Biochimie Partie III CHAPITRE 1: ÉQUILIBRE ACIDE-BASE: ...................................................................... - 3 1.1. RAPPEL: ............................................................................................................................ - 3 1.1.1. KW (CONSTANTE D’IONISATION DE L’EAU) : .................................................................. - 3 1.1.2. ACIDE : ........................................................................................................................... - 3 1.1.3. ELECTRONEUTRALITÉ : .................................................................................................. - 3 1.2. TAMPON ORGANISME : .................................................................................................... - 4 1.2.1. GENERALITES : ............................................................................................................... - 4 1.2.2. TAMPON HCO3-/CO2 : ................................................................................................... - 4 1.2.3. TAMPON PROTEINES : ..................................................................................................... - 5 1.2.4. TAMPON PHOSPHATES : .................................................................................................. - 5 1.3. PHYSIO-PATHOLOGIE DE L’EQUILIBRE ACIDO-BASIQUE............................................... - 6 1.3.1. ACIDOSE METABOLIQUE : ............................................................................................... - 7 1.3.2. ALCALOSE METABOLIQUE : ............................................................................................ - 8 1.3.3. ACIDOSE RESPIRATOIRE : ............................................................................................... - 9 1.3.4. ALCALOSE RESPIRATOIRE : ............................................................................................ - 9 1.4. ÉLIMINATION URINAIRE : ................................................................................................ - 9 1.4.1. H+ :.................................................................................................................................. - 9 1.4.2. AMMONIAQUE : ............................................................................................................ - 10 CHAPITRE 2: INTEGRATION METABOLIQUE : ....................................................... - 11 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. 2.6. 2.7. GLUCIDES : ..................................................................................................................... - 11 LIPIDES : ......................................................................................................................... - 11 GLUCAGON – INSULINE : ............................................................................................... - 12 ÉPARGNE GLUCIDIQUE : ................................................................................................ - 13 AZOTE : ........................................................................................................................... - 13 FOIE : .............................................................................................................................. - 14 INTEGRATION : ............................................................................................................... - 15 - -2- Chapitre 1: Équilibre acide-base: 1.1. Rappel: [H+] détermine l’acidité de la solution et dépend de plusieurs facteurs 1.1.1. Kw (constante d’ionisation de l’eau) : H 2O H OH H . OH Kw H OH 10 (car H2O constante) H 2O neutralité: H OH 10 M 100nmol / L K 14 7 + plasma : 40nmol/L de H légèrement basique. Maintenu entre 30nmol et 50nmol (glucose : 5000nmol/L !) - production journalière CO2 : 20 000 000 nmol/L = production acide doit être éliminé (poumons, reins,…) L’homéostasie est maintenue grâce à des tampons