Introduction But du travail Résultats

Introduction
I. Les cellules dendritiques au sein du système immunitaire
I.1. Les cellules dendritiques, une population spécialisée de cellules
présentatrices d’antigènes
I.2. Les sous-populations de cellules dendritiques
I.3. Reconnaissance des pathogènes par le système immunitaire
II. Les cellules dendritiques plasmacytoïdes
II.1. Historique et origine des cellules dendritiques plasmacytoïdes
II.2. Caractéristiques des cellules dendritiques plasmacytoïdes
II.3. Les pDCs, cellules spécialisées dans la synthèse des IFNs de type I
II.4. Induction de la synthèse des IFNs de type I dans les pDCs
II.5. La famille des interférons a 50 ans
II.6. Les pDCs en tant que cellules présentatrices d’antigènes
II.7. Les pDCs et les IFNs de type I en pathologie
III. Immunité néonatale
III.1. La susceptibilité du nouveau-né aux infections
III.2. Les réponses vaccinales chez le nouveau-né
IV. Les cellules du système immunitaire dans le sang de cordon
ombilical
IV.1. Les lymphocytes chez le nouveau-né
IV.2. Les cellules présentatrices d’antigènes
But du travail
Résultats
I. Etude des réponses induites par des ligands spécifiques du TLR7 et
TLR9 en sang de cordon ombilical.
I.1. Phénotype des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs) et myéloïdes
(mDCs) en sang total.
I.2. Production de cytokines par les cellules du sang de cordon en réponse aux
ligands TLR-7 et -9.
II. Caractérisation des cellules dendritiques plasmacytoïdes du sang
de cordon ombilical.
II.1. Purification et viabilité des pDCs néonatales
II.2. Production d’interférons de type I par les pDCs purifiées.
II.3. Quantification par Luminex d’autres cytokines et chimiokines produites par
les pDCs.

II. 4. Maturation des pDCs néonatales en réponse au CpG et R-848.
II.5. L’expression des TLRs par les pDCs néonatales
II.6. Etude du profil d’expression des gènes induits par le R-848
II.7. La réponse des pDCs néonatales vis-à-vis des virus
II.8. Etude des voies de signalisation des TLR7 et TLR9
Discussion
I. Caractérisation des pDCs néonatales
II. Les TLRs et leur voie de signalisation dans les pDCs néonatales
II.1. Le facteur de transcription NF-κB dans les pDCs néonatales
II.2. Le facteur de transcription IRF-7 dans les pDCs néonatales
III. Rôle des pDCs dans les réponses immunes
III.1. Implication des pDCs dans les réponses antivirales
III.2. Induction de réponses adaptatives par les pDCs néonatales
IV. Autres aspects de l’immaturité du système immunitaire du
nouveau-né
V. Implication clinique de l’immaturité du système immunitaire
néonatal.
V.1. Stratégies vaccinale en début de vie.
V.2. Le sang de cordon en transplantation
Matériel et Méthodes
I. Manipulations des pDCs.
I.1. Purification des pDCs à partir des échantillons de sang.
I.2. Milieu de culture des pDCs
I.3. Stimulation des pDCs
I.4. Viabilité des pDCs
I.5. Infection des pDCs
II. Transfection des cellules mononucléées par l’ARN40
III. Dosage des cytokines et chimiokines
III.1. En sang total
III.2. Dans les surnageants de culture
IV. Dosage des cytokines et chimiokines par LUMINEX
V. Cytométrie de flux
V.1. Analyse du phénotype des pDCs et mDCs en sang total

V.2. Analyse du phénotype des pDCs purifiées
V.3. Marquage intracytoplasmique d’IRF-7
VI. Purification des ARNms et quantification par RT-PCR en temps réel
VII. Micro-arrays
VII.1. Préparation de l’ARN
VII.2. Processus Affymetrix
VII.3. Analyse des données
VIII. Western-Blotting
IX. Quantification de la migration nucléaire par la technique de
l’ImageStream
Annexe