Rapports de Laboratoires de référence de l’OIE Activités de l’année 2010 Nom de la maladie (ou domaine) pour laquelle vous étiez désigné comme laboratoire de référence de l’OIE : Adresse du laboratoire : Fièvre de la Vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo Institut Pasteur 25 rue du Dr Roux, 75724 paris cedex 15 FRANCE Tel. : +33 (0)1 40.61.31.57 Fax : +33 (0)1 40.61.31.51 e-mail : [email protected] site web : Nom du responsable du laboratoire (Chef de laboratoire) : Nom de l’expert de l’OIE : Michèle BOULOY Nom de rédacteur du cette rapport (si diffèrent de celui du dessus): Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 1 Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo Partie I : Résumé des activités générales liées à la maladie 1. Test(s) employés ou disponibles pour cette maladie dans votre laboratoire Tableau I : Techniques utilisées par le laboratoire de référence en 2010 Techniques Maladie Equipe Domaine Génétique des Bunyavirus, Institut Pasteur, Paris Recherche d’anticorps Recherche d’antigène RT-PCR Isolement Vétérinaire ELISA, IFA – Classique et temps réel – LNR, AFSSA Lyon Vétérinaire ELISA pour recherche d’IgM & IgG (kits commerciaux) Séroneutralisation ELISA (kit commercial) RT-PCR classique RT-PCR en temps réel (TaqMan) Sur cellules VERO IMFH, CNR des arbovirus, Institut Pasteur, Paris Santé humaine MAC-ELISA IgG sandwich IFI Séroneutralisation NF TaqMan Vero E6 ; C6/36 UBIVE, CNR des fièvres hémorragiques virales, Institut Pasteur, Lyon Santé humaine Mac-ELISA IgG sandwich Séroneutralisation IFI RT-PCR classique RT-PCR en temps réel (TaqMan) Vero E6 SW13 cerveaux de souriceaux FVR CCHF NF : non fait ; IFI : immunofluorescence indirecte. 2. Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques Tableau III : Bilan global de la production de réactifs par le laboratoire en 2010 Maladie Equipe Antigène (équivalent tests) Ascites ou sérums polyclonaux (équivalent tests) Contrôle RT-PCR Génétique des Bunyaviridae, Institut Pasteur – – – LNR, AFSSA Lyon Multiplication de la souche MP-12 comme souche virale révélatrice pour la SN Production de sérums de référence après vaccination chez des moutons (vaccins à virus inactivé ou atténué [souches Smithburn et clone 13]) NF IMFH, CNR des arbovirus, Institut Pasteur Ag natif précipité inactivé (8000 †) 60 ml (300 000) 500 µl (1250) UBIVE, CNR des fièvres NF NF NF FVR 2 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo hémorragiques virales Maladie CCHF Equipe Antigène (équivalent tests) Ascites ou sérums polyclonaux (équivalent tests) Contrôle RT-PCR UBIVE, CNR des fièvres hémorragiques virales Antigènes pour Elisa IgM et Elisa IgG préparés à partir de cellules infectées. (1000 tests de chaque) NF 250µl (625) Total (†) : IgM + IgG en duplicate ; En 2010 les demandes de soutien adressées au laboratoire concernaient la réalisation de tests de détection ou de confirmation. Aucun transfert de réactif n’a été opéré. Partie II : Activités spécifiques découlant du mandat des Laboratoires de référence 3. 4. Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production et de l’évaluation de vaccins Implication dans l’élaboration d’un vaccin contre la FVR. Deux virus dépourvus de virulence chez la souris sont des candidats vaccins potentiels, les souches Clone 13 et R566. Clone 13 est un clone d’un isolat naturel dont le facteur de virus NSs a été naturellement délété. R566 est un réassortant entre Clone 13 et MP12, une souche obtenue par l’USARMRIID par mutagénèse aléatoire à partir d’une souche virulente. Les régions du génome codant pour la polymérase et les glycoprotéines ont été mutées et se révèlent porteuses de mutations d’atténuation. Toutefois, la protéine NSs du virus MP12 reste fonctionnelle, conférant un niveau non négligeable de virulence à cette souche. Chez la souche R566, la région du génome correspondant au segment S et porteuse du facteur de virulence a été remplacée par celle de Clone 13 et le virus ainsi constitué se trouve donc porteur de mutations dans les trois segments (L, M et S). Concernant R566, un accord avec un industriel européen a été signé afin de réaliser des tests d’innocuité et d’efficacité, probablement dans le courant de l’année 2010, de ce candidat vaccin. Mise en place courant 2009 d’une évaluation de l’activité des vaccins existants (vaccins commerciaux à virus inactivé et à virus atténué en provenance de la société OBP, Afrique du Sud) et d’un candidat vaccin (souche clone 13) chez des moutons de race Préalpes du sud [6 moutons / vaccin suivis pendant 12 semaines] : recherche du virus vaccinal par isolement et RT-PCR et dosage des anticorps (IgG, IgM et neutralisants) en cours. L’expérimentation a été réalisée dans les locaux confinés de niveau A3 de la plate-forme d’infectiologie expérimentale de l’INRA (37380 Nouzilly) Production d’antigène recombinants contre les proteines N et NSs. Ces deux protéines sont utilisées en ELISA : N permet d’évaluer la séropositivité et NSs devrait permettre de distinguer les animaux infectés des animaux vaccinés par les nouveaux vaccins dépourvus de NSs. Préparation et fourniture des réactifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et les vaccins - Mise en place d’une collaboration avec l’Institut Pasteur de Madagascar pour la gestion d’une collection de sérums collectés chez des volontaires humains et chez différents animaux naturellement infectés par le virus de la FVR. Les sérums ont été adressés au CDC d’Atlanta pour lyophilisation et contrôle puis ré-adressés à l’Institut Pasteur de Madagascar et au CNR des arbovirus de l’Institut Pasteur Paris. Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 3 Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo - Dans le cadre de ses missions, le CNR des arbovirus soutien différents laboratoires hospitaliers pour le diagnostic de la FVR ou pour des transferts de technologies (sérologie). Nomination officielle par le Ministère de l’Alimentation, de l’Agriculture et de la Pêche français du laboratoire de l’Afssa Lyon comme Laboratoire National de Référence (LNR) pour la fièvre de la vallée du Rift (diagnostic sérologique) (Arrêté du 29 décembre 2009 paru au JO du 7 janvier 2010) 5. Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies Pour répondre aux exigences des échanges internationaux du bétail, il devient nécessaire de distinguer les animaux naturellement infectés et ceux qui ont été vaccinés. Les virus Clone 13 et R566 présentent la même particularité d’être défectif pour la protéine NSs. Nous développons actuellement un test pour détecter les anticorps contre la nucléoprotéine et contre la protéine NSs. Les anticorps anti-nucléoprotéine sont le signe d’une infection ou d’une vaccination alors que les anticorps anti-NSs ne doivent être présents que chez les animaux infectés. 6. 7. Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle zoosanitaire au niveau international - Cas humains de FVR à Mayotte (communication du CH Mamoudzou). Les sérums seront adressés au CNR des Arbovirus de l’Institut Pasteur pour détermination de la séquence nucléotidique. - Enquête de séroprévalence en cours dans le bétail à Mayotte et Ile Maurice (source Vincent Cardinal, AFSSA). La circulation du vFVR est actuellement de bas niveau tout au moins pour ce qui concerne les formes cliniques. Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE Néant 8. Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE Néant 9. Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de l’OIE Aucune demande. 10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres organisations internationales Dans le cadre du projet européen Arbo-zoonet, nous avons organisé plusieurs réunions où les problèmes de FVR et CCHF ont été discutés. Une réunion annelle tenue à St Raphaël le 20 septembre 2009 a rassemblé les différents partenaires du projet (25 pays différents d’Europe, Afrique, Moyen Orient, Asie). Deux symposiums ont également été organisés sur l’épidémiologie (cartographie de la circulation du virus et de leurs vecteurs) et les stratégies vaccinales respectivement à Montpellier (France) et à Istanbul (Turquie). D’autre part, le LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV: Groupe de travail sur la fièvre hémorragique de Crimée-Congo Comité ad hoc en janvier 2010 11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration 4 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo Un vaccin à virus atténué avec la souche Clone 13 est commercialisé par OBP en Afrique du Sud. Nous avons collaboré pour déterminer son immunogénicité (induction d’anticorps neutralisants), son innocuité (absence d’effets secondaires tels qu’effets tératogènes et avortements chez la brebis gestante décrits pour d’autres souches atténuées à l’exemple de la souche Smithburn) et son pouvoir protecteur contre les signes cliniques chez le mouton et la brebis gestante. Les résultats sont très convaincants et un effet dose a été observé avec une dose optimale déterminée. Une publication est en cours de soumission. 