African horse sickness

Activités de l’année 2009
Fièvre de la Vallée du Rift et
Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
Michèle BOULOY
Institut Pasteur
25 rue du Dr Roux, 75724 paris cedex 15 France
Tél.: (+33[0]1) 40.61.31.57, Fax: (+33[0]1) 40.61.31.51
E-mail [email protected]
Résumé des activités générales liées à la maladie
1.
Test(s) employés ou disponibles pour cette maladie dans votre laboratoire
Tableau I : Techniques utilisées par le laboratoire de référence pour la période mai 2009 à décembre 2009
TECHNIQUES
Maladie
Equipe
Domaine
Génétique des
Bunyaviridae,
Institut
Pasteur, Paris
vétérinaire
Elisa, IFA
–
Classique et
temps réel
–
LNR, AFSSA
Lyon
Vétérinaire
ELISA pour
recherche d’IgM
& IgG (kits
commerciaux)
ELISA (kit
commercial)
RT-PCR
classique
Sur cellules
VERO
Recherche
d’anticorps
Recherche
d’antigène
IMFH, CNR
des arbovirus,
Institut
Pasteur, Paris
Santé
humaine
MAC-ELISA
Isolement
RT-PCR en
temps réel
(TaqMan)
Séroneutralisation
(SN)
FVR
RT-PCR
NF
TaqMan
Vero E6 ;
C6/36
IFI
RT-PCR
classique
Vero E6
IgG sandwich
IFI
Séroneutralisation
CCHF
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales,
Institut
Pasteur, Lyon
Santé
humaine
Mac-Elisa
IgG sandwich
Séroneutralisation
RT-PCR en
temps réel
(TaqMan)
SW13
cerveaux de
souriceaux
NF : non fait ; IFI : immunofluorescence indirecte.
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
1
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
Tableau II : Bilan global de l’activité du laboratoire de référence pour la période mai 2009 à décembre 2009
Maladie
Equipe
Recherche
d’anticorps
Recherche
d’antigène
RT-PCR
Isolement
Génétique des
Bunyaviridae,
Institut Pasteur
Confirmation de
tests effectués
par CIRAD
–
–
–
LNR, AFSSA
Lyon
3000 sérums de
France1
0
0
0
18 sérums en
provenance du
Koweit (IgG et
IgM)2
Fièvre de la
vallée du Rift
3 sérums bovins
de Madagascar
IMFH, CNR des
arbovirus,
Institut Pasteur
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales
Fièvre
hémorragique
Crimée-Congo
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales
0
NF
NF
18 sera humains
pour diagnostic
(Turquie, RDC,
Syrie, Ukraine,
Gabon…)
NF
NF
NF
NF
8 sera humains
pour diagnostic
en qRT-PCR
1 isolement sur
cerveaux de
souriceaux
(origine Turquie)
Total tests
NF : non fait ; IFI : immunofluorescence indirecte.
1
Les 3000 sérums ont été analysés pour déterminer la spécificité des kits commerciaux IgG et IgM (article accepté
le 15/01/2010 dans la Revue de Médecine Vétérinaire)
2
Sérums reçus du laboratoire de référence de virologie vétérinaire du Koweit pour un contrôle (après un premier
résultat faiblement positif) chez des moutons importés.
2
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
2.
Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques
Tableau III : Bilan global de la production de réactifs par le laboratoire pour la période mai 2009-décembre 2010
Maladie
Equipe
Antigène
(équivalent tests)
Ascites ou
sérums
polyclonaux
(équivalent tests)
Contrôle RT-PCR
Génétique des
Bunyaviridae,
Institut Pasteur
–
–
–
Multiplication de la
souche MP-12 comme
souche virale
révélatrice pour la SN
Production de sérums
de référence après
vaccination chez des
moutons (vaccins à
virus inactivé ou
atténué [souches
Smithburn et clone
13])
Ag natif précipité
inactivé
60 ml
500 µl
(8000 †)
(300 000)
(1250)
NF
NF
NF
LNR, AFSSA Lyon
FVR
IMFH, CNR des
arbovirus, Institut
Pasteur
UBIVE, CNR des
fièvres
hémorragiques
virales
CCHF
UBIVE, CNR des
fièvres
hémorragiques
virales
Antigènes pour Elisa
IgM et Elisa IgG
préparés à partir de
cellules infectées.
