Stage proposé par « Prénom NOM

Stage proposé par Jean-Jacques LAREYRE
Chargé de Recherches INRA
Station Commune de Recherche en Ichtyophysiologie, Biversité et Environnement (SCRIBE), Campus
de Beaulieu, batiment 16, 35042 Rennes cedex
Téléphone : 02 23 48 57 23
Mail : [email protected]
Directeur du Laboratoire : Patrick PRUNET
Recherche de promoteurs géniques capables de cibler l’expression de transgènes dans la
gonade de poissons transgéniques GFP
Projet de stage :
Le sujet de stage proposé s’inscrit dans le cadre d’un contrat de recherche (SPERMGEN)
financé par l’ANR qui vise à explorer in vivo, par transgénèse, l’impact physiologique de gènes
(préalablement sélectionnés par des approches transcriptomiques) sur l’initiation et/ou le déroulement
de la gamétogenèse chez les poissons.
Le stage de Master 1 consistera à caractériser des lignées de poissons transgéniques
produites dans l’objectif d’identifier des fragments d’ADN promoteur qui pourront, par la suite, être
utilisés pour modifier la fonction de gènes d’intérêt spécifiquement dans la gonade. Les fragments
d’ADN promoteurs testés sont issus de gènes exprimés préférentiellement dans la gonade. Ils ont été
d’abord fusionnés à un gène rapporteur codant pour la GFP puis ils ont été introduits dans le génome
de poissons modèles (zebrafish ou médaka) par microinjection chez l’embryon au stade une cellule.
Le génotypage des animaux transgéniques sera réalisé par PCR sur ADN génomique puis par
southern blot. L’analyse de l’expression du transgène sera réalisée par une observation directe par
microscopie à fluorescence, par PCR quantitative en temps réel sur différents tissus chez l’adulte, et
par hybridation in toto chez l’embryon.
Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
Extraction d’ADN génomique, PCR, PCR quantitative en temps réel, extraction d’ARN, réverse
transcription, hybridation in toto, immunohistochimie, microscopie à fluorescence
Publications du responsable de stage au cours des 5 dernières années :
Lareyre J.J., Ricordel M.J., Mahé S. Goupil A.S., Vizziano D., Bobe J., Guiguen Y. and Le Gac F.
2008 Two new TGF beta members are restricted to the gonad and differentially expressed during sex
differentiation and gametogenesis in trout. Cybium , suppl, sous presse.
Le Gac F., Lareyre J.J., Montfort J., Esquerré D. and Houlgatte R. Transcriptional analysis of
spermatogenesis regulation by sex steroids in trout. Cybium , suppl sous presse.
Sambroni E, Le Gac F, Breton B and Lareyre JJ. 2007. Functional specificity of the rainbow trout
(Oncorhynchus mykiss) gonadotropin receptors as assayed in a mammalian cell line. J Endocrinol,
195: 213-228.
Suzuki K, Yu X, Chaurand P, Araki Y, Lareyre JJ, Caprioli RM, Orgebin-Crist MC, Matusik RJ. 2007.
Epididymis-specific lipocalin promoters. Asian J Androl, 9:515-521.
Kah O, Lethimonier C, Somoza G, Guilgur LG, Vaillant C, Lareyre JJ. 2007. GnRH and GnRH
receptors in metazoa: a historical, comparative, and evolutive perspective. Gen Comp Endocrinol,
153:346-364.
Suzuki K, Yu X, Chaurand P, Araki Y, Lareyre JJ, Caprioli RM, Matusik RJ, Orgebin-Crist MC. 2006.
Epididymis-specific promoter-driven gene targeting: a transcription factor which regulates epididymisspecific gene expression. Mol Cell Endocrinol, 250:184-189.
Britan A, Lareyre JJ, Lefrancois-Martinez AM, Manin M, Schwaab V, Greiffeuille V, Vernet P, Drevet
JR. 2004. Spontaneously immortalized epithelial cells from mouse caput epididymidis. Mol Cell
Endocrinol, 224:41-53.
Suzuki K, Lareyre JJ, Sanchez D, Gutieres S, Araki Y, Matusik RJ and Orgebin-crist M-C. 2004.
Molecular evolution of a multigene subfamily encoding epididymal lipocalin localized on the [A3] locus
of mouse chromosome 2. Gene, 339:49-59.
Kah O, Lethimonier C and Lareyre JJ 2004. Gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) in metazoa. J
Soc Biol 198:53-60.
Suzuki K, Drevet J, Hinton BT, Huhtaniemi I, Lareyre JJ, Matusik RJ, Pons E, Poutanen M, Sipila P
and Orgebin-Crist MC. 2004. Epididymis-specific promoter-driven gene targeting: a new approach to
control epididymal function? Mol Cell Endocrinol, 216:15-22.
Lethimonier, C., Madigou, T., Munoz-Cueto, J.A., Lareyre, J.J., Kah, O. 2004. Evolutionary aspects of
GnRHs, GnRH neuronal systems and GnRH receptors in teleost fish. Gen. Comp. Endocrinol. 135, 116
Fouchécourt, S., Lareyre, J.J., Chaurand, P., Dague, B.B., Suzuki, K., Ong, D.E., Olson, G.E.,
Matusik, R.J., Caprioli, R.M., Orgebin-Crist, M.C. 2003. Identification, immunolocalization, regulation,
and postnatal development of the lipocalin EP17 (epididymal protein of 17 kilodaltons) in the mouse
and rat epididymis . Endocrinology. 144 (3), 887-900
Lethimonier, C., Kah, O., Lareyre, J.J. 2003. Evidence for two distinct GnRH receptor types
expressed in teleosts. Fish Physiol. Biochem. 28, 45-46
Ralph, J.L., Orgebin-Crist, M.C., Lareyre, J.J., Nelson, C.C. 2003. Disruption of androgen regulation
in the prostate by the environmental contaminant hexachlorobenzene. Environ. Health Perspect. 111
(4), 461-466
Sambroni, E., Lareyre, J.J., Breton, B. 2003. Rainbow trout FSHR is highly polymorph and is
differently expressed throughout gametogenesis. Fish Physiol. Biochem. 28, 361.
Suzuki, K., Araki, Y., Zhu, M.Y., Lareyre, J.J., Matusik, R.J., Orgebin-Crist, M.C. 2003. The 5'-flanking
region of the murine epididymal protein of 17 kilodaltons gene targets transgene expression in the
epididymis . Endocrinology. 144 (3) 877-886