L`hybridation fluorescente (FISH)

L'hybridation fluorescente
(FISH)
fluorescent in situ hybridization

Définition
•repérer la présence d'anomalies
chromosomiques par un système couplé
anticorps-fluorophore
•Les sondes
•L'hybridation
•La révélation
•L'observation :

Les sondes
un brin d'ADN comportant des nucléotides modifiés, à partir d'un brin matrice de
départ. polymériser le brin complémentaire entre des hexamères de monobrin (brins
composés de six nucléotides aléatoires)
N : brin complémentaire synthétise entre l'hexamère 1 et l'hexamère 2
M: brin matrice
En rose : les nucléotides marqués

trois types principaux de sondes
•séquences uniques: identification d’une séquence spécifique
•séquences multiples: spécifiques à un chromosome entier.
•ADN -satellite: identification de séquences au niveau du centromère du
chromosome.
Les sondes marquées : la biotine révélée par l'avidine
la digoxygénine révélée par un anticorps anti-digoxygénine,
les deux couplés à un fluorochrome

Le principe
L'ADN cible parmi l'ADN cellulaire
Dénaturation de l'ADN cellulaire par chauffage
Une sonde d'ADN complémentaire de l'ADN cible et
munie d'une molécule de reconnaissance (R).
Hybridation de la sonde et de la séquence cible.
Révélation par reconnaissance de la molécule R par un
anticorps anti R muni d'un fluorophore F.
L'observation au microscope à fluorescence permet de
visualiser la présence de la séquence cible.