La Génomique

Clonage Moléculaire

Définitions
Clonage :
Obtenir un morceau d’ADN à partir de la source originale
(Génome) et l’introduire dans un vecteur d’ADN
Sous-clonage:
Transfère d’une insertion d’ADN cloné ou une partie de
ce dernier d’un vecteur à un autre vecteur
Plasmide recombinant:
Vecteur dans lequel un ADN étranger a été introduit
Organisme recombinant
Organisme dans lequel un vecteur recombinant a été
introduit

3
Pourquoi cloner?
Séparer, identifier, manipuler ou
exprimer un fragment spécifique d’ADN

Étape 1- Séparer
Deux approches:
Fragmenter/digérer l’ADN génomique
Génère un très grand nombre de fragments
Peut-être difficile de retrouver le fragment
d’intérêt
Amplification par PCR
Beaucoup moins de fragments
Beaucoup plus facile de retrouver la séquence
d’intérêt

1 plasmide/1 cellule
Enzyme de
restriction
Enzyme de
restriction
Transformation
Cellules Hôte
Fragment
d’intérêt
Vecteur
approprié
Générer des extrémités
compatibles
Ligature
d’ADN
Ligature Intermoléculaire
Recombinant
Ligature Intramoléculaire
Non-Recombinant
Cloner
Cellule Recombinante Cellule Non-Recombinante