Thèe - I.RIOUSSET
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VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON Année 2012 - Thèse n° ETUDE EPIDEMIOLOGIQUE DES AVORTEMENTS HERPETIQUES EQUINS DECLARES AU RESPE ENTRE 2009 ET 2011 THESE Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I (Médecine - Pharmacie) et soutenue publiquement le 5 Octobre 2012 pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire par RIOUSSET Isabelle Née le 22 Octobre 1988 à Paris (14ème) VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON Année 2012 - Thèse n° ETUDE EPIDEMIOLOGIQUE DES AVORTEMENTS HERPETIQUES EQUINS DECLARES AU RESPE ENTRE 2009 ET 2011 THESE Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I (Médecine - Pharmacie) et soutenue publiquement le 5 Octobre 2012 pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire par RIOUSSET Isabelle Née le 22 Octobre 1988 à Paris (14ème) 3 4 REMERCIEMENTS Au président de ma thèse, monsieur le Professeur Christian CHIDIAC, Professeur à l’université Claude Bernard, Qui nous a fait l’honneur d’accepter la présidence de mon jury de thèse Hommages respectueux A madame le Professeur Agnès Leblond, Professeur au Campus vétérinaire VetAgro Sup Lyon, Qui m’a fait l’honneur de diriger ce travail, Pour ses conseils avisés, son implication et son soutien, Sincères remerciements A monsieur le Professeur Pierre Guérin, Professeur au Campus vétérinaire VetAgro Sup Lyon, Qui accepté de faire partie de mon jury de thèse, Sincères remerciements A madame le Docteur Anne Josson, Maître de conférences au Campus vétérinaire VetAgro Sup Lyon, Pour son aide, sa disponibilité et sa gentillesse Sincère reconnaissance A madame le Docteur Christel MARCILLAUD-PITEL, à monsieur le Docteur Stéphane CHAFFAUX et aux membres du RESPE, Qui ont permis la réalisation de ce projet Pour leur aide précieuse et leur motivation Sincère gratitude 5 6 TABLE DES MATIERES Table des matières……………………………………………………………………………………………………………7 Liste des figures………………………………………………………………………………………………………………13 Liste des tableaux………………………………………………………………………………………………………...…15 Liste des abréviations et des sigles……………………………………………………………………………...…17 Liste des annexes……………………………………………………………………………………………………………19 Introduction…………………………………………………………………………………………………………………....21 PREMIERE PARTIE : Etude bibliographique des causes d’avortements en espèce équine et des herpèsvirus équins de type 1 et 4 I. Diagnostic différentiel des causes d’avortement en espèce équine………………….23 A. Définition d’un avortement……………………………………………………………………..23 B. Attitude à adopter face à un avortement ………………………………………………….24 C. Etiologie des avortements équins……………………………………………………………..25 1. Avortements d’évolution aiguë ou chronique………………………….……..25 2. Causes courantes d’avortement en espèce équine………………….………25 D. Prévalence des différentes causes d’avortement en France……………………..27 II. Présentation des Herpèsvirus Equins de type 1 et 4……………………………………..28 A. Etiologie…………………………………………………………………………………………………..…29 1. Présentation et classification des herpèsvirus équins …………………….29 2. Structure des herpèsvirus équins…………………………………………………..