NF
250µl
NF
(625)
(1000 tests de chaque)
Total
(†) : IgM + IgG en duplicate ;
Au cours de ces six premiers mois de fonctionnement, les demandes de soutien adressées au laboratoire
concernaient la réalisation de tests de détection ou de confirmation. Aucun transfert de réactif n’a été opéré.
Activités spécifiques découlant du mandat des Laboratoires de référence
3.
Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production
et de l’évaluation de vaccins

Implication dans l’élaboration d’un vaccin contre la FVR. Deux virus dépourvus de virulence chez la
souris sont des candidats vaccins potentiels, les souches Clone 13 et R566. Clone 13 est un clone d’un
isolat naturel dont le facteur de virus NSs a été naturellement délété. R566 est un réassortant entre Clone
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
3
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo

4.
13 et MP12, une souche obtenue par l’USARMRIID par mutagénèse aléatoire à partir d’une souche
virulente. Les régions du génome codant pour la polymérase et les glycoprotéines ont été mutées et se
révèlent porteuses de mutations d’atténuation. Toutefois, la protéine NSs du virus MP12 reste
fonctionnelle, conférant un niveau non négligeable de virulence à cette souche. Chez la souche R566, la
région du génome correspondant au segment S et porteuse du facteur de virulence a été remplacée par
celle de Clone 13 et le virus ainsi constitué se trouve donc porteur de mutations dans les trois segments
(L, M et S). Concernant R566, un accord avec un industriel européen a été signé afin de réaliser des tests
d’innocuité et d’efficacité, probablement dans le courant de l’année 2010, de ce candidat vaccin.
Mise en place courant 2009 d’une évaluation de l’activité des vaccins existants (vaccins commerciaux à
virus inactivé et à virus atténué en provenance de la société OBP, Afrique du Sud) et d’un candidat vaccin
(souche clone 13) chez des moutons de race Préalpes du sud [6 moutons / vaccin suivis pendant
12 semaines] : recherche du virus vaccinal par isolement et RT-PCR et dosage des anticorps (IgG, IgM et
neutralisants) en cours. L’expérimentation a été réalisée dans les locaux confinés de niveau A3 de la
plate-forme d’infectiologie expérimentale de l’INRA (37380 Nouzilly)
Préparation et fourniture des réactifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et
les vaccins
- Mise en place d’une collaboration avec l’Institut Pasteur de Madagascar pour la gestion d’une collection de
sérums collectés chez des volontaires humains et chez différents animaux naturellement infectés par le virus de la
FVR. Les sérums ont été adressés au CDC d’Atlanta pour lyophilisation et contrôle puis ré-adressés à l’Institut
Pasteur de Madagascar et au CNR des arbovirus de l’Institut Pasteur Paris.
- Dans le cadre de ses missions, le CNR des arbovirus soutien différents laboratoires hospitaliers pour le diagnostic
de la FVR ou pour des transferts de technologies (sérologie).
- Nomination officielle par le Ministère de l’Alimentation, de l’Agriculture et de la Pêche français du laboratoire
de l’Afssa Lyon comme Laboratoire National de Référence (LNR) pour la fièvre de la vallée du Rift (diagnostic
sérologique) (Arrêté du 29 décembre 2009 paru au JO du 7 janvier 2010)
5.
Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies
Pour répondre aux exigences des échanges internationaux du bétail, il devient nécessaire de distinguer les animaux
naturellement infectés et ceux qui ont été vaccinés. Les virus Clone 13 et R566 présentent la même particularité
d’être défectif pour la protéine NSs. Nous développons actuellement un test pour détecter les anticorps contre la
nucléoprotéine et contre la protéine NSs. Les anticorps anti-nucléoprotéine sont le signe d’une infection ou d’une
vaccination alors que les anticorps anti-NSs ne doivent être présents que chez les animaux infectés.
6.
Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle
zoosanitaire au niveau international
- Cas humains de FVR à Mayotte (communication du CH Mamoudzou). Les sérums seront adressés au CNR des
Arbovirus de l’Institut Pasteur pour détermination de la séquence nucléotidique.
- Enquête de séroprévalence en cours dans le bétail à Mayotte et Ile Maurice (source Vincent Cardinal, AFSSA).
La circulation du vFVR est actuellement de bas niveau tout au moins pour ce qui concerne les formes cliniques.
7.
Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE
Néant
8.
Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE
Néant
4
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
9.
Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de
l’OIE
- Koweit : Investigation sérologique d’animaux suspects de FVR à la demande du « Public Authority of
Agriculture Affairs & Fish Resources » : 18 sérums ovins ; résultats envoyés le 4 décembre 2009.
- Nigéria : demande d’enquête de séroprévalence du « Department of Veterinary Microbiology and Parasitology,
Faculty of Veterinary Medicine, University of Maiduguri ». En cours de mise en place.
10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres
organisations internationales
Dans le cadre du projet européen Arbo-zoonet, nous avons organisé plusieurs réunions où les problèmes de FVR et
CCHF ont été discutés. Une réunion annelle tenue à St Raphaël le 20 septembre 2009 a rassemblé les différents
partenaires du projet (25 pays différents d’Europe, Afrique, Moyen Orient, Asie). Deux symposiums ont
également été organisés sur l’épidémiologie (cartographie de la circulation du virus et de leurs vecteurs) et les
stratégies vaccinales respectivement à Montpellier (France) et à Istanbul (Turquie).
D’autre part, le LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV:
- Réunion USDA (C. Gay) au Caire (26-30 janvier 2009)
- un séminaire regional organisé par l’OIE (“ Ré-emergence de Fièvre de la Vallée du Rift en Afrique australe :
comment mieux prédire et réagir ? ”) à Bloemfontein, Afrique du Sud ,16-18 février 2009.
- deux Workshops organisés par l’OMS de l’ “ Emerging and Dangerous Pathogens Laboratory Network for
Outbreak Response and Readiness” (EDPN). Le 2nd (5-6 février 2009) et le 3ème (14-16 décembre 2009 en
présence d’une représentante de l’OIE, Kate Glynn)
11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration
Un vaccin à virus atténué avec la souche Clone 13 est en cours de développement par un producteur de vaccin en
Afrique du Sud. Nous avons collaboré pour déterminer son immunogénicité (induction d’anticorps neutralisants),
son innocuité (absence d’effets secondaires tels qu’effets tératogènes et avortements chez la brebis gestante décrits
pour d’autres souches atténuées à l’exemple de la souche Smithburn) et son pouvoir protecteur contre les signes
cliniques chez le mouton et la brebis gestante. Les résultats sont très convaincants et un effet dose a été observé
avec une dose optimale déterminée. Une publication est en cours de soumission.
12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des
publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences
internationales)

Présentations à l’occasion de conférences ou de réunions internationales
Le LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV:
- un séminaire regional organisé par l’OIE (“ Ré-emergence de Fièvre de la Vallée du Rift en Afrique australe :
comment mieux prédire et réagir ? ”) à Bloemfontein, Afrique du Sud ,16-18 février 2009.
- deux Workshops organisés par l’OMS de l’ “ Emerging and Dangerous Pathogens Laboratory Network for
Outbreak Response and Readiness” (EDPN). Le 2nd (5-6 février 2009) et le 3ème (14-16 décembre 2009 en
présence d’une représentante de l’OIE, Kate Glynn)

Publications scientifiques
LAGERQVIST N, J. NASLUND, A. LUNDDKVIST, M. BOULOY, C. AHLM AND G. BUCHT. 2009.
Characterization of immune responses and protective efficacy in mice after immunisation with Rift Valley fever
virus cDNA constructs. Virology Journal. 6 :6 doi :10.1186/1743-422X-6.6
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
5
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
AHMED J. BOULOY M. EGONUL O, FOOKS T., PAWESKA J, CHEVALIER V, DROSTEN C, MORMANN
R, TORDO N, VATANSEVER Z, CALISTRI P, ESTRADA A, MIRAZIMI A,UNGER H, YIN H AND
SEITZER U. 2009. International network for capacity building for the control of emerging viral vector borne
zoonotic diseases : Arbo-zoonet. Eurosurveillance 14 1-4.
