transferts d’embryons successifs • Coût émotionnel, psychologique et financier pour les patients Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 Comment améliorer la situation ? • Sélection au stade ovocytaire et/ou du zygote: pas très efficace • Transfert de 3 embryons systématiquement: inacceptable, grossesses triples • Sélection du ou des meilleurs embryons parmi trois en culture, sur la base du développement à J5 Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 Objectif du transfert de blastocystes Améliorer les taux de grossesse par transfert, sans augmenter les grossesses multiples, en transférant 1 ou 2 blastocystes obtenus après la culture prolongée de 3 embryons. Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 Protocole • • • • • • • 2007-2008-2009 241 cycles de décongélation 741 zygotes décongelés Age: 35.5 ± 3.8 years Décongélation et mise en culture de 1 à 4 zygotes selon le profil des patientes Transfert de 1,2 ou 3 embryons selon le profil des patientes Transfert annulé en cas d’absence de blastocystes ou morula au J5/6 Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 Développement embryonnaire Jour 1 zygote Jour 2 2-4 cellules Jour 3 6-10 cellules Jour 4 morula Jour 5 blastocyste Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 Développement embryonnaire à J5 2PN-zygotes N = 741 Blastocystes N=198, 27% Jeune blasto N=100, 13% Morulae N=240, 32% dimanche, 27 décembre 2009 Blasto N=70, 9% Blasto expansé N=28, 4% Arrêt développement N= 303, 41% Culture prolongée: 4 scénarios possibles Arrêt de développement 10% 1-2 blastocystes 1 embryon bloqué 75% 3 embryons à des stades avancés mais différents 15% 3 blastocystes identiques 1 cas dimanche, 27 décembre 2009 Taux de grossesse (%) Taux de grossesse en fonction du développement embryonnaire à J5 P<0.005 50 38 25 13 0 Morulae Jeune blasto Transferts: Age: Blasto Blasto expansé N=66 N=54 N=74 N=44 36.1 ± 3.5 34.7 ±.4 35.4 ±4.0 35.9 ± 4.0 Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 40 40 30 30 Blastocystes Grossesses 20 % % Blastocystes à J5: effet de l’âge et de la réponse ovarienne 20 10 10 0 0 <35 35-38 age >38 <10 >20 Nb. zygotes congelés Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 10-20 Résultats des transferts à J5/J6 Nb. de cycles Nb. de zygotes décongelés Nb. de transferts Nb. d’embryons transférés Nb. de transferts annulés (%) Nb. de grossesses cliniques % par cycle initié % par transfert Taux d’implantation Grossesses gémellaires Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 267 741 239 1.54 ± 0.78 28 (10%) 71 27% 30% 18% 4 (6%) p = 0.015 50 38 25 13 0 30 J5/J6 21 J3 p = 0.119 50 43 35 28 20 27 21 J5/J6 J3 Implantation par zygote en culture (%) par embryon transféré (%) Implantation Grossesses par cycle (%)Grossesses par transfert (%) Grossesse et implantation en fonction du transfert à J5/6 ou J3 50 40 31 21 11 18 J5/J6 12 J3 p = 0.07 50 40 30 19 9 Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 p = 0.021 10 13 J5/J6 J3 Grossesses (%) p = 0.118 50 38 25 13 0 J5 Implantation (%) Grossesse et implantation en fonction du transfert à J5 ou J6 p = 0.251 50 41 32 22 13 J5 J6 Transferts Age Jour 5 Jour 6 N=171 N=68 35.4 ± 4.1 37.7 ± 3.7 Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 J6 Implantation (%) Grossesses (%) Grossesse et implantation en fonction du nombre de zygotes en culture 50.0 37.5 25.0 12.5 0 1 2 3 4 50.0 37.5 25.0 12.5 0 1 Nb. zygotes en culture Transferts Age 3 4 Nb. zygotes en culture n=1 n=2 n=3 n=4 N=4 N=82 N=116 N=37 35.2±1.9 35.8±3.8 35.2±3.9 35.9± 4.1 Colloque des Chevreuils, 19.11.09 dimanche, 27 décembre 2009 2 Grossesse et implantation en fonction du nombre de zygotes congelés 40 30 20 10 0 <10 10-20 >20 p = 0.011 Implantation (%) Grossesses (%) p = 0.022 50 38 25 13 0 Nb. zygotes congelés Transferts Age <10 >20 Nb. zygotes congelés < 10 10-20 >20 N=87 N=100 N=52 35.9±3.9 35.5±3.7 34.9±4.7 Colloque Chevreuils, 19.11..2009 dimanche, 27 décembre 2009 10-20 A qui proposer une culture prolongée ? Situation 1: Diminuer le nombre de transferts et augmenter la probabilité de grossesse par transfert >10 zygotes congelés Consigne: transférer 1 ou 2 embryons parmi 3 en culture Situation 2: Exclure une grossesse gémellaire Consigne transférer 1 embryon parmi 2 en culture Situation 3: Eviter un transfert d’embryons voués à s’arrêter Colloque Chevreuils, 19.11..2009 dimanche, 27 décembre 2009 Mais encore…. • Les patientes doivent être averties d’une possible annulation du transfert • Les patientes doivent pouvoir accepter de « perdre » un embryon si tous les embryons en culture se développent bien Colloque Chevreuils, 19.11..2009 dimanche, 27 décembre 2009 Conclusions • Les zygotes décongelés peuvent être facilement cultivés jusqu’au stade du blastocyste in vitro • La culture prolongée permet le transfert de morula et/ou blastocystes dans 90% des cas • Le transfert de morula/blastocyste permet d’augmenter le taux de grossesse par transfert chez les patientes qui ont 10-20 zygotes congelés Colloque Chevreuils, 19.11..2009 dimanche, 27 décembre 2009 dimanche, 27 décembre 2009 50 p=0.0 38 25 13 0 Transfer day Transfers Zygotes In culture Age dimanche, 27 décembre 2009 Implantation rate (%) Pregnancy rate (%) Day 5/6 vs. Day 3 transfers 10-20 frozen zygotes 50 p=0.000 42 35 27 19 Transfer day Day 5/6 Day 3 N=100 N=134 2.75 ± 0.6* 1.95 ± 0.47* 35.5 ± 3.4 34.3 ± 4.1 dimanche, 27 décembre 2009 Day 5/6 vs. Day 3 cycles Day 5/6 Day 3 P-values 35.5 ± 3.8 35.4 ± 4.3 0.291 No. of cycles 267 447 - No. of transfers 239 447 - 28 (10%) 0 - No. of thawed zygotes (intact) 741 840 - Mean No. of zygotes in culture 2.8 ± 0.7 1.9 ± 0.52 0.000 1.72 ± 0.64 1.76 ± 0.5 0.227 Pregnancy rate per cycle 27% 21% 0.119 Pregnancy rate per transfer 30% 21% 0.015 Implantation rate 18% 12% 0.021 Age No. of cancelled cycles (%) Mean No. of transferred embryos dimanche, 27 décembre 2009