…29 3. Génome viral……………………………………………………………………………………..30 4. Cycle de réplication…………………………………………………………………………...31 B. Epidémiologie…………………………………………………………………………………………....34 1. Epidémiologie clinique……………………………………………………………………...34 2. Epidémiologie analytique………………………………………………………………….34 C. Pathogénie et formes cliniques…………………………………………………………………35 1. Primo-infection………………………………………………………………………………...35 2. Pathogénie des différentes formes cliniques……………………………………36 a. Forme respiratoire……………………………………………………………………36 b. Forme nerveuse………………………………………………………………………...37 c. Forme abortive et maladie néonatale………………………………………39 3. Excrétion……………………………………………………………………………………………42 4. Portage latent, réactivation et ré-excrétion……………………………………...42 5. Transmission……………………………………………………………………………………..44 6. Immunité………...…………………………………………………………………………………44 7 III. Forme abortive et néonatale de l’herpèsvirose équine…..……………………………44 A. Expression clinique et diagnostic différentiel…………………………………………..45 B. Lésions associées à la forme abortive de l’EHV…………………………………………46 C. Diagnostic…………………………………………………………………………………………………..47 1. Diagnostic direct……………………………………………………….……………………….47 a. Immunofluorescence……………………………………….………………………..47 b. Isolement viral………………………………………………………………………….47 c. Polymérase Chain Reaction (PCR)………………….…………………………47 2. Diagnostic indirect………………………………………………….…………………………48 D. Traitement…………………………………………………………………………………………………48 E. Pronostic ………………………………………………………………………………………………...…48 F. Prophylaxie……………………………………………………………………………………………..…49 1. Prophylaxie sanitaire………………………………………………………………………..49 2. Prophylaxie médicale………………………………………………………………………..50 a. Les différents vaccins……………………………………………………………….50 b. Difficultés de mise en place d’une stratégie vaccinale……………..52 IV. Le RESPE et le sous-réseau « Avortements » ………….…………………………………..…54 1. Présentation du RESPE………………………………………………………………………………54 2. Objectifs du RESPE……………………………………………………………….…………………….54 3. Fonctionnement du RESPE……………………………………………………………….………..56 4. Moyens de communication……………………………………………………………….………57 5. Le sous-réseau « Avortements » ……………………………………………………………….58 8 DEUXIEME PARTIE : Etude épidémiologique des avortements herpétiques équins en partenariat avec le RESPE I. Motivations et objectifs de l’étude……………………………………………………………………..59 II. Sujets, matériel et méthodes……………………………………………………………………………..59 A. Définition du cadre de l’étude…………………………………………………………………...59 1. Période d’étude…………………………………………………………………………………59 2. Définition des critères d’inclusion……………………………………………………60 3. Définition des cas positifs et des cas témoins…………………………………...60 B. Déclaration des avortements…………………………………………………………………….60 1. Protocole de déclaration…………………………………………………………………..60 2. La fiche de déclaration …………………………………………………………………….61 3. La déclaration en ligne………………………………………………………………………61 C. Les prélèvements et analyses effectués…………………………………………………….61 1. Les prélèvements………………………………………………………………………………61 2. Les analyses de laboratoire……………………………………………………………….62 D. Analyse statistique de la base de données « Avortements » du RESPE……..63 1. Description de l’échantillon de l’étude……………………………………………..63 2. Etude des facteurs de risques et des caractéristiques des avortements herpétiques équins………………………………………………………………………………..65 a. Variables qualitatives……………………………………………………………….65 b. Variables quantitatives…………………………………………………………….65 9 III. Résultats de l’étude………………………………………………………………………………………..66 A. Description de l’échantillon de l’étude……………………………………………………...66 1. Les déclarations………………………………………………………………………………...66 a. Nombre de déclarations au cours de la période d’étude………….67 b. Vétérinaires déclarants…………………………………………………………….67 c. Provenance des déclarations……………………………………………………68 2. Les effectifs déclarants ……………………………………………………………………..70 a. Activité des effectifs………………………………………………………………….70 b. Importance des effectifs……………………………………………………………70 c. Antécédents pathologiques au sein de l’effectif ………………………71 d. Statut vaccinal des effectifs……………………………………………………….72 e. Mouvements de chevaux au sein de l’effectif……………………………72 3. Les juments concernées…………………………………………………………………….72 a. Race des juments………………………………………………………………………72 b. Age des juments………………………………………………………………………...73 c. Statut vaccinal des juments………………………………………………………74 d. Statut primipare/multipare des juments…………………………………74 e. Antécédents d’avortement des juments………………………………...