et une excrétion énorme d’H+ - 1.1.2. Acide : HA H 2O A acide H 3O base.conjuguée acide.conjugué ( notéH ) base( cste) HA A H H A Keq HA Keq : permet d’évaluer la force d’un acide, acide fort : pK≤4 H KeqA.HA pH log H log pH pKa log - 1 1 A log log HA Ka H base acide plasma : [H+]= 4x10-8 pH=7,4 quand [B]=[A] : pH=pKa zone tampon = zone où pH varie peu pour des Δ de [] limite = pK +/- 0,5. pK2 H 3PO4 H 2PO4 H pK6,5 H 2PO4 HPO4 H 2 zones tampon 1.1.3. Electroneutralité : [Cations] = [anions]. Toutes les substances ne sont pas électriquement actives (NaCl Na++ Cl-) mais elles peuvent influencer les [ions]. -3- 1.2. Tampon organisme : 1.2.1. Généralités : - - Si pH >7,6 tétanie, si H < 7,1 coma Réactions intervenant dans [H+]: o Déshydrogénase: réduction consomme, oxydation produit Pyruvate + NADH+H+ lactate + NAD+ (LDH) o Kinase : production de H+ Glc + MgATP-- G6P-- + MgADP- + H+ voie métabolique : certaines consomment d’autres produisent directement des acides : glycolyse acide lactique (GR) 1.2.2. Tampon HCO3-/CO2 : A. H2CO3 o sous forme anhydre (CO2) en solution avec un équilibre de 0,3% avec H2CO3 : [H2CO3] = 0,003 [CO2] H2CO3 ↔ CO2 + H2O : réaction lente, accélérée par AC (anhydrase carbonique) : Abondante dans GR et cellules productrices de H+ Comporte un noyau Zn et peut être inhibée par certains sulfamidés o acide faible : H 2CO3 HCO3 H pK13,8 HCO3 CO3 H pK210,3 K1 HCO3 . H HCO3 . H H 2CO3 0,003.CO2 K '1 K1.3.103 3.106,8 106,38 K '1 0,003 Plasma(37C) : K '1 106,11 pK 6,11 B. CO2 : - CO2 libre : = CO2 dissous + H2CO3, dépend de la pression partielle en CO2 et de la solubilité : 5 .10 M/ mmHG mmHG o CO2 3 . 40 1,2mM so lub ilité - PCO2.sang.artériel o PCO2 : peut varier avec les mouvements respiratoires [CO2]tot= [CO2]libre +[HCO3-] + carbamates o HCO3- + carbamates = CO2 combinés o Carbamates : CO2 peut réagir avec amines des protéines (base) acides carbamiques : CO2 R NH 2 R NH COOH R NH COO sang : carbamates se forment surtout avec Hb 1,35 mEq/Lsang -4- o [CO2]libre=1,2mM o [HCO3-] : 7,41 6,11 log [CO2]tot = 25,2mM B B 101,3 20 HCO3 24mM A A C. Réserve alcaline : - Est-ce un bon tampon ? o système fermé : CO2tot constant B 1,2 HCO3 15,8.CO2 A CO2tot 25,2mM CO2libre HCO3 25,2 CO2 mM 1,5mM 16,8 HCO3 23,7 pH 7,31 log - - si ↓pH de 0,1, ↓ HCO3=0,3 mauvais tampon o système ouvert : CO2 peut être éliminé par les poumons CO2 libre constant HCO3- = 19mM si ↓pH de 0,1, ↓HCO3-=5mM bon tampon = réserve alcaline (RA) car pKA trop bas pour etre un bon tampon mais agit comme un antiacide : capacité d’encaisser les ↓ de pH (3-4mEq/↓0,1pH) o RA corps = RA plasma (~4,5% corps) + liquide interstitiel (~18% corps) = 24mEq/L o Pour 70kG : HCO3 extracellulaire = 70.0,225.5 = 79mEq/↓0,1pH HCO3 intracellulaire : ~30mEq/↓ 0,1 pH Au total : ~ 100mEq/↓ 0,1 pH o HCO3- : représente environ la moitié du pouvoir tampon du sang courbe de pH isobare (à PCO2 constante) : passage d’une courbe à l’autre se fait selon une pente définie par le tampon de protéines : Hprot ↔ Prot- + H+ 1.2.3. Tampon protéines : - grâce aux fonctions COOH et NH3 : sang : ~ 3mEqH+/↓ 0,1 PH (idem protéines intracellulaire) ensemble protéines ~ 50% pouvoir tampon 1.2.4. Tampon phosphates : Négligeable car maximum fixé = 0,1-0,3 mEq/↓ 0,1pH -5- 1.3. Physio-pathologie de l’équilibre acido-basique - - - pH = 7,41 à l’état normal : o variation [HCO3] : acidose ou alcalose métabolique o variation [CO2]libre : acidose ou alcalose respiratoire les 2 systèmes tampons (protéines et HCO3-) interagissent électroneutralité : o plasma : cations total : 154 mM (Na+ = 142mM) anions total : anions fixes : 114 mM (Cl- = 105 mM) base tampon : 40 mM (HCO3- et prot-) o dépend du rein : réabsorption NaCl o variation de HCO3- et prot- pour maintenir l’électroneutralité correction en 3 étapes : 1. modification base tampon (instantané) 2. compensation rapide : adaptation respiration (si troubles métaboliques) lente : adaptation [HCO3] par reins (si