Métabolisme glucidique

Milieu
Métabolisme
Métabolisme
énergétique
Métabolisme
glucidique
Recherche de la catalase
présence d'une catalase
Recherche de l'oxydase
présence d'une oxydase
Viande-foie(VF 6o/oo), Milieu VF
recherche du type respiratoire
Mannitol mobilité nitrate( MMN), Milieu
protidique
présence d'une nitrate réductase
Bouillon nitraté.
présence d'une nitrate réductase
Hugh et Leifson, Milieu de
Mise en évidence de la voie d'attaque du glucose = du mode d'utilisation du glucose :
oxydation(oxydatif) ou fermentation (fermentatif)
eau peptonée + glucide
Etude de la fermentation d'un glucide choisi
Hajna - Kligler - Roland, Milieu de
Utilisation du Lactose et du glucose (glucide) comme source de carbone et d'énergie,
production de gaz et d'H2S.
Clark - Lubs, milieu de
Voie fermentaire utilisée pour dégrader le glucose : voie fermentative ou voie oxydative
Test de l'ONPG : recherche de la Bêta-galactosidase
Présence d'une B-galactosidase nécessaire pour la dégradation du Lactose, capable de
scinder l'ONPG
B-galactosidase, Recherche de la
Présence d'une B-galactosidase nécessaire pour la dégradation du Lactose, capable de
scinder l'ONPG
Mannitol - mobilité - nitrate = MMN
Utilsation du mannitol (glucide) comme source de carbone et d'énergie
Amidon, gélose à l'amidon
Recherche d'une amylase
Recherche de l'esculinase
Recherche d'une esculinase capable de scinder l'esculine
Utilisation du citrate : milieu citrate de Simmons
Métabolisme
Caractère recherché
Citrate est la seule source de Carbone et d’énergie
urée - tryptophane, Bouillon
Recherche de l'uréase, tryptophanase et tryptophane désaminase.
Recherche de la gélatinase
Recherche de la gélatinase
Milieu de Falkow (LDC, ODC, ADH)
Recherche de la LDC(lysine décaboxylase), ODC (ornithine décarboxylase), ADH
(arginine dihydrolase)
Recherche de la LDC et LDA sur milieu lysine Fer
Recherche de la LDC (lysine décaboxylase), et de la LDA (lysine désaminase)
Gélose au lait
recherche du pouvoir protéasique (protéase) la caséinase enzyme dégradant
la caséine.
Gélose à l'oeuf
Recherche de la Lécithinase, lipo-protéinase
Métabolisme
lipoprotidique
Recherche de la Bêta-galactosidase "test ONPG"
La dégradation du lactose (substrat) est un caractère qui est souvent utilisé au laboratoire pour discriminer certaines espèces afin
d'identifier une bactérie.
Le caractère Lactose (+) peut parfois apparaître faussement négatif.
Dans ce cas la bactérie possède les enzymes qui permettent la dégradation du lactose (Bêta-galactosidase) mais elle ne possède pas la une
protéine membranaire qui permet au lactose de pénétrer spécifiquement dans la cellule bactérienne : la Bêta-galactoside-perméase .
Dans le cas où une bactérie apparaît comme lactose (-) sur un milieu lactosé il peut se présenter plusieurs possibilités. (voir Principe).
Ce test permet donc de faire la différence pour une bactérie apparaissant lactose (-) entre les lactose (-) "vraie" de celles qui sont
lactose (+) "lente".
La recherche de la Bêta-galactosidase est un des premiers tests réalisés en pratique courante.
La recherche de la Bêtagalactosidase explore la présence d’une enzyme utile au métabolisme du lactose.
On ne réalise ce test que pour les bactéries qui dégradent le glucose et ne dégradent pas le lactose (-).
L'ONPG se présente soit sous forme liquide (ampoule) soit sous forme de disques imprégnés d'ONPG cristallisé (déshydraté).
L'ONPG est une molécule artificielle analogue structurale du lactose voir Principe
Pour comprendre ce qu'il se passe commençons par présenter le cas normal d'une dégradation du lactose.
(1) Le lactose source de carbone et d'énergie pour la cellule.
Le Lactose est un diholoside formé de l'association de 2 oses le glucose et le galactose liés par une liaison Bêta-osidique.
(2) Que se passe-t-il quand une bactérie dégrade le lactose ?
- La Bêta-galactosidase est une enzyme qui permettra l’hydrolyse du lactose en glucose et galactose.
- La Bêta-galactoside perméase membranaire est une pore sélective membranaire permettant le transfert du lactose du milieu extérieur
vers le cytoplasme de la bactérie, à travers la membrane plasmique.
(3) Comment expliquer ce qu'il se passe quand une bactérie apparaît lactose (-) ?
- soit la bactérie ne possède pas la Bêta-galactosidase.
- soit elle possède une Bêta-galactoside perméase déffectueuse mais une Bêta-galactosidase fonctionnelle.
(4) Comment met-on en évidence la présence de la Bêta-galactosidase ?
On remplace donc le lactose par l’ONPG qui est une molécule (substrat synthétique) dont la structure est proche de celle du lactose et qui
est elle aussi hydrolysée par la B-galactosidase selon la réaction :
ONPG (orthonitrophényl-Bêta-galactoside) (incolore)
ONP (orthonitrophénol)( de couleur jaune)
L'apparition de l'ONP de couleur jaune, issu de la dégradation de l'ONPG, met en évidence la présence de la galactosidase.
(5) Comment interpréter les résultats obtenus avec le test ?
- Cas d'un test ONPG (-) pour bactérie apparaissant Lactose (-)
- Cas d'un test ONPG (+) pour bactérie apparaissant Lactose (-)
En ce qui concerne le Lactose :
Une bactérie lactose (+) est toujours: B-galactoside perméase (+) , B-galactosidase(+) et glucose(+).
Un germe est lactose (-) si un de ces trois facteurs est négatif.
La recherche de la Bêta-galactosidase permet donc de connaître la raison pour laquelle une bactérie apparaît lactose négatif. Elle permet de
scinder le groupe des bactéries lactose- en deux, celles qui sont b-gal+ et celles qui sont b-gal- .
La réaction générale :
Cette réaction ne permet pas de visualiser l’hydrolyse car aucune de ces molécules n’est colorée.
galactosidase.