…74 f. Stade de gestation des juments……………………………………………...…74 g. Statut clinique de juments……………………………………………………...…75 4. Les avortons et les annexes fœtales…………………………………………….……75 a. Rétention placentaire suite aux avortements………………………..…75 b. Mortinatalité et mortalité néonatale……………………………………..…76 c. Résultats d’autopsie……………………………………………………………….…76 5. Prévalence des maladies abortives surveillées par le RESPE…………..78 a. Prévalence des cas positifs au sein de la population étudiée..…78 b. Répartition des cas positifs sur la période d’étude…………………..80 c. Répartition géographique des cas positifs……………………………….80 d. Prévalence des autres maladies abortives surveillées par le RESPE: Artérite Virale Equine et Leptospirose………………………...82 1. Etude des facteurs de risque intervenant dans les avortements à EHV……82 1. Etude des facteurs de risque à l’échelle des écuries…………………………82 2. Etude des facteurs de risque à l’échelle des juments………………………..83 10 TROISIEME PARTIE : Discussion des résultats de l’étude I. Biais susceptibles d’interférer avec l’étude……………………………………………………...…87 A. Biais d’échantillonnage……………………………………………………………………………...87 B. Biais d’observation……………………………………………………………………………............89 C. Biais d’analyse et de classification ……………………………………………………………89 D. Biais de confusion……………………………………………………………………………..............90 II. Discussion des résultats de l’étude……………………………………………………………..…90 A. Limites de ces résultats et de leur analyse………………………………………………..90 B. Confrontation aux données de la littérature……………………………………………..90 1. Résultats de l’étude comparables aux données bibliographiques…...91 a. Prévalence des avortements à EHV…………………………………………..91 b. Age des juments ………………………………………………………………………..91 c. Activité principale des écuries déclarant un avortement………...91 d. Antécédents au sein de l’écurie………………………………………………...91 e. Vaccination contre l’EHV…………………………………………………………..92 f. Durée de gestation …………………………………………………………………...92 g. Symptômes de la jument…………………………………………………………..92 h. Rétention placentaire……………………………………………………………….92 i. Lésions pulmonaires du fœtus………………………………………………….92 2. Résultats de l’étude contraires aux données bibliographiques ou non documentés……………………………………………………………………………......................93 a. Localisation géographique de l’élevage……………………………………93 b. Antécédent d’avortement au sein de l’élevage…………………………93 c. Race de la jument………………………………………………………………………93 d. Statut primipare/multipare……………………………………………………..93 e. Antécédent d’avortement de la jument…………………………………….93 f. Mortinatalité/mortalité néonatale…………………………………………...94 g. Vaccination contre l’EHV dans les effectifs « à risque » …………..94 C. Quelques résultats intéressants à développer………………………………………….94 1. Un cas d’épizootie au sein de la base de données « Avortements »..94 2. La répartition par race des cas positifs et des témoins : un résultat surprenant ? ……………………………………………………………………………...................94 11 III. Perspectives ……………………………………………………………………………...............................96 A. Perspectives pour le sous-réseau Avortements du RESPE……….