African horse sickness

Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 1
Rapports de Laboratoires de référence de l’OIE
Activités de l’année 2010
Nom de la maladie (ou domaine) pour
laquelle vous étiez désigné comme
laboratoire de référence de l’OIE :
Fièvre de la Vallée du Rift et
Fièvre hémorragique de
Crimée–Congo
Adresse du laboratoire :
Institut Pasteur
25 rue du Dr Roux, 75724 paris cedex 15
FRANCE
Tel. :
+33 (0)1 40.61.31.57
Fax :
+33 (0)1 40.61.31.51
e-mail :
[email protected]
site web :
Nom du responsable du laboratoire
(Chef de laboratoire) :
Nom de l’expert de l’OIE :
Michèle BOULOY
Nom de rédacteur du cette rapport
(si diffèrent de celui du dessus):

Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
2 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010
Partie I : Résumé des activités générales liées à la maladie
1. Test(s) employés ou disponibles pour cette maladie dans votre laboratoire
Tableau I : Techniques utilisées par le laboratoire de référence en 2010
Maladie
Equipe
Domaine
Techniques
Recherche
d’anticorps
Recherche
d’antigène
RT-PCR
Isolement
FVR
Génétique des
Bunyavirus,
Institut Pasteur,
Paris
Vétérinaire
ELISA, IFA
–
Classique et
temps réel
–
LNR, AFSSA
Lyon
Vétérinaire
ELISA pour
recherche d’IgM
& IgG (kits
commerciaux)
Séroneutralisation
ELISA (kit
commercial)
RT-PCR
classique
RT-PCR en
temps réel
(TaqMan)
Sur cellules
VERO
IMFH, CNR des
arbovirus, Institut
Pasteur, Paris
Santé
humaine
MAC-ELISA
IgG sandwich
IFI
Séroneutralisation
NF
TaqMan
Vero E6 ;
C6/36
CCHF
UBIVE, CNR
des fièvres
hémorragiques
virales, Institut
Pasteur, Lyon
Santé
humaine
Mac-ELISA
IgG sandwich
Séroneutralisation
IFI
RT-PCR
classique
RT-PCR en
temps réel
(TaqMan)
Vero E6
SW13
cerveaux de
souriceaux
NF : non fait ; IFI : immunofluorescence indirecte.
2. Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques
Tableau III : Bilan global de la production de réactifs par le laboratoire en 2010
Maladie
Equipe
Antigène
(équivalent tests)
Ascites ou sérums
polyclonaux
(équivalent tests)
Contrôle
RT-PCR
FVR
Génétique des Bunyaviridae,
Institut Pasteur
–
–
–
LNR, AFSSA Lyon
Multiplication de la
souche MP-12
comme souche virale
révélatrice pour la
SN
Production de sérums de
référence après vaccination
chez des moutons (vaccins à
virus inactivé ou atténué
[souches Smithburn et clone
13])
NF
IMFH, CNR des arbovirus,
Institut Pasteur
Ag natif précipité
inactivé
(8000 †)
60 ml
(300 000)
500 µl
(1250)
UBIVE, CNR des fièvres
NF
NF
NF

Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 3
hémorragiques virales
Maladie
Equipe
Antigène
(équivalent tests)
Ascites ou sérums
polyclonaux
(équivalent tests)
Contrôle
RT-PCR
CCHF
UBIVE, CNR des fièvres
hémorragiques virales
Antigènes pour Elisa
IgM et Elisa IgG
préparés à partir de
cellules infectées.
(1000 tests de
chaque)
NF
250µl
(625)
Total
(†) : IgM + IgG en duplicate ;
En 2010 les demandes de soutien adressées au laboratoire concernaient la réalisation de tests de détection ou de
confirmation. Aucun transfert de réactif n’a été opéré.
Partie II : Activités spécifiques découlant du mandat des
Laboratoires de référence
3. Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production
et de l’évaluation de vaccins
 Implication dans l’élaboration d’un vaccin contre la FVR. Deux virus dépourvus de virulence chez la souris
sont des candidats vaccins potentiels, les souches Clone 13 et R566. Clone 13 est un clone d’un isolat naturel
dont le facteur de virus NSs a été naturellement délété. R566 est un réassortant entre Clone 13 et MP12, une
souche obtenue par l’USARMRIID par mutagénèse aléatoire à partir d’une souche virulente. Les régions du
génome codant pour la polymérase et les glycoprotéines ont été mutées et se révèlent porteuses de mutations
d’atténuation. Toutefois, la protéine NSs du virus MP12 reste fonctionnelle, conférant un niveau non
négligeable de virulence à cette souche. Chez la souche R566, la région du génome correspondant au
segment S et porteuse du facteur de virulence a été remplacée par celle de Clone 13 et le virus ainsi constitué
se trouve donc porteur de mutations dans les trois segments (L, M et S). Concernant R566, un accord avec un
industriel européen a été signé afin de réaliser des tests d’innocuité et d’efficacité, probablement dans le
courant de l’année 2010, de ce candidat vaccin.
 Mise en place courant 2009 d’une évaluation de l’activité des vaccins existants (vaccins commerciaux à virus
inactivé et à virus atténué en provenance de la société OBP, Afrique du Sud) et d’un candidat vaccin (souche
clone 13) chez des moutons de race Préalpes du sud [6 moutons / vaccin suivis pendant 12 semaines] :
recherche du virus vaccinal par isolement et RT-PCR et dosage des anticorps (IgG, IgM et neutralisants) en
cours. L’expérimentation a été réalisée dans les locaux confinés de niveau A3 de la plate-forme
d’infectiologie expérimentale de l’INRA (37380 Nouzilly)
 Production d’antigène recombinants contre les proteines N et NSs. Ces deux protéines sont utilisées en
ELISA : N permet d’évaluer la séropositivité et NSs devrait permettre de distinguer les animaux infectés des
animaux vaccinés par les nouveaux vaccins dépourvus de NSs.
4. Préparation et fourniture des réactifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et
les vaccins
- Mise en place d’une collaboration avec l’Institut Pasteur de Madagascar pour la gestion d’une collection de
sérums collectés chez des volontaires humains et chez différents animaux naturellement infectés par le virus
de la FVR. Les sérums ont été adressés au CDC d’Atlanta pour lyophilisation et contrôle puis ré-adressés à
l’Institut Pasteur de Madagascar et au CNR des arbovirus de l’Institut Pasteur Paris.

Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
4 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010
- Dans le cadre de ses missions, le CNR des arbovirus soutien différents laboratoires hospitaliers pour le
diagnostic de la FVR ou pour des transferts de technologies (sérologie).
Nomination officielle par le Ministère de l’Alimentation, de l’Agriculture et de la Pêche français du laboratoire de
l’Afssa Lyon comme Laboratoire National de Référence (LNR) pour la fièvre de la vallée du Rift (diagnostic
sérologique) (Arrêté du 29 décembre 2009 paru au JO du 7 janvier 2010)
5. Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies
Pour répondre aux exigences des échanges internationaux du bétail, il devient nécessaire de distinguer les animaux
naturellement infectés et ceux qui ont été vaccinés. Les virus Clone 13 et R566 présentent la même particularité
d’être défectif pour la protéine NSs. Nous développons actuellement un test pour détecter les anticorps contre la
nucléoprotéine et contre la protéine NSs. Les anticorps anti-nucléoprotéine sont le signe d’une infection ou d’une
vaccination alors que les anticorps anti-NSs ne doivent être présents que chez les animaux infectés.
6. Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle
zoosanitaire au niveau international
- Cas humains de FVR à Mayotte (communication du CH Mamoudzou). Les sérums seront adressés au CNR
des Arbovirus de l’Institut Pasteur pour détermination de la séquence nucléotidique.
- Enquête de séroprévalence en cours dans le bétail à Mayotte et Ile Maurice (source Vincent Cardinal,
AFSSA). La circulation du vFVR est actuellement de bas niveau tout au moins pour ce qui concerne les
formes cliniques.
7. Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE
Néant
8. Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE
Néant
9. Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de
l’OIE
Aucune demande.
10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres
organisations internationales
Dans le cadre du projet européen Arbo-zoonet, nous avons organisé plusieurs réunions où les problèmes de FVR et
CCHF ont été discutés. Une réunion annelle tenue à St Raphaël le 20 septembre 2009 a rassemblé les différents
partenaires du projet (25 pays différents d’Europe, Afrique, Moyen Orient, Asie). Deux symposiums ont
également été organisés sur l’épidémiologie (cartographie de la circulation du virus et de leurs vecteurs) et les
stratégies vaccinales respectivement à Montpellier (France) et à Istanbul (Turquie).
D’autre part, le LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV:
Groupe de travail sur la fièvre hémorragique de Crimée-Congo Comité ad hoc en janvier 2010
11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration

Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 5
Un vaccin à virus atténué avec la souche Clone 13 est commercialisé par OBP en Afrique du Sud. Nous avons
collaboré pour déterminer son immunogénicité (induction d’anticorps neutralisants), son innocuité (absence
d’effets secondaires tels qu’effets tératogènes et avortements chez la brebis gestante décrits pour d’autres souches
atténuées à l’exemple de la souche Smithburn) et son pouvoir protecteur contre les signes cliniques chez le mouton
et la brebis gestante. Les résultats sont très convaincants et un effet dose a été observé avec une dose optimale
déterminée. Une publication est en cours de soumission.
12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des
publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences
internationales)
 Présentations à l’occasion de conférences ou de réunions internationales
Les membres du LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV le meeting annuel
d’Arbo-zoonet en octobre 2010 à Rabat.
 Publications scientifiques
 LAGERQVIST N, J. NASLUND, A. LUNDDKVIST, M. BOULOY, C. AHLM AND G. BUCHT. 2009.
Characterization of immune responses and protective efficacy in mice after immunisation with Rift Valley
fever virus cDNA constructs. Virology Journal. 6 :6 doi :10.1186/1743-422X-6.6
 AHMED J. BOULOY M. EGONUL O, FOOKS T., PAWESKA J, CHEVALIER V, DROSTEN C,
MORMANN R, TORDO N, VATANSEVER Z, CALISTRI P, ESTRADA A, MIRAZIMI A,UNGER H,
YIN H AND SEITZER U. 2009. International network for capacity building for the control of emerging viral
vector borne zoonotic diseases : Arbo-zoonet. Eurosurveillance 14 1-4.
 CETRE-SOSSAH C., A. BILLECOCQ, R. LANCELOT, C. DEFERNEZ, J. FAVRE, M. BOULOY, D.
MARTINEZ AND E. ALBINA. 2009. Evaluation of a commercial competitive ELISA for the detection of
antibodies to Rift valley fever virus in sera of domestic ruminants in France. Preventive Veterinar Medecine.
 ATTARZADEH-YAZDI G, FRAGKOUDIS R, CHI Y, SIU RW, ULPER L, BARRY G, RODRIGUEZ-
ANDRES J, NASH AA, BOULOY M, MERITS A, FAZAKERLEY JK, KOHL A. 2009. Cell to cell spread
of the RNAi response suppresses Semliki Forest virus infection of mosquito cell cultures and cannot be
antagonised by this virus. J. Virol. 83 5735-5748.
 BOULOY M. AND R. FLICK. 2009. Reverse genetics technology for Rift Valley fever virus: Current and
future applications for the development of therapeutics and vaccines. Antiviral research 84 101-118
 PEYREFITTE C N, PERRET M, GARCIA S, RODRIGUES R, BAGNAUD A, LACOTE S, CRANCE JM,
VERNET G, GARIN D, BOULOY M* AND PARANHOS-BACCALÀ G. 2010. Differential activation
profiles of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus versus Dugbe virus infected antigen presenting cells. J .
Gen Virol. 91 189-198
 Z. MANSUROGLU, T. JOSSE, J. GILLERON, A. BILLECOCQ, P. LEGER3, M. BOULOY AND E.
BONNEFOY. 2010. Non structural NSs protein of Rift Valley Fever Virus interacts with pericentromeric
DNA sequences of the host cell inducing chromosome cohesion and segregation defects. J Virol 84 928-939
 Grandadam M. Rift Valley fever virus. 2009. In Molecular detection of human viral pathogens. Dongyou Liu
Ed. Taylor and Francis CRC Press. Sous presse.
 PÉPIN, M.: Fièvre de la vallée du Rift. In: La lutte antivectorielle en France [CD-ROM Chapitres
analytiques], (D. FONTENILLE, C. LAGNEAU, S. LECOLLINET, R. LEFAIT-ROBIN, M. SETBON, B.
TIREL, and A. YÉBAKIMA, eds.). Marseille, IRD Editions, 2009, 153-165.
 PÉPIN, M., DAMPFHOFFER, M., CHEVALIER, V., and CÊTRE-SOSSAH, C.: La fièvre de la vallée du
Rift a fait une première incursion à Mayotte, un département français. Bull Epidemiol AFSSA, 2009, 33, 14.
 PÉPIN, M., PAWESKA, J., and BOULOY, M.: Diagnostic specificity of ELISA-based tests for the detection
of antibodies to Rift Valley Fever virus in French ruminants. Rev Med Vet, 2010, Accepté pour publication le
15 janv 2010.
 Autres communications
Symposia sur les stratégies d’intervention organisé dans le cadre des projet Arbo-zoonet et Epizone « Evaluation
of the efficacy and safety of the RVF Clone 13 vaccine in sheep.” Copenhague (Danemark) Octobre 2010