troubles respiratoires) 3. correction finale et retour à la normale -6- 1.3.1. Acidose métabolique : - très fréquente (acido-cétose métabolique !!) introduction d’un anion en excès (acide organique) par rapport à un cations 1. variations base tampon HCO3-↓ Prot-↓ 2. compensation respiratoire. CO2↓ par hyperventilation HCO3-↓ Prot-↓ HCO3- ↓↓ ↓ HCO3- = introduction d’anions si introduction >24mM HCO3- dépassé 3. correction : élimination de l’anion excédentaire acido-cétose : assez facile acidose lactique : difficile élimination rénale d’anions fixes acide éliminé A. Acido-cétose diabétique : - urgence médicale, souvent 1er signe d’un diabète débutant - < excès corps cétoniques : o production altéré ++ corps cétoniques tissu adipeux : libère Ag sans insuline ++ AG foie : transforme les AG en corps cétonique sans insuline ++ corps cétoniques o utilisation ↓ car – de succinyl CoA - limite physiopathologique : 5mM coma à 20 mM, 25mM très dangereux - en +, volume plasmatique ↓ car o glucosurie car seuil dépassé + d’eau dans les urines o corps cétoniques dans les urines + d’eau dans les urines [] Corps cétoniques ↑ Hypotension choc circulatoire perfusion ↓ hypoxie glycolyse ↑ ++ acide lactique acidose lactique - traitement : o volume plasmatique ↑ acide lactique ↓ o injection insuline + glucose car : glc sorbitol (accumulation dans les tissus, surtout nerveux) Posm ↑ mais compensé par glc si insuline : glc ↓↓ (jusqu’à 4x) déséquilibre osmotique œdème cérébral o injection HCO3- : délicat car ajout de Na+,… B. Acidose lactique : - [] lactate dépend de Va (apport) et Vu (utilisation) acidose lactique si Va > Vu - Va ↑ : o Déficience gluconéogenèse Déficience G6-phosphatase ou autres enzymes clés Alcoolisme chronique o Exercice physique intense anaérobie -7- - Vu ↓ : lactate plus transformé en pyruvate o déficience en pyruvate désoxygénase o hypoxie C. Intoxication au méthanol : Formation d’acide formique et autres dérivés + cécité D. Insuffisance rénale : - assez fréquent - < défaut de filtration : o réabsorption Na+ : normalement 99,5% 0,5% passe si plus que 10% de filtration, on peut ↓ réabsorption = ↑ ions qui passent (0,5% 5%) o réabsorption Pi : 85% 15% passe si plus que 10% de réabsorption, on ne peut pas laisser passer plus d’ions (15% 150% !!) compensation impossible - si Pi, SO4--,… ↑ acidose chronique - traitement : o dialyse, greffe o ↓ apport pi et SO4- - de Cys - de diester de phosphate - de viande 1.3.2. Alcalose métabolique : - - - origine principale : vomissement répétés perte de H+ perte de H+ ou + de cations : adaptation du système o prot- et HCO3- ↑ o compensation respiratoire : CO2↑ par hypoventilation HCO3- ↑ HProt ↑ HCO3- ↑↑ ↑ [HCO3-] = perte de H+ correction finale : rénale, élimination HCO3- et Na+ pour alcaliniser urines : ingestion de jus de fruits dans jus de fruits : anions + cations : o anions : métabolisables (oxydés) éliminés o cations : rarement métabolisables (K+, Na+) excès cations HCO3- ↑ régime végétarien, minéralocorticoïdes : alcalinisation rein : o Réabsorption excessive de Na+ NaOH dans le sang o Elimination excessive de Cl- HCl dans les urines -8- 1.3.3. Acidose respiratoire : - - échange gazeux insuffisant = insuffisance respiratoire (emphysème, asthme,…) PCO2↑ et PO2 ↓ = maladie des mineurs : PCO2 ↑ 1. Base tampon : PCO2↑ HCO3-↑ H+ ↑ Prot- ↓ ↑[HCO3-] = ↓[prot-] électroneutralité OK 2. compensation rénale : réabsorption de HCO3- dans les urines pour compenser PCO2 (car ↑ pas suffisante dans la 1ère phase) élimination de Cl- (pour l’électroneutralité) avec H+ HCO3- ↑ et prot - ↑ (car H+↓) o au total : HCO3- ↑, prot- constante si on retrouve une respiration normale : alcalose respiratoire 1.3.4. Alcalose respiratoire : Rythme respiratoire ↑ (psychologique ou volontaire) PCO2 ↓ 1. base tampon : HCO3- ↓ et prot- ↑ car H+ ↓. Electroneutralité OK 2. Reins : réabsorption HCO3-↓ pour compenser PCO2↓ (car ↓pas suffisante dans la 1ère phase) Réabsorption de