……………….96 B. Vers une amélioration du questionnaire ………………………………………………….97 1. Les effectifs déclarants……………………………………………………………………...97 2. La vaccination contre l’EHV………………………………………………………………98 3. Suivi des effectifs après avortement…………………………………………………98 4. Suivi des étalons……………………………………………………………………………......98 Conclusion……………………………………………………………………………...........................................................99 Sources bibliographiques……………………………………………………………………………........................101 Annexes………………………………………………………………………………………………………………………...107 12 Liste des figures FIGURE 1: REPARTITION DES CAUSES NON-INFECTIEUSES D’AVORTEMENT EN ESPECE EQUINE D’APRES (LAUGIER & TAPPREST, 2012) FIGURE 2 : REPARTITION DES CAUSES INFECTIEUSES D’AVORTEMENT EN ESPECE EQUINE D’APRES (LAUGIER & TAPPREST, 2012) FIGURE 3 : SCHEMA DE LA STRUCTURE D’UN HERPESVIRUS D’APRES (RESCHKE, 1994) FIGURE 4 : SCHEMA D’UN HERPESVIRUS ET SON GENOME D’APRES (THIRY, 2006) FIGURE 5 : GENES INTERVENANT DANS LE CYCLE REPLICATIF DES HERPESVIRUS D’APRES (BANDEL, 2007) FIGURE 6: CYCLE DE REPLICATION DES HERPESVIRUS D’APRES (PAILLOT ET AL., 2008) FIGURE 7 : PATHOGENIE DE LA RHINOPNEUMONIE EQUINE D’APRES (THIRY, 2006) FIGURE 8 : PATHOGENIE DE LA MYELOENCEPHALOPATHIE A EHV D’APRES (THIRY, 2006) FIGURE 9 : PATHOGENIE DE L’AVORTEMENT DU A L’EHV-1 ET 4 D’APRES (THIRY, 2006) FIGURE 10 : TRANSMISSION DE L’EHV-1 DE LA JUMENT AU FŒTUS D’APRES (PAILLOT ET AL., 2008) FIGURE 11 : REGULATION DE LA LATENCE DES HERPESVIRUS EQUINS D’APRES (BORCHERS ET AL., 2006) FIGURE 12 : FŒTUS ISSU D’UN AVORTEMENT HERPETIQUE TARDIF D’APRES (BLANCHARD ET AL., 2007) FIGURE 13 : DIFFERENTS TYPES DE VACCINS DISPONIBLES CONTRE L’EHV-1 ET 4 D’APRES (PAILLOT ET AL., 2008) FIGURE 14 : CIRCULATION DES INFORMATIONS AU SEIN DU RESPE D’APRES (WWW.RESPE.NET) FIGURE 15: FACTEURS DE RISQUE POTENTIELS ET CARACTERISTIQUES DES AVORTEMENTS A EHV ANALYSES DANS L’ETUDE FIGURE 16 : PRINCIPE DE CALCUL DES ODDS RATIO (OR) ET DES INTERVALLES DE CONFIANCE A 95% FIGURE 17 : METHODE D’ETUDE STATISTIQUE DES VARIABLES QUANTITATIVES DE L’ETUDE FIGURE 18 : EVOLUTION DU NOMBRE DE DECLARATIONS D’AVORTEMENT RECENSEES PAR LE RESPE AU COURS DE LA PERIODE 2009-2011 FIGURE 19 : REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES DECLARATIONS D’AVORTEMENT RECENSEES PAR LE RESPE ENTRE 2009 ET 2011 FIGURE 20 : REPARTITION DES DECLARATIONS RECENSEES ENTRE 2009 ET 2011 EN FONCTION DE L’ACTIVITE PRINCIPALE DE L’EFFECTIF AYANT DECLARE L’AVORTEMENT 13 FIGURE 21 : REPARTITION DES DECLARATIONS EN FONCTION DE L’EFFECTIF DE L’ELEVAGE DECLARANT UN AVORTEMENT FIGURE 22: REPARTITION DES DECLARATIONS D’AVORTEMENT EN FONCTION DE LA RACE DE LA JUMENT AYANT AVORTE FIGURE 23 : REPARTITION DES DECLARATIONS EN FONCTION DE L’AGE DE LA JUMENT AYANT AVORTE FIGURE 24 : REPARTITION DES DECLARATIONS EN FONCTION DE LA DUREE DE GESTATION AVANT L’AVORTEMENT FIGURE 25 : REPARTITION DES DECLARATIONS D’AVORTEMENT EN FONCTION DES SYMPTOMES DE LA JUMENT FIGURE 26 : REPARTITION DES CAS DE MORTINATALITE ET DE MORTALITE NEONATALE DANS NOTRE ETUDE FIGURE 27 : REPARTITION DES RESULTATS D’AUTOPSIE SELON QUE LES LESIONS TROUVEES AFFECTENT PRINCIPALEMENT LE FŒTUS OU SES ANNEXES FIGURES 28 : REPARTITION DES LESIONS AFFECTANT PRINCIPALEMENT LES ANNEXES FŒTALES FIGURE 29 : REPARTITION DES LESIONS AFFECTANT PRINCIPALEMENT LE FŒTUS FIGURE 30: PREVALENCE ANNUELLE DES CAS POSITIFS (EHV-1 ET EHV-4) DE NOTRE ETUDE FIGURE 31: REPARTITION DES CAS D’EHV-1 ET