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Il n'y a pas d'autre réplication mais met immédiatement arrive la deuxième étape de division. Quatre
cellules haploïdes sont ainsi créées.
Identification des événements de reconversion génique et de crossing-over.
- Absence de recombinaison : identique aux parents.
- Crossing-over : échange entre chromatines non sœurs.
- Conversion génique : une spore qui a subi la conversion : une partie d'un brin parental
s'est inséré.
- Conversion génique couplée à un crossing-over.
Stimulation de la recombinaison homologue.
₊ : gène pour l’Arg : moyen de sélection.
Les cellules ayant fait des recombinaisons pousseront sur un milieu sans Arg.
A t=0 : peu de recombinaison dans les cellules somatiques avant la méiose.
Cinq heures plus tard : 400 fois plus de produits recombinants pendant la méiose dans une phase
entre la réplication et la division.
La région 5’ du gène Arg4 et un point chaud de recombinaison méiotique.
Le point chaud est dans la région intergénique, en amont du gène Arg4.
Ont induit la méiose chez une population cellulaire, on prélève à différents temps, on extrait d'ADN.
On regarde les résultats sur un Southern-Blot.
Au bout de six heures, on remarque des fragments plus petits qui visualisent que l'on a eu une
cassure double brin de l'ADN dans la région intergénique en amont du gène Arg4.
Au cours de la méiose dans cette région, il y a une cassure double brin. Puis après, la cassure
est réparée ce qui explique la disparition de la bande.
Multiplicity and Distribution of Spo11 dependant meiotic DSBs.
Gel de gauche : Utilisation de gels dénaturants et hyper-résolutifs pour la migration.
Troisième gel à partir de la gauche : électrophorèse en champ pulsé : on sépare les
chromosomes les uns des autres.
Deuxième gel à partir de la gauche : Southern-Blot classique.
Gel de droite : puce à ADN : on détermine l'ensemble des DSBs.
Méthode de cartographie des DSBs.
Spo11 : nucléase qui s'occupe des coupures double brin.
On couple avec des enzymes de restrictions, et on fait migrer sur un gel dénaturant. On utilise une
sonde simple brin complémentaire de la séquence spécifique à chaque brin. On cartographie ainsi les
sites de coupures.
Chaque bande correspond à un type de coupures.
Chaque barre sur la séquence correspond à un site de coupures et sa longueur indique la fréquence
de coupures.
La recombinaison est engagée dans des régions spécifiques ayant des sites de coupures
spécifiques (pas de séquence consensus).