Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009 1
Activités de l’année 2009
Fièvre de la Vallée du Rift et
Fièvre hémorragique de CriméeCongo
Michèle BOULOY
Institut Pasteur
25 rue du Dr Roux, 75724 paris cedex 15 France
Tél.: (+33[0]1) 40.61.31.57, Fax: (+33[0]1) 40.61.31.51
E-mail mboulo[email protected]
Résumé des activités générales liées à la maladie
1. Test(s) employés ou disponibles pour cette maladie dans votre laboratoire
Tableau I : Techniques utilisées par le laboratoire de référence pour la période mai 2009 à décembre 2009
Maladie
Equipe
Domaine
TECHNIQUES
Recherche
d’anticorps
Recherche
d’antigène
RT-PCR
Isolement
FVR
Génétique des
Bunyaviridae,
Institut
Pasteur, Paris
vétérinaire
Elisa, IFA
Classique et
temps réel
LNR, AFSSA
Lyon
Vétérinaire
ELISA pour
recherche d’IgM
& IgG (kits
commerciaux)
Séro-
neutralisation
(SN)
ELISA (kit
commercial)
RT-PCR
classique
RT-PCR en
temps réel
(TaqMan)
Sur cellules
VERO
IMFH, CNR
des arbovirus,
Institut
Pasteur, Paris
Santé
humaine
MAC-ELISA
IgG sandwich
IFI
Séroneutralisation
NF
TaqMan
Vero E6 ;
C6/36
CCHF
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales,
Institut
Pasteur, Lyon
Santé
humaine
Mac-Elisa
IgG sandwich
Séroneutralisation
IFI
RT-PCR
classique
RT-PCR en
temps réel
(TaqMan)
Vero E6
SW13
cerveaux de
souriceaux
NF : non fait ; IFI : immunofluorescence indirecte.
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de CriméeCongo
2 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
Tableau II : Bilan global de l’activité du laboratoire de référence pour la période mai 2009 à décembre 2009
Equipe
Recherche
d’anticorps
Recherche
d’antigène
RT-PCR
Isolement
Génétique des
Bunyaviridae,
Institut Pasteur
Confirmation de
tests effectués
par CIRAD
LNR, AFSSA
Lyon
3000 sérums de
France1
18 sérums en
provenance du
Koweit (IgG et
IgM)2
3 sérums bovins
de Madagascar
0
0
0
IMFH, CNR des
arbovirus,
Institut Pasteur
NF
0
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales
NF
NF
NF
NF
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales
18 sera humains
pour diagnostic
(Turquie, RDC,
Syrie, Ukraine,
Gabon…)
NF
8 sera humains
pour diagnostic
en qRT-PCR
1 isolement sur
cerveaux de
souriceaux
(origine Turquie)
Total tests
NF : non fait ; IFI : immunofluorescence indirecte.
1Les 3000 sérums ont été analysés pour déterminer la spécificité des kits commerciaux IgG et IgM (article accepté
le 15/01/2010 dans la Revue de Médecine Vétérinaire)
2Sérums reçus du laboratoire de référence de virologie vétérinaire du Koweit pour un contrôle (après un premier
résultat faiblement positif) chez des moutons importés.
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de CriméeCongo
Rapports annuels des Laboratoires de férence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009 3
2. Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques
Tableau III : Bilan global de la production de réactifs par le laboratoire pour la période mai 2009-décembre 2010
Maladie
Equipe
Antigène
(équivalent tests)
Ascites ou
sérums
polyclonaux
(équivalent tests)
Contrôle RT-PCR
FVR
Génétique des
Bunyaviridae,
Institut Pasteur
LNR, AFSSA Lyon
Multiplication de la
souche MP-12 comme
souche virale
révélatrice pour la SN
Production de sérums
de référence après
vaccination chez des
moutons (vaccins à
virus inactivé ou
atténué [souches
Smithburn et clone
13])
NF
IMFH, CNR des
arbovirus, Institut
Pasteur
Ag natif précipité
inactivé
(8000 )
60 ml
(300 000)
500 µl
(1250)
UBIVE, CNR des
fièvres
hémorragiques
virales
NF
NF
NF
CCHF
UBIVE, CNR des
fièvres
hémorragiques
virales
Antigènes pour Elisa
IgM et Elisa IgG
préparés à partir de
cellules infectées.
