dveloppement d`un test rt-pcr en temps rel pour la dtection

Effets bénéfiques de l’ajout d’une matrice protéique malléable à base de
lactobacilles dans l’alimentation humaine et/ou animale
Lucie Lamontagne1
Projet #405028
Durée : 12/2005-12/2008
FAITS SAILLANTS
Le travail réalisé a permis de mettre en évidence : 1) des propriétés
immunomodulatrices différentes des préparations solubles des matrices protéiques
malléables (MPM) et des lactobacilles utilisés pour la fermentation; 2) la capacité de ces
préparations à diminuer la production de chimiokines par les cellules épithéliales
intestinales; 3) les effets bénéfiques des MPM sur l’inflammation intestinale aigüe induite
par le sulfate de dextran, mais aussi 4) les effets des MPM et de la souche bactérienne
R2C2 sur l’inflammation intestinale lorsqu’administrées de façon préventive sous forme
de prétraitement.
OBJECTIFS ET MÉTHODOLOGIE
Les objectifs de ce projet étaient de rechercher les propriétés immunomodulatrices de
certains produits obtenus par la fermentation du lactosérum à l’aide de souches
sélectionnées de Lactobacillus kefiranofaciens développés par Technologie Biolactis inc.
Une MPM ainsi que des substances solubles et des bactéries ont été générées par
fermentation et leurs effets sur des lymphocytes, macrophages et cellules épithéliales
ont été évalués par la production de cytokines pro- et anti-inflammatoire et les voies de
signalisation intracellulaire utilisées. Il était aussi proposé de vérifier l’efficacité antiinflammatoire des MPM et de souches bactériennes lors de colites expérimentales
aigües chez des animaux et d’identifier les cytokines et les cellules suppressives
impliquées. Ainsi, des études in vivo ont été réalisées chez des groupes de souris
traitées simultanément ou de façon préventive avec des produits choisis afin d’en vérifier
les effets anti-inflammatoires lors de l’induction de la colite expérimentale par le sulfate
de dextran. De nombreux paramètres immunologiques ont été évalués tels des dosages
de cytokines par ELISA ou RT-PCR en temps réel et des immunomarquages des
populations lymphocytaires des tissus intestinaux.
RÉSULTATS SIGNIFICATIFS POUR L’INDUSTRIE OU LA DISCIPLINE
1
B
Production d'IL-10 par des macrophages de souris C57BL/6 nonstimulés et traités avec des produits de Biolactis
4000
***
Non-Dilué
3000
IL-10 (pg/ ml)
A) Les produits de fermentation du lactosérum
montrent des propriétés stimulantes pour les
lymphocytes suite à la production de cytokines
macrophagiques pro-inflammatoires et antiinflammatoires. Ainsi, certains produits de
fermentation diminuent la production de TNF-α
induites par le lactosérum ou par des LPS et le
PEP par l’induction de l’IL-6, de l’IL-10 et/ou de la
PGE2. Ces produits exercent leurs effets surtout
par l’activation des voies dépendant des MAPK
p38 et ERK et de la Cox-2. La souche
bactérienne R2C2 a induit aussi bien de l’IL-6
que de l’IL-10 chez des macrophages activés.
1/10
***
***
2000
1/100
***
1000
*
* **
**
**
**
**
Exp48
EPS
0
CTRL
LPS
PEP
PC010
FB030
Exp16
F igure 6: Production d’IL-10 par des macrophages
t raités avec les produits de Biolactis.
(* p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001)
Département des sciences biologiques, Université du Québec à Montréal, Montréal
C) Lors de la colite expérimentale induite par
une dose modérée de sulfate de dextran,
l’administration simultanée des MPMs a
corrigé substantiellement la perte de poids
des animaux, réduit la production intestinale
de TNF-α et rétabli la perte de lymphocytes B
dans les tissus épithéliaux.
21,00
Contrôle
DSS
DSS + MPM
20,00
poids (g)
B) Les produits de fermentation de
lactésérum ont tous diminué la production de
la chimiokine IL-8 par les cellules épithéliales
intestinales impliquées dans l’induction de la
réponse inflammatoire.
19,00
18,00
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Temps (jours)
D) L’utilisation préventive des MPM et de la bactérie R2C2 a empêché l’anémie induite
par le sulfate de dextran, mais a aggravé la perte de poids et l’inflammation du colon
malgré la production accrue d’IL-10 et la stimulation des lymphocytes T suppresseurs.
Ces effets ont été accompagnés de l’activation d’une nouvelle classe de lymphocytes
inflammatoires, les TH17.
APPLICATIONS POSSIBLES POUR L’INDUSTRIE
Les résultats obtenus sont prometteurs, car les différents produits de fermentation
peuvent moduler les paramètres inflammatoires autant in vivo qu’in vitro. Les effets antiinflammatoires semblent plus intéressants lors d’une utilisation simultanée, suggérant la
prise de ces produits lors de troubles gastro-intestinaux légers. D’autre part, des
modifications fines dans les conditions de production pourraient expliquer les différences
observées dans l’efficacité anti-inflammatoire des produits.
POINT DE CONTACT
Contact : Lucie Lamontagne, responsable du projet
Tél. : 514 987-3000 poste 3184
Téléc. : 514 987-4647
[email protected]
PARTENAIRES FINANCIERS
L’équipe de recherche tient à remercier le ministère de l'Agriculture, des Pêcheries et de
l'Alimentation et Technologies Biolactis inc. pour leur soutien financier, sans lequel le
projet n’aurait pu se concrétiser.