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Mise en évidence de l’activité pectinolytique
Le milieu pectinase (15 g agar dans 519 ml eau distillée, 1 g extrait
de levure dans 20 ml eau distillée, 5 ml (NH4)2SO4 20 %, 5 ml solution
aqueuse de glycérol à 87 %, 250 ml solution aqueuse d’acide
polygalacturonique à 2 %, 200 ml tampon phosphate 0,1 M à pH 8, 100 ml
d’eau distillée, 1 ml de MgSO4, 7H2O 1 M) a permis la mise en évidence de
l’activité pectinolytique des bactéries du genre Erwinia. Les isolats obtenus
sont inoculés par piqûre centrale. Après 24 h d’incubation à 27°C, la boîte
est inondée par une solution aqueuse d’acétate de cuivre à 7,5 % et la
présence d’un halo blanc indique la présence d’une activité pectinolytique.
Identification
Les isolats à activité pectinolytique ont fait l’objet d’une
identification inspirée des caractères biochimiques de Cedeño et al. [4]. Les
tests sont réalisés en tubes et reposent sur l'utilisation de substrats carbonés :
test Kligler, test ONPG [ortho-nitro-phényl-galactopyranoside] de recherche
de la ß-galactosidase, milieu citrate de Simmons, test à l’uréase sur milieu
urée-indol, milieu mannitol-mobilité, test rouge de méthyle. Chaque tube est
inoculé avec une suspension bactérienne préparée dans de l'eau
physiologique stérile à partir d'une colonie fraîche. Les souches se
multiplient seulement si elles sont capables d'utiliser le substrat
correspondant.
Confirmation sur milieu différentiel
Un milieu différentiel permet de reconnaître un genre ou une espèce
grâce à son apparence unique et caractéristique. Le milieu PH (pectine
Hildebrand) [7] permet la caractérisation d’Erwinia carotovora subsp.
carotovora (0,015 g BBT, 10 ml solution CaCl2, 2H2O 10 %, 22 g acide
polygalacturonique, 15 g agar, 1000 ml eau distillée stérile, ajusté à pH 8,4).
Après inoculation par piqûre centrale et incubation 24 h à 27°C, on a une
zone de dépression entourant la colonie.