(1000 tests de chaque)
NF
250µl
(625)
Total
(†) : IgM + IgG en duplicate ;
Au cours de ces six premiers mois de fonctionnement, les demandes de soutien adressées au laboratoire
concernaient la réalisation de tests de détection ou de confirmation. Aucun transfert de réactif n’a été opéré.
Activités spécifiques découlant du mandat des Laboratoires de référence
3. Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production
et de l’évaluation de vaccins
Implication dans l’élaboration d’un vaccin contre la FVR. Deux virus dépourvus de virulence chez la
souris sont des candidats vaccins potentiels, les souches Clone 13 et R566. Clone 13 est un clone d’un
isolat naturel dont le facteur de virus NSs a été naturellement délété. R566 est un réassortant entre Clone
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de CriméeCongo
4 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
13 et MP12, une souche obtenue par l’USARMRIID par mutagénèse aléatoire à partir d’une souche
virulente. Les régions du génome codant pour la polymérase et les glycoprotéines ont été mutées et se
révèlent porteuses de mutations d’atténuation. Toutefois, la protéine NSs du virus MP12 reste
fonctionnelle, conférant un niveau non négligeable de virulence à cette souche. Chez la souche R566, la
région du génome correspondant au segment S et porteuse du facteur de virulence a été remplacée par
celle de Clone 13 et le virus ainsi constitué se trouve donc porteur de mutations dans les trois segments
(L, M et S). Concernant R566, un accord avec un industriel européen a été signé afin de réaliser des tests
d’innocuité et d’efficacité, probablement dans le courant de l’année 2010, de ce candidat vaccin.
Mise en place courant 2009 d’une évaluation de l’activité des vaccins existants (vaccins commerciaux à
virus inactivé et à virus atténué en provenance de la société OBP, Afrique du Sud) et d’un candidat vaccin
(souche clone 13) chez des moutons de race Préalpes du sud [6 moutons / vaccin suivis pendant
12 semaines] : recherche du virus vaccinal par isolement et RT-PCR et dosage des anticorps (IgG, IgM et
neutralisants) en cours. L’expérimentation a été réalisée dans les locaux confinés de niveau A3 de la
plate-forme d’infectiologie expérimentale de l’INRA (37380 Nouzilly)
4. Préparation et fourniture des actifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et
les vaccins
- Mise en place d’une collaboration avec l’Institut Pasteur de Madagascar pour la gestion d’une collection de
sérums collectés chez des volontaires humains et chez différents animaux naturellement infectés par le virus de la
FVR. Les sérums ont été adressés au CDC d’Atlanta pour lyophilisation et contrôle puis -adressés à l’Institut
Pasteur de Madagascar et au CNR des arbovirus de l’Institut Pasteur Paris.
- Dans le cadre de ses missions, le CNR des arbovirus soutien différents laboratoires hospitaliers pour le diagnostic
de la FVR ou pour des transferts de technologies (sérologie).
- Nomination officielle par le Ministère de l’Alimentation, de l’Agriculture et de la Pêche français du laboratoire
de l’Afssa Lyon comme Laboratoire National de Référence (LNR) pour la fièvre de la vallée du Rift (diagnostic
sérologique) (Arrêté du 29 décembre 2009 paru au JO du 7 janvier 2010)
5. Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies
Pour répondre aux exigences des échanges internationaux du bétail, il devient nécessaire de distinguer les animaux
naturellement infectés et ceux qui ont été vaccinés. Les virus Clone 13 et R566 présentent la même particularité
d’être défectif pour la protéine NSs. Nous développons actuellement un test pour détecter les anticorps contre la
nucléoprotéine et contre la protéine NSs. Les anticorps anti-nucléoprotéine sont le signe d’une infection ou d’une
vaccination alors que les anticorps anti-NSs ne doivent être présents que chez les animaux infectés.
6. Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle
zoosanitaire au niveau international
- Cas humains de FVR à Mayotte (communication du CH Mamoudzou). Les sérums seront adressés au CNR des
Arbovirus de l’Institut Pasteur pour détermination de la séquence nucléotidique.
