microscope def
publicité
PLAN Le microscope à fond clair principes les diverses pièces l’éclairage de Köhler L’examen en lumière polarisée L’examen en fond noir Le contraste de phase selon Zernicke Le contraste interférentiel Le microscope à fluorescence PLAN Le microscope à fond clair les diverses pièces principes l’éclairage de Köhler plans conjugués 1: plans image (limitant l’ouverture) lampe préparation condenseur objectif oculaire filament diaphragme de champ diaphragme d’ouverture plan focal objectif pupille L’OBJECTIF Pouvoir de résolution: capacité de séparer 2 points contigus Distance minimale de résolution(DMR): concept plus facile Equation d’Abbe: DMR= kλ/n.sinα k= constante, d’environ 0,5 λ= longueur d’onde n= indice de réfraction du milieu (entre lamelle et objectif) α= demi angle d’ouverture de la lentille de l’objectif n.sinα= fonction de la lentille, appelée ouverture numérique DMR= λ/2 ON L’ouverture numérique lentille frontale rayon lumineux non capté ON = n sinα α objet spécimen β cône de lumière du condenseur L’OBJECTIF Pouvoir de résolution: capacité de séparer 2 points contigus Distance minimale de résolution(DMR): concept plus facile Equation d’Abbe: DMR= kλ/n.sinα k= constante, d’environ 0,5 λ= longueur d’onde n= indice de réfraction du milieu (entre lamelle et objectif) α= demi angle d’ouverture de la lentille de l’objectif n.sinα= fonction de la lentille, appelée ouverture numérique DMR= λ/2 ON LE CONDENSEUR PARAMETRES Longueur d’onde: vers le bleu? ouverture numérique: qualité majeure d’un objectif contraste Coloration de l’objet amélioration des lentilles (apochromats) moyens optiques (contraste de phase) traitement du signal (vidéo) Différences d’indice de réfraction Epaisseur de l’objet: DMR = 1/10 de l’épaisseur de l’objet performances des lentilles aberration chromatique: les courtes longueurs d’onde ne sont pas focalisées au même endroit que les longues. objectif achromatique (corrigé pour bleu et rouge) aberration sphérique: le centre de l’image n’est pas focalisé au même endroit que la périphérie. objectif plan (corrigé pour vert) objectif apochromat(corrigé b,v,r, et 2 long d’onde) longueur de tube: 160mm, 170mm et infini Aberration chromatique • Aberration sphérique Eclairage de Köhler - mettre au point un objet - fermer l’iris condenseur (diaph. d’ouverture) - fermer l’iris d’éclairage (diaph. de champ) - centrer si besoin le condenseur - régler hauteur du condenseur pour mettre au point l’iris du diaphragme de champ - ouvrir presque complètement l’iris condenseur (7/8) - ouvrir suffisamment le diapgragme de champ (juste pour ne plus le voir) Limite du diaphragme De champ Limite du diaphragme du condenseur 1 2 A S 3 4 S : source ponctuelle A : orifice de petite taille 1, 2, 3, 4 rayons lumineux issus de S a, b, c, d rayons diffractés par A Optique géométrique S S Optique ondulatoire D A A S’ S’ Température de couleur Une pellicule couleur est caractérisée par: sensibilité (ASA, DIN) température (Kelvin: lumière du jour, artificielle) Trop jaune ( filament trop froid) Bonne température Trop bleu (filament trop chauffé) L’examen en lumière polarisée La lumière polarisée polariseur lumière naturelle lumière polarisée Examen en lumière polarisée polariseur lumière naturelle lumière polarisée corps anisotrope: divise le rayon lumineux polarisé en deux rayons de vélocité différente. Les deux rayons émergents, provenant de la même source, interfèrent: franges colorées polariseur analyseur lumière naturelle lumière polarisée extinction lumière naturelle corps lumière anisotrope polarisée lumière b = a cosα Amylose Dépôt artériel Dépots glomérulaires Rouge congo, fond clair Rouge congo, polarisation Fond clair Polarisation Fond clair Fond clair diaphragmé Fond Noir Fond noir: grains d ’argent brillant sur fond noir, faible grossissement Fond clair, fort gross. Comment augmenter le contraste des objets transparents contraste de phase (Zernicke) contraste interférentiel (Normarski) Contrastede phase (zernicke) Contraste de phase Contraste interférentiel Scolex, Fond clair Scolex vivant, contraste de ph. interférentiel Scolex vivant, contraste de ph. Interférentiel: détail.
