La réaction de polymérisation en chaîne ou PCR

La réaction de polymérisation en chaîne ou PCR (Prix Nobel de chimie en 1993 , Livre p 33)
La PCR (Polymerase chain reaction , réaction de polymérisation en chaine) est une technique qui permet d’amplifier (en plusieurs
millions d’exemplaires) un fragment d’ADN bien précis (microsatellite). La PCR se déroule in-vitro. Le fragment d’ADN a amplifier est
place dans l’appareil a PCR.
Première étape : la dénaturation
On dénature le fragment d’ADN à séquencer a une température de 95°C pendant une minute, afin de séparer les deux brins de
l’ADN.
Deuxième étape : l’hybridation
A une température de 50°C pendant une minute, on ajoute de courtes amorces nucléotidiques de synthèse monobrins,
complémentaires des deux extrémités de la séquence du fragment d’ADN a amplifier.
Troisième étape : la polymérisation
A une température de 72°C pendant une minute, des enzymes (ADN polymérases qui interviennent naturellement dans le processus
de réplication) sont ajoutées pour permettre la synthèse d’un brin complémentaire de chacun des deux brins séparés. On ajoute
quatre nucléotides (desoxyribonucleotides ou dNTP) : dATP, dTTP, dCTP, dGTP qui par complémentarité vont se lier a chacun des
deux brins. L’élongation commence a partir des amorces et se poursuit jusqu’a l’obtention de deux copies de l’ADN initial.
Les trois étapes sont répétées pendant n cycles. On obtient ainsi 2, 4, 8…jusqu’a 33 554 432 (225) copies au bout de 25 cycles !
Ainsi chez certaines bactéries, la PCR à montre que la copie d’un brin d’ADN se fait a une vitesse d’environ 1500 nucléotides par
seconde.
Chez les eucaryotes, la réplication de l’ADN s’effectue à la vitesse de 100 nucléotides par seconde.
Schématisation de la réaction de polymérisation en chaîne
http://www.ens-lyon.fr/RELIE/PCR/principe/anim/presentation.htm