- Enquête de séroprévalence en cours dans le bétail à Mayotte et Ile Maurice (source Vincent Cardinal, AFSSA).
La circulation du vFVR est actuellement de bas niveau tout au moins pour ce qui concerne les formes cliniques.
7. Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE
Néant
8. Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE
Néant
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de CriméeCongo
Rapports annuels des Laboratoires de férence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009 5
9. Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de
l’OIE
- Koweit : Investigation sérologique d’animaux suspects de FVR à la demande du « Public Authority of
Agriculture Affairs & Fish Resources » : 18 sérums ovins ; résultats envoyés le 4 décembre 2009.
- Nigéria : demande d’enquête de séroprévalence du « Department of Veterinary Microbiology and Parasitology,
Faculty of Veterinary Medicine, University of Maiduguri ». En cours de mise en place.
10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres
organisations internationales
Dans le cadre du projet européen Arbo-zoonet, nous avons organisé plusieurs réunions où les problèmes de FVR et
CCHF ont été discutés. Une réunion annelle tenue à St Raphaël le 20 septembre 2009 a rassemblé les différents
partenaires du projet (25 pays différents d’Europe, Afrique, Moyen Orient, Asie). Deux symposiums ont
également été organisés sur l’épidémiologie (cartographie de la circulation du virus et de leurs vecteurs) et les
stratégies vaccinales respectivement à Montpellier (France) et à Istanbul (Turquie).
D’autre part, le LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV:
- Réunion USDA (C. Gay) au Caire (26-30 janvier 2009)
- un séminaire regional organisé par l’OIE (-emergence de Fièvre de la Vallée du Rift en Afrique australe :
comment mieux prédire et réagir ?) à Bloemfontein, Afrique du Sud ,16-18 février 2009.
- deux Workshops organisés par l’OMS de l’ Emerging and Dangerous Pathogens Laboratory Network for
Outbreak Response and Readiness” (EDPN). Le 2nd (5-6 février 2009) et le 3ème (14-16 décembre 2009 en
présence d’une représentante de l’OIE, Kate Glynn)
11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration
Un vaccin à virus atténué avec la souche Clone 13 est en cours de développement par un producteur de vaccin en
Afrique du Sud. Nous avons collaboré pour déterminer son immunogénicité (induction d’anticorps neutralisants),
son innocuité (absence d’effets secondaires tels qu’effets tératogènes et avortements chez la brebis gestante décrits
pour d’autres souches atténuées à l’exemple de la souche Smithburn) et son pouvoir protecteur contre les signes
cliniques chez le mouton et la brebis gestante. Les résultats sont très convaincants et un effet dose a été observé
avec une dose optimale déterminée. Une publication est en cours de soumission.
12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des
publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences
internationales)
Présentations à l’occasion de conférences ou de réunions internationales
Le LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV:
- un séminaire regional organisé par l’OIE (-emergence de Fièvre de la Vallée du Rift en Afrique australe :
comment mieux prédire et réagir ?) à Bloemfontein, Afrique du Sud ,16-18 février 2009.
- deux Workshops organisés par l’OMS de l’ Emerging and Dangerous Pathogens Laboratory Network for
Outbreak Response and Readiness” (EDPN). Le 2nd (5-6 février 2009) et le 3ème (14-16 décembre 2009 en
présence d’une représentante de l’OIE, Kate Glynn)
Publications scientifiques
LAGERQVIST N, J. NASLUND, A. LUNDDKVIST, M. BOULOY, C. AHLM AND G. BUCHT. 2009.
Characterization of immune responses and protective efficacy in mice after immunisation with Rift Valley fever
virus cDNA constructs. Virology Journal. 6 :6 doi :10.1186/1743-422X-6.6
1 / 7 100%
La catégorie de ce document est-elle correcte?
Merci pour votre participation!

Faire une suggestion

Avez-vous trouvé des erreurs dans linterface ou les textes ? Ou savez-vous comment améliorer linterface utilisateur de StudyLib ? Nhésitez pas à envoyer vos suggestions. Cest très important pour nous !