Article 2 : Les cellules entières permettent la - TEL (Thèses-en

Université Joseph Fourier Grenoble 1
Thèse
Présentée par Gabrielle LUI
Pour obtenir le grade de Docteur de l’Université Joseph Fourier
Discipline : Biologie
Etude pré-clinique pour la mise au point d’une
thérapie cellulaire antitumorale utilisant les cellules
présentatrices d’antigènes dans les Lymphomes B non
Hodgkiniens
Soutenue le 28 janvier 2005 devant le jury composé de :
Pr Jean-Claude Bensa
Pr. Jean-Pierre Farcet (rapporteur)
Pr. Patrice Marche
Dr. Francine Brière (rapporteur)
Dr. Joël Plumas (directeur de thèse)
Thèse préparée à l’Etablissement Français du Sang
Laboratoire Recherche et Développement
29, avenue Maquis du Grésivaudan
38701 La Tronche Cédex
U.F.R de Biologie
Année 2004/2005

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Remerciements
Je voudrais tout d'abord remercier Joël Plumas, qui m'a accueillie dans son laboratoire
pour faire un DEA, puis m'a dirigée pendant mes trois années de thèse. Merci pour ton suivi
constant. Je voudrais remercier en même temps Laurence Chaperot qui m'a beaucoup aidée et
encadrée dans mon travail. Je vous souhaite de fructueuses recherches sur votre nouvelle
thématique.
Je voudrais également remercier le Professeur Jean-Jacques Sotto, qui m'a accueillie dans
le Groupe de Recherche sur le Lymphome, à l'époque où il était encore directeur du groupe.
Je suis très honorée que le Docteur Brière, et le Professeur Farcet aient accepté d'être
rapporteurs de ma thèse et de juger mon travail. Que le Professeur Marche soit également
remercié d'avoir bien voulu participer à ce jury en tant qu'examinateur. Je voudrais remercier
chaleureusement le Professeur Bensa qui, non seulement m'a accueillie à l'Etablissement
Français du Sang, mais a aussi accepté de faire partie de mon jury de thèse.
Je remercie la Ligue contre le cancer, Comité de Haute-Savoie, qui m'a soutenue
financièrement durant ces années de thèse.
Enfin je n’oublierai pas tous les autres membres du labo, qui m’ont aidée par leurs compétences
ou leur présence et soutien quand tout allait de travers ;
Jean-Paul, merci pour ton aide précieuse, car je ne compte plus toutes les manips que tu as faites
pour moi, tes blagues en tous genres, et je pense que à chaque fois que j’entendrai Léonardo et
Kate, je penserai à toi !
La personne avec qui j’ai le plus travaillé est certainement Olivier. Nous avons passé quatre
bonnes année à travailler ensemble malgré les orages et les tempêtes. Moi non plus je n’oublierai
pas ces longues soirées devant le microscope à chercher les cellules … bon alors elles sont vertes
ou rouges ? ? ni les soirées-discussions dans le labo quand ça n’allait pas… dis à Tonton Olivier
qu’est-ce qui ne va pas… merci pour ton aide précieuse, et aussi tes blagues avec Mongolito, les
éthiopiens ou même Jésus.

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Merci grande Ariannou pour ta tranquille présence qui est un bienfait pour nous tous, et pour
ton aide pour l’ortograffe. A chaque fote je penserai a toa. Qu’est-ce que je vai fair sens toa ? ?je
vai écrir aveque dé phote de par tou ! ! au ce court.
Et Mariam, qui a fait un petit tour chez nous… merci pour ta gaieté et ta fidélité, et les soirées
chez toi avec Olivier et Aurélie à manger des pizzas ou des glaces selon les saisons.
Enfin je voudrais remercier les personnes avec qui j’ai pu travailler ; Aurélie qui nous a apporté
sa bonne humeur lorsqu’elle a squatté parmi nous, Juliette, qui a commencé sa thèse, tous les
membres du labo d’immunocyto, Ghislaine, Christine, Patricia, Richard, Michel et leur grand
chef Marie-Christine, et à l’IAB Patricia et Leila, qui nous ont permis de faire des photos.
Je remercie tous mes amis qui m’ont soutenue parfois de très loin. En espérant que personne ne
sera vexé, je voudrais remercier en particulier une amie, Alex, qui d’Australie a toujours su me
dire les mots pour m’encourager.

