techniques_analyse_nov2007 JF Emile

DES de pathologie :
Pathologie moléculaire
Techniques d’analyse de l’ADN
J.F. Emile
Service de pathologie, Hôpital Ambroise Paré
Faculté de Médecine Paris-Ile de France Ouest
et INSERM U602

Pathologie moléculaire
• Objectifs du cours :
– Comprendre l’importance de la biologie
moléculaire dans le diagnostic anatomo-
pathologique, notamment en pathologie
tumorale
– Comprendre et critiquer des articles de
pathologie moléculaire
– Notions de base pour pouvoir s’impliquer
dans une activité de pathologie moléculaire
au sein d’un laboratoire

Prélèvement
tumoral frais
Fixation Inclusion en
paraffine Diagnostic histologique
Congélation Biologie
moléculaire
Toujours
Rarement
Prise en charge d’un prélèvement en anatomie
pathologique

Pathologie moléculaire
• Analyses in situ
– Protéines (expression) :
immunohistochimie (chromogène, IF,
confocal, cinétique,…)
– ARN (expression) : HIS (chromogène,
sondes radiactives)
– ADN
• FISH, CISH (Amplification, réarrangements)
• TUNEL (apoptose)
• Analyses « en tubes »

Techniques d’analyse « en tube » de l’ADN :
Plan du cours
• Extraction de l’ADN et contrôle de qualité
• Amplification de l’ADN
• Séquençage
• Analyses de l’ADN
– Détection de séquences exogènes (ex: pathogènes)
– Analyse des microsatellite (LOH et MSI)
– Détection de mutations
– Clonalité (HUMARA)
– Méthylation de l’ADN
– Analyses à haut débit