- enseignement Catholique

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AUTEUR : Pascale Papleux
Fiche d’expérience 4
Observation, à l’aide du microscope optique, de
cellules d’épithélium buccal humain
Cette expérience peut être réalisée par les élèves moyennant le respect des mesures préconisées dans
l’analyse de risques. Les points 1 à 3 de cette fiche seront alors mis à leur disposition.
Enoncé de l’activité
Pour observer des cellules animales au microscope optique, le prélèvement de cellules d’épithélium
buccal constitue un matériel de choix.
Un épithélium est un tissu de recouvrement constitué de une plusieurs couches de cellules jointives.
L’épithélium buccal se renouvelle de façon continue par division de cellules profondes, tandis que les
cellules superficielles meurent et se détachent.
1. Matériel et produits
- Une lame porte-objets
- Une lamelle couvre-objets
- Un écouvillon stérile à usage unique (ou un coton tige)
- Une pipette
- Colorants :
 le Lugol permet d’observer le noyau et les inclusions cytoplasmiques
 le bleu de méthylène permet de colorer à la fois les noyaux des cellules buccales, mais
aussi les bactéries qui cohabitent à l’intérieur de la bouche
2. Santé, sécurité
La réalisation d’expériences suppose le respect d’un certain nombre de règles permettant à chacun,
élèves et professeur, de vivre ces séances de laboratoire dans les meilleures conditions de sécurité.
Pour chaque local où se déroulent de telles expériences, existe un règlement de laboratoire,
approuvé par le Conseiller en Prévention. Il sera signé par le chef d’établissement, le professeur,
l’élève et ses parents/responsables.
Chaque élève a une bonne connaissance de ce document.
HGT - SCG
Biologie
UAA3

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Analyse de risques
3. Procédure
1) Sur une lame, déposer une goutte de liquide de lugol.
2) A l’aide d’un écouvillon stérile, racler délicatement l’intérieur de la joue.
3) Rincer immédiatement l’extrémité de l’écouvillon sur la goutte de colorant déposée sur la lame.
4) Jeter immédiatement l’écouvillon dans la poubelle à déchets
5) Prendre délicatement une lamelle couvre-objet par deux de ses côtés entre le
pouce et l’index. Appliquer ensuite un troisième côté de la lamelle contre le
liquide et la rabattre doucement sur la préparation.
6) Vérifier que le liquide est réparti uniformément sous la lamelle et que des bulles
d’air ne se sont pas accumulées sous la lamelle.
Phases
Points-clés
Sources de danger
Nature du risque
Mesures de prévention
préconisées
Avant
(Professeur)
Organisation de la
classe
Les déplacements des élèves
Afin de limiter les déplacements,
installer des postes de travail avec tout
le matériel nécessaire pour le groupe.
Pendant
(Professeur et
élèves)
Hygiène à respecter
lors du prélèvement
de l’épithélium buccal
Risque de contamination
Le prélèvement d’un fragment
d’épiderme buccal à l’aide d’un
écouvillon stérile doit se faire
individuellement et servira à préparer
une coupe microscopique personnelle.
Chaque élève sera donc invité à
réaliser sa propre coupe et à faire ses
propres observations.
Il faut aussi insister sur le fait que
réaliser le prélèvement d’épithélium
s’effectue en raclant délicatement
l’intérieur de la joue, en prenant soin
de ne pas se blesser et de ne pas faire
saigner l’intérieur de la bouche.
Les colorants
utilisés : le bleu de
méthylène et le lugol
Tâches sur les vêtements
Les élèves manipulent les colorants
avec des pipettes (compte-gouttes ou
pipette pasteur) afin d’en utiliser le
minimum.
La préparation
microscopique se
brise suite à une
manipulation
Risque de coupure
Les lames brisées au cours de la
manipulation doivent être placées, par
le professeur, dans un contenant
prévu pour la récupération du verre
cassé.
Après
(Professeur et
élèves)
Nettoyage et
rangement des lames
Nettoyage du matériel et des
mains de manière hygiénique
Les lamelles couvre-objet peuvent être
jetées à la poubelle, tandis que les
lames porte-objet seront nettoyées
minutieusement avec du savon
désinfectant.
Coupures si de la verrerie est
cassée
Les élèves appellent le professeur qui
se charge lui-même de ramasser les
débris.
Nettoyage des mains
Professeur et élèves se lavent les
mains en fin de séance.

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7) La préparation est prête pour être observée au microscope.
8) Réaliser la mise au point du microscope comme vu précédemment (voir la fiche sur l’utilisation
du microscope optique).
9) Effectuer les observations (à X40, X100 et X400)
10) Après avoir isolé une cellule seule, réaliser un dessin d’observation
11) Estimer l’ordre de grandeur d’une cellule d’épithélium buccal.
12) Dès que les observations sont terminées, nettoyer immédiatement et consciencieusement la
lame qui a servi à réaliser la préparation microscopique.
Cellules d’épithélium buccal (X400)
On observe une forme de cellule arrondie, dont le noyau se trouve au centre. La membrane plasmique,
très fie délimite chaque cellule. On distingue aussi des inclusions cytoplasmiques.
4. Notes pour le professeur
Le Lugol est un colorant qui permet de mettre le noyau et des inclusions cytoplasmiques plus
particulièrement en évidence, grâce à un phénomène de contraste lors de l’observation avec le
microscope optique.
Le Lugol peut être remplacé par une solution diluée de bleu de méthylène, qui colore également les
noyaux et les bactéries
5. Développements attendus principalement visés
Sur base de l’observation d’images de microscopie optique et électronique, modéliser la structure et
l’ultrastructure cellulaire (C1).
L’élève représente les différents types de cellules sous forme de schémas légendés. Il réalise, sous
forme de tableau, des comparaisons (par exemple concernant l’absence ou la présence de structures
particulières).
Comparer les tailles relatives de molécules et de cellules (par exemple : les tailles d’une cellule
animale, d’une cellule végétale, d’une bactérie, d’une mitochondrie, d’une macromolécule organique,
d’une molécule d’eau, d’un atome de carbone) (A1).
À partir de différents documents, l’élève détermine, grâce à l’échelle présente sur le document, les
dimensions des différents types de cellules, d’organites et de molécules et compare ces dimensions.
À partir de photographies réalisées au microscope (optique ou électronique), identifier et schématiser
la cellule photographiée (animale, végétale ou bactérienne) (T1).
À partir de microphotographies (obtenues au microscope optique ou électronique à transmission),
l'élève nomme le type cellulaire observé et réalise un schéma légendé des différentes structures
observables.

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6. Liens
- Site présentant la réalisation de préparations microscopiques, avec le détail des colorants
couramment utilisés :
http://www.chambon.ac-versailles.fr/util/methodo/prepa_micr.htm, page consultée le 2 février
2015
- Power point sur le processus de réalisation de préparations microscopiques :
www.ac-grenoble.fr/.../PrepMicroscopiqueSvt/PrepMicrosopique.ppt, page consultée le 2 février
2015