Protocole groupe 3 TS2 pdf

Mise en Situation :
On a observé des cultures de lymphocytes B et T (Cellules du système immunitaire,
participant à la destruction des pathogènes dans le corps humain). On a remarqué un contact
direct ou indirect entre LB et LT. À la suite de celui-ci, les LT peuvent :
-Se multiplier.
-Acquérir une nouvelle fonction (Différenciation).
-Synthétiser un messager extra-cellulaire.
Protocole:
La différenciation des LT permet la sécrétion d'interleukine- 2 (étant une protéine
synthétisée par les LT). Ceci permettra «d'avertir» les autres lymphocytes (qui ont détecté
le même antigène), de se diviser.
1- Les conditions de stimulations de sécrétion de l' Interleukine-2:
-Contact LB / LT;
-Message envoyé par le LB dans le LT;
L'enchaînement de ces deux conditions provoque l'incorporation du calcium, dans le LT.
2- L'incorporation du calcium dans le noyau des LT permet l'activation des gènes qui pourront
alors permettre la synthèse d'Interleukine-2.
3- Pour quantifier l'Interleukine-2, on réalise le test Elisa.
Réalisation du test ELISA :
Le test ELISA (acronyme de Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay ) est un test destiné à
détecter et/ou doser l'Interleukine-2 dans un milieu avec des LB et LT. Dans la technique de
dosage dite "en sandwich" (l'antigène qui va prendre en sandwich l'Interleukine), les puits
d’une microplaque sont tapissés avec un anticorps de capture (Rouge) capable de lier
spécifiquement l’antigène recherché (Interleukine-2).
L'anticorps de capture (Bleu) se fixe au plastique des puits par interaction électrostatique .

Il assure la spécificité du test. La solution à tester est ensuite déposée dans les puits de la
microplaque et si l'antigène recherché est présent il va se lier spécifiquement à l’anticorps de
capture (Bleu).
La coloration (Bleu) des anticorps permet la quantification d'Interleukine-2.
D'après notre test Elisa, il est juste possible de détecter la présence d'Interleukine-2 par la
coloration, on ne peut la quantifier. Pour cela il faut réaliser une courbe d'étalonnage:
mettant en relation l' absorbance en fonction de la quantité de produits colorés. Celui-ci est
proportionnel à la quantité d'Interleukine-2, d'après le test Elisa. L'absorbance se calcule
par la loi de Beer-Lambert A=kC, le C correspondant à la concentration de substrat.
On mesure plusieurs fois l'absorbance à partir de concentrations connues , c'est-à dire du
produit colorés, afin d'avoir quelques points de la courbe pour pouvoir la tracer.
Le test Elisa nous donne une couleur dont on mesure l'absorbance afin de déterminer la
concentration d'Interleukine-2 grâce à la courbe étalon.