Thème 3-A TP2 : des anticorps contre le virus de la grippe… S

Thème 3-A TP2 : des anticorps contre le virus de la grippe… S. Dalaine
LYCÉE
Les épidémies de grippe surviennent chaque année, au cours de l’automne et de l’hiver, dans les régions tempérées. La
grippe causée par un virus, se caractérise principalement par l’apparition brutale d’une forte fièvre, de maux de tête et de
douleurs musculaires et articulaires. La plupart des malades guérissent en une semaine sans avoir besoin de traitement
médical, signe que l’organisme a mis en route des mécanismes de défense efficaces.
Célestine soufre d’une forte fièvre (39°C), de douleurs de type courbatures. Le médecin lui diagnostique une grippe et
comme unique traitement lui préconise une semaine de repos et de l’aspirine. Elle appelle son amie Juliette, car elle ne
comprend pas comment ses mastocytes, cellules dendritiques et autres granulocytes vont pouvoir venir à bout du virus
grippal. Juliette rassure Célestine, en lui proposant de mener l’enquête sur le mode d’action de son système immunitaire
dans le cas d’une infection grippale.
Par une démarche d’investigation, aidez Juliette à rassurer Célestine sur l’efficacité de son système immunitaire.
Document 1 : le virus de la grippe
D’après SVT, TS, Nathan, ed.2012 , p298.
Document 2 : des modifications du sérum*
*sérum : le sang sans les cellules D’après SVT TS, Belin, ed.2012, p.284
Document 3 : les cibles des anticorps
D’après SVT TS, Belin, ed.2012, p.285

Thème 3-A TP2 : des anticorps contre le virus de la grippe… S. Dalaine
LYCÉE
Capacités ou attitudes
Activité 1 : anticorps vs antigène
Critères de réussite
Utiliser des techniques et
gérer le poste de travail
Réaliser le protocole de révélation d’HCG par agglutination. Observer les deux
cupules au MO et conclure sur le rôle des anticorps sur les antigènes.
Cupules identifiées
Agglutination observée
Mise en relation
effectuée
Proposer une démarche
de résolution
Un lapin reçoit par injection un antigène (= substance reconnue comme du
non soi par le système immunitaire), de l’albumine bovine (BSA) (molécule
présente dans le sérum de bœuf). Trois semaines plus tard, le sérum du lapin
est prélevé. Le sérum est le sang dépourvu de cellules. On cherche à savoir si
les anticorps de lapin sont spécifiques ou non de l’antigène BSA. Proposer
une disposition des produits permettant d’identifier l’antigène contre lequel
sont dirigés les anticorps du lapin précédemment immunisé, en utilisant la
méthode d’Ouchterlony. Votre réponse prendra la forme d’un schéma de la
boîte de test telle que vous pensez la préparer.
Disposition judicieuse
des produits dans les
puits
Utiliser des techniques et
gérer le poste de travail
Mettre en œuvre le protocole.
Etapes suivies dans
l’ordre
Puits non contaminés
Communiquer à l’aide des
modes de représentation
Présenter les résultats de la boîte fournie sous la forme de votre choix
(tableau, schéma…).
Titre, légendes,
contenu correct, soin
Appliquer une démarche
explicative
Déduire de l’ensemble des résultats si la spécificité du lot d’anticorps a été
vérifiée.
Spécificité justifiée
Compétences
Activité 2 : élucidation de la spécificité d’un anticorps à un antigène via une étude moléculaire
Critères d’évaluation
UTILISER
Un logiciel de visualisation
de modèles
COMMUNIQUER
Représenter par un
schéma
On cherche à préciser, structuralement, la spécificité d’un anticorps pour un
antigène donné.
Ouvrir avec le logiciel RASTOP le fichier « IGGTOTAL.pdb » (Igg pour
immunoglobuline G = anticorps). Effectuer un affichage en ruban des chaînes
constituant l’anticorps, les couleurs utilisées (vert, jaune, bleu clair, bleu foncé
…) devant distinguer ces chaînes.
 En passant le curseur de la souris sur l’anticorps le logiciel vous indique (dans
l’onglet du bas), le nom de la chaîne (désigné par une lettre). Présenter
l’anticorps sur un fond blanc dans l’hypothèse d’une impression…
Dénombrer la quantité de chaînes constituant un anticorps et présenter sous
forme d’un schéma simplifié la forme d’un anticorps.
Utilisation autonome
du logiciel
Dénombrement des
chaînes
Forme en ruban
présente, fond blanc,
couleurs différentes
des chaînes
UTILISER
un logiciel de visualisation
de modèles
COMMUNIQUER
Représenter par un
schéma
On cherche à connaître la zone de l’anticorps impliquée dans la neutralisation
de l’antigène.
On dispose de la modélisation d’un fragment de la molécule de l’anticorps
précédent fixé sur l’antigène.
Afficher simultanément à l’écran le fichier « IGG-LYS.PDB » en utilisant les
mêmes codes « couleur » que précédemment ; l’antigène (appelé Y) sera
représenté en sphères rouges.
Préciser sur votre schéma, à partir des observations précédentes, quelle partie
de l’anticorps se fixe à l’antigène.
Appeler le professeur.
Les couleurs
précédentes ont été
utilisées de nouveau,
respect des consignes
pour la couleur et la
forme de l’antigène
Antigène
correctement placé
sur le schéma
UTILISER
un logiciel de traitement
de données
RAISONNER
Adopter une démarche
explicative
UTILISER
un logiciel de traitement
de données
PREPARER à la
citoyenneté
On dispose de séquences partielles des 4 chaînes polypeptidiques constituant
la molécule d’anticorps anti-virus VIH (virus responsable du SIDA).
Grâce au logiciel Anagène, comparer 2 à 2, les 4 chaînes de cette même
immunoglobuline (ouvrir « igg-sida-4chaines.edi »).
Noter la comparaison sur votre feuille.
On cherche alors à comparer les chaînes lourdes et légères de l’anticorps anti-
gp120, celui anti-gp41.
A l’aide de vos connaissances, formuler le résultat attendu dans la
comparaison des séquences peptidiques.
Confronter votre hypothèse aux résultats observés (ouvrir le fichier igg-vih-
8seq.edi).
 Ne pas utiliser la comparaison simple mais la comparaison avec discontinuité
Noter la comparaison sur votre feuille.
Eteindre l’ordinateur.
Choix correct des
séquences à comparer
2 à 2
Résultat attendu
cohérent
Séquence comparée
judicieusement
Séquences ac anti
gp120 et anti gp41
seules sélectionnées