EHV-4 PARMI LES 39 CAS POSITIFS DE L’ETUDE FIGURE 32 : REPARTITION CHRONOLOGIQUE DES 39 CAS POSITIFS SUR LA PERIODE D’ETUDE FIGURE 33 : REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES 39 CAS POSITIFS RECENSES PAR LE RESPE ENTRE 2009 ET 2011 FIGURE 34: SCHEMA RECAPITULATIF DES RESULTATS DE L’ETUDE FIGURE 35 : PYRAMIDE SCHEMATISANT LES OBSTACLES SUCCESSIFS A L’OBTENTION D’UNE DECLARATION D’AVORTEMENT FIGURE 36 : REPARTITION PAR RACE DES JUMENTS POSITIVES A L’EHV ET DES JUMENTS TEMOINS FIGURE 37 : REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES CHEVAUX DE COURSES - REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES CHEVAUX DE SPORT ET LOISIR - REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES AVORTEMENTS HERPETIQUES DE NOTRE ETUDE (D’APRES LE RESPE ET L’IFCE) 14 Liste des tableaux TABLEAU 1 : PRINCIPALES ETIOLOGIES DES AVORTEMENTS EN ESPECE EQUINE D’APRES (BLANCHARD ET AL., 2007) TABLEAU 2 : VACCINS ACTUELLEMENT DISPONIBLES EN FRANCE CONTRE LES EHV-1 ET 4 D’APRES (PETIT, 2011) TABLEAU 3 : LISTE DES DIFFERENTES CATEGORIES DE RACE UTILISEES DANS L’ETUDE TABLEAU 4 : RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUANTITATIVES CONCERNANT LES ECURIES TABLEAU 5: RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUALITATIVES CONCERNANT LES ECURIES TABLEAU 6: RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUANTITATIVES CONCERNANT LES JUMENTS TABLEAU 7 : RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUALITATIVES CONCERNANT LES JUMENTS 15 16 Liste des abréviations et des sigles ADN : Acide DésoxyriboNucléique AFSSA : Agence française de sécurité sanitaire des aliments ANSES : Agence nationale de sécurité sanitaire de l'alimentation, de l'environnement et du travail ARN : Acide RiboNucléique ARNm : Acide RiboNucléique messager AVEF : Association des Vétérinaires Equins Français Ct : Cycle treshold EHV : Equine HerpesVirus Gènes IE, E, L: Gènes Immediate Early, Early, Late IBR: Rhinotrachéite Infectieuse Bovine IC95 : Intervalle de Confiance à 95% IRS : Séquence de Répétition Interne IFCE : Institut Français du Cheval et de l’Equitation LAT : Latency Associated Transcript LCR : Liquide Céphalo-Rachidien LERPE : Laboratoire d’Etudes et de Recherches en Pathologie Equine OR: Odd Ratio PCR: Polymerase Chain Reaction RESPE : Réseau d’Epidémio-Surveillance en Pathologie Equine RK 13: Rabbit Kidney 13 RT-PCR: Real Time Polymerase Chain Reaction Séquence US/UL: Séquence unique courte/unique longue TRS: Séquence de Répétition Terminale VHS: Virus Host Shut-off VS: Vétérinaire Sentinelles 17 18 Liste des annexes Annexe 1 : Conduite du vétérinaire praticien pour établir le diagnostic étiologique d’un avortement - Fiche rédigée par le LERPE Annexe 2 : Charte du Vétérinaire Sentinelle au RESPE Annexe 3 : Protocole de déclaration d’un avortement au RESPE Annexe 4 : Fiche de déclaration d’avortement au RESPE disponible jusqu’en Décembre 2010 Annexe 5 : Fiche de déclaration d’avortement en ligne sur le site du RESPE Annexe 6 : Carte de répartition des vétérinaires sentinelles au RESPE Annexe 7 : Répartition des symptômes observés chez les juments positives et chez les juments témoins Annexe 8 : Répartition des lésions observées sur les fœtus issus d’avortements positifs à l’EHV et sur les témoins 19 20 Introduction L’avortement demeure une cause majeure de perte économique pour la filière équine, avec une incidence estimée de 5 à 15% selon les auteurs et les populations de chevaux étudiées (BLANCHARD et al., 2007 ; CHAFFAUX, 2009). La