Analyse génétique - Collège Lionel
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Analyse génétique Collège Lionel-Groulx Plan de la présentation • Vocabulaire génétique: un rappel • Qu’est-ce que l’analyse génétique et à quoi ça sert? • Étapes de l’analyse génétique Collège Lionel-Groulx Gène, locus et allèle… • Chaque gène occupe un locus précis sur un chromosome précis • Les gènes peuvent exister en plusieurs «versions» que nous appelons allèles • Les organismes diploïdes «normaux» possèdent deux allèles pour chaque gène Collège Lionel-Groulx Analyse génétique • L’analyse génétique que nous ferons consiste à déterminer le génotype des cobayes. • Définitions: • Génotype: inventaire des allèles d’un individu pour un gène ou un ensemble de gènes. C’est ce qui détermine les protéines produites. • Phénotype: caractère visible et/ou mesurable et/ou identifiable d’un individu. Le phénotype dépend du génotype. Il est l’expression des protéines produites. Collège Lionel-Groulx Analyse génétique • Autres définitions: • Allèle dominant vs récessif • Dominance incomplète/codominance • Homozygote vs hétérozygote Collège Lionel-Groulx Analyse génétique • Au labo, une fois les génotypes déterminés, nous les comparerons aux phénotypes des cobayes pour évaluer: • Y a-t-il un allèle qui est dominant? • Si oui, parmi ceux qui possèdent le phénotype dominant, qui est homozygote dominant et qui est hétérozygote? Collège Lionel-Groulx Analyse génétique • L’analyse génétique peut aussi permettre: • De calculer les risques de transmissions de maladies héréditaires à ses enfants • D’établir la paternité d’un enfant • D’identifier un criminel • De déterminer si un aliment est un OGM ou non • De cartographier le génome d’une espèce (ex.: génome humain) • En modifiant notre technique un peu, nous pourrions isoler et cloner un gène (par transformation bactérienne par exemple) Collège Lionel-Groulx Étapes du labo Collège Lionel-Groulx Extraction d’ADN • Rinçage de la bouche avec de la saline • Centrifugation I (élimination du surnageant) • Extraction de l’ADN par ébullition (avec Chelex pour éliminer les cations) • Centrifugation II (élimination du culot) Collège Lionel-Groulx Amplification de l’ADN (chap. 20) • Nous ferons faire de la réplication accélérée à notre ADN grâce à l’ACP • À l’aide d’un thermocycleur, des nucléotides, des amorces et des enzymes de réplication • Cycle: • Dénaturation (94º) • Hybridation (68 º) • Élongation (72º) Collège Lionel-Groulx Amplification en chaîne par polymérase (ACP) 1. Dénaturation (chauffage) 2. Renaturation (liaison des amorces) 3. Extension (ajout de nucléotides) • Après 20 cycles, plus de 1,000,000x de la séquence visée par rapport au reste! Collège Lionel-Groulx Animation sur l’ACP Polymerase Chain Reaction Ou La PCR (en français) Graphique d’amplification Collège Lionel-Groulx Digestion de l’ADN par HaeIII • Les fragments d’ADN du gène TAS2R38 mesureront 221 pb (paires de bases) • Les allèles «goûteurs» seront coupés en deux par l’endonucléase HaeIII • Les allèles «non-goûteurs» ne seront pas coupés par l’endonucléase HaeIII car leur séquence de nucléotides est différente Collège Lionel-Groulx Animation sur les enzymes de restriction (endonucléases) Voir : Restriction Endonucleases Note: l’enzyme de restriction Hae III que nous utiliserons reconnaît la séquence GGCC et la coupe en plein centre, ce qui ne donne pas de « bouts collants » Collège Lionel-Groulx Électrophorèse • Une fois les fragments d’ADN coupés, il faut les séparer en fonction de leur grandeur • En appliquant un champ électrique à des molécules d’ADN, nous les forcerons à passer au travers d’un filtre de gel (agarose), les plus petits morceaux traversant plus rapidement le filtre que les gros fragments Collège Lionel-Groulx Électrophorèse (chap. 20) Collège Lionel-Groulx Résumé de la procédure • On va prélever vos cellules • On en extrait l’ADN • On amplifie (copie) un gène précis à l’aide de l’ACP • On essaie de couper le gène à l’aide d’une enzyme de restriction • On sépare les fragments de différentes tailles à l’aide de l’électrophorèse • L’analyse croisées des fragments (génotypes) et des phénotypes des cobayes nous indiquera le « type de relation » entre les deux allèles Collège Lionel-Groulx