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Résumé
Dans la perspective du développement d’une immunothérapie antitumorale dans les
lymphomes B, nous avons validé l’obtention et la manipulation de cellules tumorales et défini
quelles étaient les cellules présentatrices d’antigènes (APC) les plus efficaces. Nous avons mis
au point des techniques d’obtention de cellules entières opsonisées, nécrotiques, et apoptotiques
compatibles avec une application clinique (résultats de l’article 1). Utilisant ces différentes
préparations cellulaires pour charger les APC, nous avons ensuite comparé la cross-présentation
d’antigènes contenus dans les cellules tumorales entières par les macrophages (M) et les
cellules dendritiques myéloïdes (MDC). A l’opposé des M, les MDC sont capables de cross-
présenter efficacement des antigènes provenant des cellules tumorales entières intactes,
opsonisées, ou apoptotiques, mais pas des cellules nécrotiques (résultats de l’article 2). Nous
avons enfin voulu évaluer les capacités de capture et de cross-présentation d’antigènes des
cellules dendritiques plasmacytoïdes (PDC) grâce à une lignée PDC générée dans le laboratoire
(résultats de l’article 3). Nous avons montré que les PDC présentaient de faibles capacités
d’endocytose et que, contrairement aux DC myéloïdes, elles n'étaient pas capables d’endocyter
du matériel de cellules vivantes traitées ou non. En revanche, quand les cellules tumorales ou
cibles étaient infectées, nous avons observé que les PDC pouvaient endocyter du matériel
cellulaire, s’activer et cross-présenter les antigènes viraux à des lymphocytes T CD8+. Ce travail
permet de définir les conditions d’utilisation de cellules tumorales et des cellules présentatrices
d’antigènes dans les lymphomes B pour une application potentielle en clinique. D’autre part, il
apporte des informations tout à fait novatrices sur le rôle des cellules dendritiques
plasmacytoïdes dans l’immunité adaptative.

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Table des matières générale
Introduction .................................................................................................................................... 1
1ère partie : Développement d’une réponse immune...................................................................... 3
A. Les cellules dendritiques et les macrophages ...................................................................... 3
1 Origine et différenciation des m et des DC _______________________________________ 3
2 Répartition des DC et des M in vivo ____________________________________________ 5
Les macrophages ............................................................................................................................... 5
Les DC myéloïdes ............................................................................................................................. 6
Les cellules dendritiques plasmacytoïdes ......................................................................................... 6
3 Migration des m et DC _______________________________________________________ 7
Sans inflammation ............................................................................................................................. 7
Lors d’une réaction inflammatoire .................................................................................................... 8
4 Reconnaissance des pathogènes et capture d’Ag ____________________________________ 9
Les différents récepteurs ................................................................................................................... 9
Les différentes voies d’endocytose ................................................................................................. 14
Différentes capacités des APC pour la capture de l’Ag .................................................................. 15
5 Activation des APC _________________________________________________________ 15
Maturation des MDC ...................................................................................................................... 15
Maturation des PDC ........................................................................................................................ 16
Activation des m .......................................................................................................................... 16
Dégradation des Ag ......................................................................................................................... 17
6 Présentation des Ag _________________________________________________________ 17
Apprêtement des Ag associés aux molécules de classe II du CMH ................................................ 17
Apprêtement des Ag associés aux molécules de classe I du CMH ................................................. 18
La cross-présentation ...................................................................................................................... 19
Présentation par les molécules CD1 ................................................................................................ 20
B. Activation d’une réponse immune adaptative .................................................................. 21
1 Les trois signaux pour l’activation des lymphocytes T _______________________________ 21
Signal 1 : Interaction du TCR avec le complexe CMH/peptide ...................................................... 21
Signal 2 : interaction entre les molécules de costimulation............................................................. 22
Signal 3 ........................................................................................................................................... 24
2 Réponses Th1 et Th2 ________________________________________________________ 24
3 Les lymphocytes T régulateurs (Treg) ___________________________________________ 25
2ème partie : Surveillance antitumorale ........................................................................................ 27
A. Existence d’une surveillance antitumorale ....................................................................... 27
1 « Tumor shaping » ou sélection des cellules tumorales par pression du système immunitaire 27