Introduction But du travail Résultats
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Introduction I. Les cellules dendritiques au sein du système immunitaire I.1. Les cellules dendritiques, une population spécialisée de cellules présentatrices d’antigènes I.2. Les sous-populations de cellules dendritiques I.3. Reconnaissance des pathogènes par le système immunitaire II. Les cellules dendritiques plasmacytoïdes II.1. Historique et origine des cellules dendritiques plasmacytoïdes II.2. Caractéristiques des cellules dendritiques plasmacytoïdes II.3. Les pDCs, cellules spécialisées dans la synthèse des IFNs de type I II.4. Induction de la synthèse des IFNs de type I dans les pDCs II.5. La famille des interférons a 50 ans II.6. Les pDCs en tant que cellules présentatrices d’antigènes II.7. Les pDCs et les IFNs de type I en pathologie III. Immunité néonatale III.1. La susceptibilité du nouveau-né aux infections III.2. Les réponses vaccinales chez le nouveau-né IV. Les cellules du système immunitaire dans le sang de cordon ombilical IV.1. Les lymphocytes chez le nouveau-né IV.2. Les cellules présentatrices d’antigènes But du travail Résultats I. Etude des réponses induites par des ligands spécifiques du TLR7 et TLR9 en sang de cordon ombilical. I.1. Phénotype des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs) et myéloïdes (mDCs) en sang total. I.2. Production de cytokines par les cellules du sang de cordon en réponse aux ligands TLR-7 et -9. II. Caractérisation des cellules dendritiques plasmacytoïdes du sang de cordon ombilical. II.1. Purification et viabilité des pDCs néonatales II.2. Production d’interférons de type I par les pDCs purifiées. II.3. Quantification par Luminex d’autres cytokines et chimiokines produites par les pDCs. II. 4. Maturation des pDCs néonatales en réponse au CpG et R-848. II.5. L’expression des TLRs par les pDCs néonatales II.6. Etude du profil d’expression des gènes induits par le R-848 II.7. La réponse des pDCs néonatales vis-à-vis des virus II.8. Etude des voies de signalisation des TLR7 et TLR9 Discussion I. Caractérisation des pDCs néonatales II. Les TLRs et leur voie de signalisation dans les pDCs néonatales II.1. Le facteur de transcription NF-κB dans les pDCs néonatales II.2. Le facteur de transcription IRF-7 dans les pDCs néonatales III. Rôle des pDCs dans les réponses immunes III.1. Implication des pDCs dans les réponses antivirales III.2. Induction de réponses adaptatives par les pDCs néonatales IV. Autres aspects de l’immaturité du système immunitaire du nouveau-né V. Implication clinique de l’immaturité du système immunitaire néonatal. V.1. Stratégies vaccinale en début de vie. V.2. Le sang de cordon en transplantation Matériel et Méthodes I. Manipulations des pDCs. I.1. Purification des pDCs à partir des échantillons de sang. I.2. Milieu de culture des pDCs I.3. Stimulation des pDCs I.4. Viabilité des pDCs I.5. Infection des pDCs II. Transfection des cellules mononucléées par l’ARN40 III. Dosage des cytokines et chimiokines III.1. En sang total III.2. Dans les surnageants de culture IV. Dosage des cytokines et chimiokines par LUMINEX V. Cytométrie de flux V.1. Analyse du phénotype des pDCs et mDCs en sang total V.2. Analyse du phénotype des pDCs purifiées V.3. Marquage intracytoplasmique d’IRF-7 VI. Purification des ARNms et quantification par RT-PCR en temps réel VII. Micro-arrays VII.1. Préparation de l’ARN VII.2. Processus Affymetrix VII.3. Analyse des données VIII. Western-Blotting IX. Quantification de la migration nucléaire par la technique de l’ImageStream Annexe
