TP 3 : CARACTERISTIQUES DES ENZYMES

TP 3 : CARACTERISTIQUES DES ENZYMES
Objectif : - Quel est le rôle d’une enzyme dans un organisme ?
- Comment agissent-elles ?
I- Rôle des enzymes dans une réaction du métabolisme : l’hydrolyse de l’amidon
L'amylase est une enzyme contenue dans la salive mais que l'on peut aussi extraire d'un médicament.
Activités à réaliser
Capacités
Travail à effectuer :
1- Préparer un tube contenant de l'emploi d'amidon + eau distillée (tube a), et un autre
contenant de l'empois d'amidon + amylase (tube b) et les placer dans le bain thermo
staté.
2- A t = 0, puis toutes les minutes pendant 8 minutes, prélever 2 gouttes de chaque tube,
les déposer dans une plaque à cupules, et réaliser le test au lugol (déposer une goutte de
lugol par-dessus la goutte de solution déjà déposée).
3- A t=0, t=4 min et t=8 min, prélever un peu de solution de chaque tube dans un tube à
essai et effectuer le test à la liqueur de Fehling (mettre un peu de liqueur puis chauffer).
Questions :
1- Noter l'ensemble des résultats sous forme d’un tableau.
2- Interpréter chacun d’eux
3- Comment définir le rôle d’une enzyme.
4- Si on remet de l'amidon dans le tube b à la fin de l'expérience, on obtient la même
coloration que précédemment. En déduire une autre propriété de l'enzyme.
Réaliser une
expérience en
respectant les
consignes
Adopter une
démarche
explicative
II- Etude du comportement des enzymes vis-à-vis de différents substrats
Les levures de bière possèdent un équipement enzymatique varié dont une saccharase (libérée dans le milieu de vie des levures) et
une maltase (contenu dans le cytoplasme des levures): on se propose ici de découvrir ces enzymes et leur comportement sur
différents sucres: le saccharose et le maltose.
Activités à réaliser
Capacités
Quelques heures avant la manipulation, des levures (100 g/L d’eau) ont été mises en culture
dans un bécher en oxygénant bien le milieu.
Travail à effectuer :
1- Prélever 4ml de culture de levures dans un tube à centrifugeuse.
2- Centrifuger cette solution. On obtient alors un surnageant et un culot.
3- A l’aide d’une pipette, prélever 3 ml dans un tube du surnageant obtenu (filtrat A)
4- A l’aide d’une pipette, prélever le culot (constitué par les levures) et verser le dans un
pilon . Ajoutez-y un peu de solution tampon (pH=7).
5- Broyer avec du sable, puis filtrer la solution obtenue en récupérant le filtrat (=filtrat B)
dans un bécher.
6- Préparer quatre tubes à essais de la façon suivante :
- tube 1 : 1 ml de filtrat A + 1 ml de saccharose
- tube 2 : 1 ml de filtrat A + 1 ml de maltose
- tube 3 : 1 ml de filtrat B + 1 ml de saccharose
- tube 4 : 1 ml de filtrat B + 1 ml de maltose
7- Placer les cinq tubes au bain-marie à 37°C pendant 10 min.
8- Au bout de 10 min, prélever une goutte dans chacun des tubes et la déposer sur une
bandelette réactive du glucose ou faîtes le test à la liqueur de Fehling.
9- Vous disposez d’une solution de saccharose préparée il y a quelques jours, prélevez
une goutte de cette solution et faîtes le test à la liqueur de Fehling.
Questions :
1- Pourquoi a-t-on récupéré le surnageant, et broyé le culot ?
2- Présenter vos résultats et vos interprétations sous forme d’un tableau.
3- Que met en évidence cette manipulation.
4- Quelle information apporte les résultats de la dernière manipulation.
Réaliser une
expérience en
respectant les
consignes
Adopter une
démarche
explicative
BILAN : A partir des exemples ci-dessus, expliquer ce qu’est une enzyme.