CETRE-SOSSAH C., A. BILLECOCQ, R. LANCELOT, C. DEFERNEZ, J. FAVRE, M. BOULOY, D.
MARTINEZ AND E. ALBINA. 2009. Evaluation of a commercial competitive ELISA for the detection of
antibodies to Rift valley fever virus in sera of domestic ruminants in France. Preventive Veterinar Medecine.
ATTARZADEH-YAZDI G, FRAGKOUDIS R, CHI Y, SIU RW, ULPER L, BARRY G, RODRIGUEZANDRES J, NASH AA, BOULOY M, MERITS A, FAZAKERLEY JK, KOHL A. 2009. Cell to cell spread of
the RNAi response suppresses Semliki Forest virus infection of mosquito cell cultures and cannot be antagonised
by this virus. J. Virol. 83 5735-5748.
BOULOY M. AND R. FLICK. 2009. Reverse genetics technology for Rift Valley fever virus: Current and future
applications for the development of therapeutics and vaccines. Antiviral research 84 101-118
PEYREFITTE C N, PERRET M, GARCIA S, RODRIGUES R, BAGNAUD A, LACOTE S, CRANCE JM,
VERNET G, GARIN D, BOULOY M* AND PARANHOS-BACCALÀ G. 2010. Differential activation profiles
of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus versus Dugbe virus infected antigen presenting cells. J . Gen Virol. 91
189-198
Z. MANSUROGLU, T. JOSSE, J. GILLERON, A. BILLECOCQ, P. LEGER3, M. BOULOY AND E.
BONNEFOY. 2010. Non structural NSs protein of Rift Valley Fever Virus interacts with pericentromeric DNA
sequences of the host cell inducing chromosome cohesion and segregation defects. J Virol 84 928-939
Grandadam M. Rift Valley fever virus. 2009. In Molecular detection of human viral pathogens. Dongyou Liu Ed.
Taylor and Francis CRC Press. Sous presse.
PÉPIN, M.: Fièvre de la vallée du Rift. In: La lutte antivectorielle en France [CD-ROM Chapitres analytiques],
(D. FONTENILLE, C. LAGNEAU, S. LECOLLINET, R. LEFAIT-ROBIN, M. SETBON, B. TIREL, and A.
YÉBAKIMA, eds.). Marseille, IRD Editions, 2009, 153-165.
PÉPIN, M., DAMPFHOFFER, M., CHEVALIER, V., and CÊTRE-SOSSAH, C.: La fièvre de la vallée du Rift a
fait une première incursion à Mayotte, un département français. Bull Epidemiol AFSSA, 2009, 33, 14.
PÉPIN, M., PAWESKA, J., and BOULOY, M.: Diagnostic specificity of ELISA-based tests for the detection of
antibodies to Rift Valley Fever virus in French ruminants. Rev Med Vet, 2010, Accepté pour publication le 15 janv
2010.

Autres communications
Invitation à donner une conférence à l’université de St Andrews (Ecosse) et Edinborough (Ecosse). « Molecular
mechanisms of Rift Valley fever virus pathogenicity »
Contribution à un atelier sur le diagnostic du virus de la fièvre de la vallée du Rift organisé par J Paweska dans le
cadre du projet Arbo-zoonet
International conference on European zoonosis à St Raphael :
« Non structural NSs protein of Rift valley fever virus interacts with pericentromeric DNA sequences of the host
cell inducing chromosome cohesion and segregation defects »
Symposium sur les stratégies d’intervention organisé dans le cadre du projet Arbo-zoonet. « Evaluation of the
efficacy and safety of the RVF Clone 13 vaccine in sheep.”
6
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
13. Inscription de kits de diagnostics au registre de l’OIE
i)
Avez-vous participé à des panels d’experts visant à valider des kits de diagnostic candidats
au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ?
Néant
ii)
Avez-vous soumis à l’OIE la candidature de kits pour leur inscription au registre de l’OIE ?
Si oui, lesquels ?
Néant
_______________
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
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