accès à la ressource

Dénombrement ou numération
automatisée des cellules sanguines

Principes




par impédancemétrie
par diffraction de la lumière
par analyse en flux
Résultats de l’hémogramme
Année 2008
Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS)
POCHET
1
Principe COULTER par impédancemétrie
Le dispositif de mesure
Voltmètre mesurant la tension U aux
bornes du circuit
Générateur de courant
constant I
Électrodes placées de chaque côté du
micro orifice entre lesquelles existe
une impédance Z
-
+
Cuve contenant une solution saline
conductrice du courant électrique
aspirée par le micro orifice d’un tube
de verre
Z est constant
U = Z.I = constant
Le flux passant par le micro orifice ne contient que la solution d’électrolytes
Année 2008
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POCHET
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Principe COULTER par impédancemétrie
Les cellules sanguines sont mauvaises conductrices de l’électricité
L’aspiration entraîne les cellules à
passer les unes après les autres au
travers du micro orifice
-
+
Z
donc U = Z.I 
Chaque cellule, mauvaise conductrice du courant électrique, passant par le micro
orifice fait augmenter l’impédance entre les deux électrodes de mesure
Année 2008
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POCHET
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Principe COULTER par impédancemétrie
Les cellules sont comptées et mesurées après amplification du signal.
Les impulsions peuvent être visualisés sur un oscilloscope :
U en fonction du temps
Il y a proportionnalité entre l’impulsion de tension et la taille de la cellule
U
Possibilité de choisir les populations
selon leur taille avec des seuils
au-delà
ou en deçà
desquels les cellules ne sont pas prises
en compte
Temps
Année 2008
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POCHET
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Principe COULTER par impédancemétrie

Possibilité de classer les populations en fonction leur taille :
Histogrammes de distribution (%(relatif) en fonction du volume)
Discrimination entre hématies et thrombocytes, dénombrés dans la même dilution,
basée sur leur volume respectif
Double seuil
%
Plaquettes
Phénomène de coïncidence*
Globules rouges
fL
* Passage du micro orifice par deux cellules à la fois, donnant une petite sous population de volume
double, n’existant que sur de grandes populations et corrigé de façon statistique au niveau de la
numération des globules rouges (mais visible sur l’histogramme de distribution)
Année 2008
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POCHET
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Principe par diffraction lumineuse

Dispositif de mesure


Mise en flux pour étude individuelle au niveau de la zone d’inspection
Cellule de mesure où est focalisé un faisceau lumineux
Flux d’échantillon
Aucun signal
mesuré
Source lumineuse
monochromatique
Volume d’inspection vide
Année 2008
Arrêt du faisceau lumineux
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Principe par diffraction lumineuse
Les cellules sanguines diffractent la lumière
Détection d’un signal
Comptage et mesure
de la cellule
Présence d’une cellule dans la zone d’inspection
-> Diffraction de la lumière débordant l’écran et
venant exciter une cellule photoélectrique
Année 2008
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POCHET
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Autres mesures en flux

Possibilité de multiples mesures effectuées en
même temps au niveau de la zone d’analyse du flux
Mesure du flux lumineux
diffracté à grand angle :
Estimation de la
granularité du cytoplasme
Mesure du flux lumineux diffracté
à petit angle :
Estimation de la complexité
de la forme du noyau
Mesure du flux lumineux transmis :
Dosage de l’hémoglobine sur
suspension après lyse des
hématies
Estimation du volume du noyau
des cellules nucléées
Année 2008
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POCHET
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Autres mesures en flux

Possibilité de multiples mesures effectuées en même
temps au niveau de la zone d’analyse du flux
Mesure du courant de haute fréquence transmis
Estimation de la densité du noyau
Année 2008
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POCHET
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Autres mesures en flux

Possibilité de multiples mesures effectuées en même
temps au niveau de la zone d’analyse du flux
Cellules marquées par des marqueurs fluorescents spécifiques
Filtre spécifique
Mesure du flux lumineux passant le filtre avec
dénombrement et identification des cellules portant le marqueur
Présence d’ARN marqué : réticulocytes
Année 2008
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POCHET
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Autres mesures en flux

Possibilité de multiples mesures effectuées en même
temps au niveau de la zone d’analyse du flux
Cellules marquées par des marqueurs fluorescents spécifiques
Filtres spécifiques
Mesure du flux lumineux passant le filtre :
Dénombrement et identification des cellules portant le marqueur
Présence d’anticorps spécifiques de cellules : par exemple T4/T8
Année 2008
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POCHET
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Exemples de résultats d’hémogramme

Bilan érythrocytaire
Pop GR anormale (IDC > 15 %)
Observation des hématies sur
frottis coloré au MGG pour
constater
l’anisocytose
ou
autres anomalies de forme
ET
VGM
GR
Hb
Ht
VCM
TCMH
CCMH
IDC
2,7
12,2
35
128
45
34,5
18
Année 2008
Numération des globules rouges en 1012/L
Dosage de l’hémoglobine en g/dL
Hématocrite en %
Volume Cellulaire Moyen ou VGM en fL
Teneur Cellulaire Moyenne en Hémoglobine en pg
Concentration Cellulaire Moyenne en Hémoglobine en g/dL de GR
Indice de Distribution Cellulaire appelé aussi RDW ou IDR = coefficient d'anisocytose < 15 %
= valeur statistique correspondant ETx100/VGM
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POCHET
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Exemples de résultats d’hémogramme

Bilan thrombocytaire
Deux histogrammes
l’un représentant les valeurs mesurées
l’autre les valeurs extrapolées
Population plaquettaire anormale
(courbes dissociées)
VPM
Plt
VPM
35
9
Numération des plaquettes en 109/L
Volume Plaquettaire Moyen en fL
Observation de l’aspect des plaquettes sur frottis coloré au MGG pour
constater la présence d’un nombre de plaquettes diminué et une
hétérogénéité de taille
Année 2008
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POCHET
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Exemples de résultats d’hémogramme

Bilan leucocytaire
Réalisé sur une suspension sans érythrocytes ni plaquettes (lyse)
Histogramme de distribution tridimensionnel
Deux axes : volume en fonction de la diffraction
Code couleur donnant la 3ième dimension :
Bleu faible
Vert moyen
Rouge important
Jaune très important
GB
2,9
%
Ne
40
Ly
50
Mo
8
Eo
1
Ba
1
Année 2008
109/L
1.15
1.45
0.2
0.05
0.05
Seuils positionnant les populations normales
neutrophiles
lymphocytes
monocytes
éosinophiles
Basophiles non visibles sous cette représentation
Restes leucocytaires, amas de plaquettes et/ou
érythroblastes
Pop GB anormale (seuil mal défini entre Ly et Mo)
Vérification de la formule leucocytaire sur lame
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