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LYCÉE
Fiche de protocole du test de grossesse basé sur la révélation par agglutination de la présence d’HCG
Ce test est basé sur la réaction d’agglutination entre des anticorps anti-HCG fixés sur billes de latex et l’hormone HCG
contenu dans une urine simulée. La réaction est réalisée sur des lames à concavités.
1- Repérer la concavité.
2- Sur une lame à 2 concavités, déposer une goutte d’urine sans HCG et une goutte d’urine + HCG. Repérer chaque dépôt.
3- Ajouter dans chaque concavité, une goutte de solution de « latex HCG ». Cette solution contient des anticorps anti-HCG
fixés sur billes de latex.
4- Observer les résultats à l’œil nu puis au MO après un temps d’attente de deux minutes.
Fiche de protocole du test d’immunodiffusion ou test d’Ouchterlony
Principe du test de double diffusion d’Ouchterlony :
Les molécules déposées dans chacun des puits diffusent dans la gélose. La vitesse de diffusion dépend de la taille des
molécules et de leur diversité dans chaque puits. Ce test requiert une double diffusion : la diffusion de l’anticorps et la
diffusion de l’antigène.
La neutralisation des antigènes par les anticorps entraîne l’apparition d’un arc de précipitation (= complexe immun) visible à
l’œil nu.
Matériel
- eau distillée, du papier absorbant, gants, lunettes
- une petite boîte de Pétri ; un tube emporte-pièce et un cure-dent
- un marqueur (pouvant écrire sur la boîte de Pétri), sur les emporte-pièces, sur les poires ; un cure-dent pour aider à retirer
le morceau de gélose découpé par l’emporte-pièce
- des poires calibrées de 20 µL
- un récipient poubelle
- un modèle de réalisation des puits
- un microtube (bouchon rouge) contenant le sérum du lapin ayant subi l’injection de BSA, 3 semaines plus tôt.
- un microtube contenant du sérum de bœuf, un microtube contenant de la lactalbumine (protéine présente dans le sérum
de tous les Mammifères), un microtube contenant de l’albumine de sérum de cheval, un microtube contenant du sérum de
porc, un microtube contenant du sérum de chèvre, un microtube contenant du sérum de cheval, un microtube contenant du
sérum de lapin, un microtube contenant de la BSA (albumine de bœuf)
1. Réalisation des puits dans la boîte de gélose :
Poser le modèle pour faire les puits sous la boîte de gélose (couvercle vers le haut).
Ouvrir la boîte.
Faire un trou en perçant la gélose au centre de la boîte avec l’emporte-pièce, puis 6 trous autour du trou central en suivant le
modèle visible sous la boîte.
Le disque de gélose formé par l’emporte-pièce est enlevé soit en restant dans le tube, soit avec un cure-dent, mais attention
à ne pas percer la gélose de part en part !
 Les trous ne doivent pas transpercer totalement la gélose, l’objectif de ce test est de laisser diffuser les molécules
dans la gélose !!!
 Attention à ne pas fendre la gélose !
 Respecter le modèle de réalisation des puits car les distances sont étudiées pour fournir de bons résultats.
 Le milieu ne contient pas d’antibactérien ni d’antifongique. Il convient donc de travailler le plus proprement possible pour
éviter d’éventuelles contaminations pour ne pas détériorer les anticorps.
2. Dépôt des sérums :
Vous avez proposé un modèle de dépôt, réalisez-le !
 Conseil : donner une orientation à la boîte en faisant un trait au stylo permanent sur la boîte au niveau d’un puits.
 Conseil : repérer sur un schéma le plan des dépôts de sérums.
 Conseil : coller sur les poires des gommettes de couleur correspondantes au bouchon des tubes ou bien annoter les
poires avec un marqueur permanent.
3. Obtention des résultats
Laisser les boîtes 24h à 26°C ou 36h à température ambiante. Les arcs apparaissent. Les arcs se conservent au moins une
semaine au réfrigérateur (pour éviter la déshydratation).

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