TROUSSE ELISA BVDV SEROLOGIQUE
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Pour sérums (Bovins) - Blocage - Monocupule BIO K 230/2 - BIO K 230/5 Le BVD (bovine virus diarrhoea) et la maladie des muqueuses (MD) sont deux entités cliniques différentes causées par un même virus. Le BVD est le résultat d’une infection aiguë d’animaux susceptibles qui peut survenir à n’importe quel âge de la vie post-natale. La mortalité du BVD est faible, l’affection étant de courte durée. A l’opposé, la maladie des muqueuses est une affection de faible morbidité mais dont la mortalité est très importante. Cette maladie des muqueuses se développe chez des animaux virémiques contaminés in utéro. La caractéristique de cette infection in utéro est l’existence d’une immunotolérance spécifique qui empêche les animaux de produire des anticorps contre la souche infectante mais pas contre une autre souche de BVD antigéniquement différente. Ces animaux infectés de façon persistante par le virus peuvent ne pas développer de signes cliniques pendant une très longue période et la seule manière de les déceler est d’avoir recours à des tests de laboratoire. Bien que la seule méthode valable de détection de ces animaux infectés de façon persistante reste la mise en évidence du virus BVD lui-même, il est possible d’avoir recours à un test sérologique pour éviter de devoir soumettre tous les animaux d’une exploitation à un test de mise en évidence du virus BVD à partir de leucocytes. C’est en effet parmi les animaux parfaitement séronégatifs qu’il y a le plus de chance de trouver des animaux infectés de façon persistante. Il ne faut toutefois pas oublier qu’on peut également trouver dans ce groupe des animaux qui n’ont jamais été en contact avec le virus. Les tests sérologiques permettent également de suivre l’évolution sérologique des animaux en cours de vaccination et d’identifier les animaux contaminés par le virus BVD en suivant leur séroconversion. Utilisation de la trousse La trousse est prévue pour déterminer le statut sérologique des bovins vis-à-vis du BVDV Fiabilité des résultats L’utilisation d’un anticorps monoclonal comme conjugué assure une excellente spécificité et des résultats très fiables. L’utilisation d’un anticorps monoclonal pour purifier la protéine NS3 sur la plaque permet également d’obtenir une excellente spécificité. Facilité d’utilisation Peu de manipulations sont nécessaires. Résultats disponibles en maximum 170 minutes. Protocole du test 1- 2- 3- 4- L’anticorps monoclonal est fixé sur la microplaque et il capture la protéine virale NS3. Ajouter les échantillons et les contrôles positif et négatif. Incuber 2 heures à 37°C+/-3°C. Laver la plaque Ajouter le conjugué. Incuber 1/2 heure à 37°C+/-3°C. Laver la plaque Ajouter la solution de TMB monocomposant. Attendre 10 minutes Ajouter la solution d’arrêt. Lire à 450 nm Bio-X Diagnostics - 38, Rue de la Calestienne (PAE) - 5580 Rochefort - Belgique Tél : 0032(0)84.32.23.77 - Fax : 0032(0)84.31.52.63 - E-mail : [email protected] www.biox.com TROUSSE ELISA BVDV SEROLOGIQUE 270 sérums sanguins ont fait l’objet d’une comparaison entre la trousse BIO K 230 (test de blocage) et un test ELISA d’immunocapture(BIO K 004). Les résultats figurent dans le graphique n° 1. Sur l’abscisse, 1 indique la valeur obtenue avec le sérum positif de référence de la trousse (E/P). Sur l’ordonnée, les valeurs sont données en pourcentage d’inhibition calculé en appliquant la formule suivante: % inhibition = (DO négatif - DO échantillon)/DO négatif DO négatif: densité optique obtenue sans sérum sanguin compétiteur Graphique n° 1 BVBV Immunocapture - Blocage % inhibition BVD sera 100,00 Seuil BIO K 230 (blocage) 80,00 60,00 40,00 Seuil 20,00 0,00 E/P -20,00 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 BIO K 004 Test BIO K d’immunocapture 230 BIO K 004 BIO K 230 + 105 2 107 + 1 162 163 106 164 270 Concordance entre les deux tests: Kappa = 0,98 La concordance entre les 2 tests est estimée excellente Landis et Koch, The measurement of observer agreement for categorical data Biometrics 1977, 33, 159-74 Bio-X Diagnostics - 38, Rue de la Calestienne (PAE) - 5580 Rochefort - Belgique Tél : 0032(0)84.32.23.77 - Fax : 0032(0)84.31.52.63 - E-mail : [email protected] www.biox.com Performances de la trousse 81 sérums sanguins ont fait l’objet d’une comparaison entre une trousse ELISA indirecte provenante d’une firme concurrente et le test ELISA de Blocage (BIO K 230). Les résultats figurent dans le graphique n° 2. Sur l’abscisse, les données représentent les densités optiques enregistrées tandis que sur l’ordonnée, figurent les pourcentages d’inhibition calculé en appliquant la formule suivante: % inhibition = (DO négatif - DO échantillon)/DO négatif DO négatif: densité optique obtenue sans sérum sanguin compétiteur Comparaison entre la trousse BIO K 230 (blocage) test indirect ELISAd'un indirect d’un concurrent Comparaison entre la trousse compétition BIO K 230 etet un un test ELISA concurrent Inhibition %%inhibition 100 60 40 20 Densité optique Densité optique 0 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,65 0,7 0,75 0,8 0,85 0,9 0,95 1 1,05 1,1 1,15 1,2 1,25 1,3 1,35 1,4 -20 indirect (firme concurrente) TestTest indirect (firme concurrente) Trousse concurrente BIO K 230 BIO 230 (Blocage) (compétition) BIO K K230 80 + 41 0 41 + 3 37 40 44 37 81 Concordance entre les deux tests: Kappa = 0,93 La concordance entre les 2 tests est estimée excellente Landis et Koch, The measurement of observer agreement for categorical data Biometrics 1977, 33, 159-74 Bio-X Diagnostics - 38, Rue de la Calestienne (PAE) - 5580 Rochefort - Belgique Tél : 0032(0)84.32.23.77 - Fax : 0032(0)84.31.52.63 - E-mail : [email protected] www.biox.com Performances de la trousse BIO K 230 : TROUSSE ELISA SEROLOGIQUE BVDV (BLOCAGE) Microplaques Solution de lavage Solution de dilution Conjugué Sérum positif Sérum négatif TMB mono-composant Solution d’arrêt BIO K 230/2 BIO K 230/5 2 1 1 1 1 1 1 1 5 1 1 1 2 2 1 1 (192 tests) X 100 ml (20 X) X 30 ml (5 X) X 0.5 ml (50 X) X 0.5 ml (1 X) X 0.5 ml (1 X) X 25 ml (1 X) X 15 ml (1 X) (480 tests) X 250 ml (20 X) X 30 ml (5 X) X 1.4 ml (50 X) X 0.5 ml (1 X) X 0.5 ml (1 X) X 55 ml (1 X) X 30 ml (1 X) Stabilité: 1 an entre +2°C et + 8°C. Bio-X Diagnostics - 38, Rue de la Calestienne (PAE) - 5580 Rochefort - Belgique Tél : 0032(0)84.32.23.77 - Fax : 0032(0)84.31.52.63 - E-mail : [email protected] www.biox.com Composition de la trousse