12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences internationales) Présentations à l’occasion de conférences ou de réunions internationales Les membres du LR OIE a participé à plusieurs réunions traitant en particulier de RVFV et/ou CCHFV le meeting annuel d’Arbo-zoonet en octobre 2010 à Rabat. Publications scientifiques LAGERQVIST N, J. NASLUND, A. LUNDDKVIST, M. BOULOY, C. AHLM AND G. BUCHT. 2009. Characterization of immune responses and protective efficacy in mice after immunisation with Rift Valley fever virus cDNA constructs. Virology Journal. 6 :6 doi :10.1186/1743-422X-6.6 AHMED J. BOULOY M. EGONUL O, FOOKS T., PAWESKA J, CHEVALIER V, DROSTEN C, MORMANN R, TORDO N, VATANSEVER Z, CALISTRI P, ESTRADA A, MIRAZIMI A,UNGER H, YIN H AND SEITZER U. 2009. International network for capacity building for the control of emerging viral vector borne zoonotic diseases : Arbo-zoonet. Eurosurveillance 14 1-4. CETRE-SOSSAH C., A. BILLECOCQ, R. LANCELOT, C. DEFERNEZ, J. FAVRE, M. BOULOY, D. MARTINEZ AND E. ALBINA. 2009. Evaluation of a commercial competitive ELISA for the detection of antibodies to Rift valley fever virus in sera of domestic ruminants in France. Preventive Veterinar Medecine. ATTARZADEH-YAZDI G, FRAGKOUDIS R, CHI Y, SIU RW, ULPER L, BARRY G, RODRIGUEZANDRES J, NASH AA, BOULOY M, MERITS A, FAZAKERLEY JK, KOHL A. 2009. Cell to cell spread of the RNAi response suppresses Semliki Forest virus infection of mosquito cell cultures and cannot be antagonised by this virus. J. Virol. 83 5735-5748. BOULOY M. AND R. FLICK. 2009. Reverse genetics technology for Rift Valley fever virus: Current and future applications for the development of therapeutics and vaccines. Antiviral research 84 101-118 PEYREFITTE C N, PERRET M, GARCIA S, RODRIGUES R, BAGNAUD A, LACOTE S, CRANCE JM, VERNET G, GARIN D, BOULOY M* AND PARANHOS-BACCALÀ G. 2010. Differential activation profiles of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus versus Dugbe virus infected antigen presenting cells. J . Gen Virol. 91 189-198 Z. MANSUROGLU, T. JOSSE, J. GILLERON, A. BILLECOCQ, P. LEGER3, M. BOULOY AND E. BONNEFOY. 2010. Non structural NSs protein of Rift Valley Fever Virus interacts with pericentromeric DNA sequences of the host cell inducing chromosome cohesion and segregation defects. J Virol 84 928-939 Grandadam M. Rift Valley fever virus. 2009. In Molecular detection of human viral pathogens. Dongyou Liu Ed. Taylor and Francis CRC Press. Sous presse. PÉPIN, M.: Fièvre de la vallée du Rift. In: La lutte antivectorielle en France [CD-ROM Chapitres analytiques], (D. FONTENILLE, C. LAGNEAU, S. LECOLLINET, R. LEFAIT-ROBIN, M. SETBON, B. TIREL, and A. YÉBAKIMA, eds.). Marseille, IRD Editions, 2009, 153-165. PÉPIN, M., DAMPFHOFFER, M., CHEVALIER, V., and CÊTRE-SOSSAH, C.: La fièvre de la vallée du Rift a fait une première incursion à Mayotte, un département français. Bull Epidemiol AFSSA, 2009, 33, 14. PÉPIN, M., PAWESKA, J., and BOULOY, M.: Diagnostic specificity of ELISA-based tests for the detection of antibodies to Rift Valley Fever virus in French ruminants. Rev Med Vet, 2010, Accepté pour publication le 15 janv 2010. Autres communications Symposia sur les stratégies d’intervention organisé dans le cadre des projet Arbo-zoonet et Epizone « Evaluation of the efficacy and safety of the RVF Clone 13 vaccine in sheep.” Copenhague (Danemark) Octobre 2010 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010 5 Fièvre de la vallée du Rift et Fièvre hémorragique de Crimée–Congo 13. Inscription de kits de diagnostics au registre de l’OIE i) Avez-vous participé à des panels d’experts visant à valider des kits de diagnostic candidats au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ? Néant ii) Avez-vous soumis à l’OIE la candidature de kits pour leur inscription au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ? Néant _______________ 6 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010