Cl- et de H+ prot -↓ HProt constant) 1.4. Élimination urinaire : 1.4.1. H+ : - On élimine 70 mEq de H+/jour 700 mEq/jour si jeune (~ 1L/HCl !!!) - pH urinaire : o 7,4 24 mM de HCO3o 6,11 (pH normal) 1,2 mM de HCO3 On peut [HCO3-] éliminée pour lutter contre l’alcalose (mais peu efficace contre l’acidose -9- 1.4.2. Ammoniaque : - NH4+ urée (dans le foie) 0,5Mol dans le sang (30g/jour) reins (éliminés) o La formation d’urée nécessite le HCO3o Si jeun prolongé pH↓ à cause des corps cétoniques synthèse urée ↓ pour ne pas trop diminuer la réserve alcaline - autres mécanisme d’élimination de NH4+ : formation Gln o zonation dans le foie : permet l’épuration hépatique complète de Nh4+ hépatocytes proches de la veine porte : captent beaucoup de BH4+ (mais pas tout) et forme de l’urée hépatocytes près de la veine centro-lobulaire : transforment le NH4+ en Gln (Glu + NH4+ + ATP Gln + H2O + ADP+ Pi) o reins : NH4+ produit éliminé 1. Gln + H2O Glu + NH4+ (par glutaminase) 2. Glu α-cétoglutarate + NH4+ (par Glu déhydrogénase) Α-cétoglutarate: utilisé dans la gluconéogenèse (précurseur de glc) rein participe + à la gluconéogenèse Gènes glutaminase : régulés par pH [] peut ↑ 500x si acidose ! NH4+ ↔ NH3 + H+ : pK=9,4 o pH= 7,4 : NH4+/NH3 = 100/1 o pH= 6,1 : NH4+/NH3 ↑↑ Presque pas de limite à la capture de H+ par NH3 sans trop modifier le pH on passe facilement de 70 mEq/jour à 700 mEq/jour. - - 10 - Chapitre 2: Intégration métabolique : 2.1. Glucides : - - - [Glc] maintenu en homéostasie (équilibre dynamique) : Va = Vu o nécessite un feedback - : [Glc]↑ insuline ↑ [Glc]↓ o à l’état nourri : Va = alimentation Vu = oxydation (presque pas d’élimination rénale) o A jeun : Vu : ne change pas Va = gluconéogenèse + glycogènolyse Va toujours = Vu !!! Contrôle : o Insuline o Glucagon + Glucocorticoïdes, catécholamines, GH,… pathologie : hyperglycémie dans les 2 cas car Va ↓ et Vu↑ o [glc] n’agit plus sur l’insuline = diabète de type I (insulinodépendant) hypoinsulinémie en phase initiale o insuline n’agit plus sur [glc] = diabète de type II (insulinorésistant) hyperinsulinémie en phase initiale. 2.2. Lipides : - - pas d’homéostasie des AG car pas de rétrocontrôle o ↑: jeune repas riche en graisses médicaments : héparine stimule lipoprotéine lipase (LPL) o ↓ : nourri déterminant [] : Va/Vu o Va : AG stockés sous forme de triglycérides dans le tissu adipeux libération dépend surtout de LHS (Lipase Hormono Sensible) qui ↑ à jeun ou exercice physique car : activée par adrénaline, glucagon bloquée par insuline : ↓ AG libre par insuline quasi immédiate et massive - 11 - o - - Vu : majorité des tissus utilisent les AG proportionnellement à leur apport (car oxydation préférentielle des AG) mais dépend de la consommation énergétique (↑ si exercice physique) Si pas d’exercice physique mais lipolyse ↑ (diabète) albumine dépassée AG agissent comme des détergents (car pas de rétrocontrôle -) Corps cétoniques : même mécanisme ( < acide gras) , pas de rétrocontrôle – o Va : ↑↑ si diabète ↑ si à jeun o Vu : ↑ à jeun o Utilisable par le cerveau (épargne glucidique épargne protéique) A jeun : production de glucose indispensable pour le cerveau (nécessite 120-150 mg) o origine : lactate (1/3), glycérol (1/3) et AA (1/3) mobilisation graisses et protéines o réserve de graisses suffisantes pour tenir 3 mois mais maximum de jeune = 57 j car après il n’y a plus de protéines : plus de muscles os traversent la peau, cœur et poumon inefficace plus de défenses immunitaires Posm incorrecte Plus de coagulation efficace o Durerait encore – si pas de corps cétoniques 2.3. Glucagon – insuline : - - - glucagon R AC AMPc PKA qui active : o activation production hépatique de glucose 1. phosphorylase kinase phosphorylase act. dégradation glycogène ↑ 2. glycogène synthase inact. STOP synthèse glycogène 3. pyruvate kinase inact. STOP glycolyse 4. PFK2 inact./FBPase act. F-2,6-P2 ↓ glycolyse ↓ et gluconéogenèse↑ 5. CREP-P G6Pase ↑ + PEPCK ↑ gluconéogenèse ↑ o Lipides : 6. LHS act. lipolyse ↑ 7. ACC inact. STOP lipogenèse + activation oxydation AG Muscle: utilise AG < tissu adipeux Foie: oxydation AG corps cétoniques ↑ 8. HMGCoa-réductase inact. (?) cholestérol ↓ 9. Protéines (?) Adrénaline : o Rβ AC même effets que glucagon : présent dans de nombreux tissus (>< Rglucagon : presque uniquement dans le foie + tissu adipeux) o Rα PLC DAG + IP3 Ca++↑ phosphorylase kinase act. (via CaM) dégradation glycogène ↑↑ Autres effets peu connus Insuline PI3 kinase PIP3 PKB qui active : 1. PDE ↑ AMPc ↓ PKA ↓ effet opposé au glucagon Production hépatique de glucose ↓ + Synthèse protéines ↑ 2. ↑ GLUT 4 utilisation périphérique ↑ - 12 - 3. expression des gènes : GK ↑ utilisation par le foie ↑ Pyr K ↑ 4. Pyruvate déshydrogénase act. (mitochondriale) : point de non retour car pyr acétylCoa qui ne peut plus reformer du glucose Glc graisse ou énergie. 5. LPL ↑ (activation du gène)1 2.4. Épargne glucidique : - utilisation préférentielle d’AG dans les tissus = cycle de Randle oxydation doit bloquer l’utilisation du glucose - passage glc AG = flexibilité métabolique diabétique : pers sa flexibilité métabolique (toujours en « mode » à jeun) autres mécanismes d’épargne glucidique : o corps cétoniques : dans le cerveau o ↑ seuil rénal pour le lactate utilisé dans la gluconéogenèse 2.5. Azote : - NH4+ ne peut pas se retrouver libre dans le plasma (poison) 1 NB : ♀ qui allaite n’a presque plus de LPL sauf dans la glande mammaire presque tous les lipides passent dans le lait - 13 - - Jeûne : synthèse urée↓ et gln ↑ Cycle de Cori : ala pyr glc AA glucoformateur : rentre comme intermédiaire dans le cycle de Krebs mais après la perte de C (>< acétylCoA) peuvent donner du glc - NB : acétylCoA perd 2 C point de non retour. Déterminé par PDH 2.6. Foie : - - 1 Rôle : o Détoxification : NH4+ urée / Gln Xénobiotiques : via CytP450 o Distribution énergétique : foie = glucostat Nourri : Glucose glycogène Lipide TAGs1 exportation vers tissu adipeux sous forme de VLDL (nécessite une lipoprotéine) A jeun : Glycogène glucose AA glucose Lipides corps cétoniques (pas utilisés sur place) Lipides cholestérol sels biliaires o Synthèse composé essentiels : Protéines plasmatiques (sauf Ig) Hème Base puriques/pyrimidiques Stock vitamine (B12 !) Source énergétique : o Nourri : AA absorbés dans l’intestin o A jeun : β-oxydation des AG jusqu’à l’acétylCoA ( corps cétoniques) NB : 50% synthèse < foie, et 50% < tissu adipeux - 14 - 2.7. Intégration : - - - Muscle : stock de glycogène uniquement pour le muscle durée du stock dépend du travail : o contraction forte : 1 min o hypoxie : 20 min une partie des AA est utilisée pour remplacer les protéines chylomicrons : passent par le chyle arrive dans le foie après les autres organes cerveau : o stock de glycogène très faible, dure 3 min. en cas d’hypoxie o consommation de glucose constante car ce n’est pas la consommation qui change en fonction de l’activité mais les zones qui s’allument. o Ne peut pas utiliser d’AG car ils ne traversent pas la barrière hématoencéphalique cœur : stock de glycogène dure 10 min si hypoxie, ischémie,… GLUT4 : également recruté par AMPk (indépendamment de l’insuline) si effort (ATP ↓ et AMP ↑) GLUT4 ↑ - 15 - Nourri Foie - Glucose (< intestin) glycogène (+ TAG si on dépasse le seuil du glycogène) - AA (< intestin) CO2 + énergie - Chylomicron résiduel VLDL (avec TAG) muscles - Chylomicrons (car LPL) - VLDL - Glc Tissu adipeux Cerveau - Chylomicrons (car LPL) GLUCOSE - VLDL (120-140 g/j) - Glc α- glycérol-phosphate (+ acylCoA) TAG - GLUT4↓ - Destruction protéines AA pour le foie - Utilise AG et corps cétoniques - GLUT4↓ - LHS TAG AG pour le foie et le muscles A jeun - Production hépatique de glucose o < glycogénolyse o <gluconéogenèse : < lactate/ pyruvate, glycérol et AA - βoxydation acétylCoA corps cétoniques pour muscle et cerveau - GLUCOSE ( 80-90 g/j) - Corps cétoniques (< foie) - de glc nécessaire