perte d’un poulain a bien sûr des répercussions sur la productivité d’un élevage mais il faut également prendre en compte l’aspect affectif. De nombreux propriétaires de chevaux s’investissent fortement et s’attachent émotionnellement au poulain dès sa conception. Les avortements en espèce équine peuvent avoir une origine infectieuse et peuvent parfois présenter un risque de contagion au sein de l’élevage. Il apparaît alors indispensable pour la filière équine de disposer d’un suivi épidémiologique de ces avortements. C’est dans ce but précis que le Réseau d’Epidémio-Surveillance en Pathologie Equine (RESPE) a créé en 2008 un collège « Avortements ». Son objectif premier est la surveillance des avortements infectieux contagieux de la Jument, présents en France et d’importance sanitaire ou zoonotique. Par le recueil de déclarations d’avortements et de prélèvements effectués sur l’ensemble du territoire, le réseau souhaitait pouvoir estimer la prévalence des avortements provoqués par les Herpèsvirus Equins (EHV), le virus de l’Artérite Virale et les Leptospires. Parmi ces trois causes, les Herpèsvirus Equins de type 1 et 4 sont largement majoritaires (LAUGIER & TAPPREST, 2012) aussi nous avons choisi de nous y intéresser plus particulièrement. L'infection des chevaux par ces herpèsvirus peut se manifester sous différentes formes : une forme respiratoire (connue sous le nom de « rhinopneumonie équine»), une forme abortive chez les juments gestantes ou une forme nerveuse. Ces virus ont la faculté d’échapper aux défenses immunitaires et peuvent demeurer à l’état latent chez les chevaux apparemment sains (THIRY, 2006). Aussi il est difficile de mettre en place des mesures de prévention efficaces et la vaccination ne peut pas, à elle seule, permettre une protection complète et durable de ces viroses (PAILLOT et al., 2008). Dans une première partie, le but de ce travail est de présenter une synthèse des différentes causes d’avortements chez la jument. Nous commencerons par détailler le diagnostic différentiel d’une interruption de gestation ainsi que l’attitude à adopter par le praticien face à une telle situation. Puis nous exposerons l’état actuel des connaissances concernant les Herpèsvirus Equins de type 1 et 4 en s’attardant sur leur étude virologique, épidémiologique et pathogénique. Nous développerons ensuite les caractéristiques cliniques de la forme abortive de l’herpèsvirose ainsi que les outils diagnostiques et les différentes méthodes de lutte qui existent actuellement. Enfin nous présenterons le RESPE, qui constitue à ce jour le seul réseau de surveillance en pathologie équine sur le territoire et qui permet le recueil des données concernant les avortements. Dans une deuxième partie nous présenterons l’étude menée en collaboration avec le RESPE entre 2009 et 2011. Après une présentation des méthodes de collecte et d’analyse des données, nous décrirons les cas d’avortements recensés par le réseau sur cette période. Nous nous consacrerons ensuite à l’analyse statistique des facteurs de risque et des caractéristiques des avortements à EHV. Dans un dernier temps nous discuterons les résultats de cette étude ainsi que les perspectives pour le sous-réseau « Avortement » du RESPE. 21 22 PREMIERE PARTIE : Etude bibliographique des causes d’avortements en espèce équine et des herpèsvirus équins de type 1 et 4 Dans une première partie le but de ce travail est de présenter les différentes causes d’avortements en espèce équine. Nous commencerons par détailler l’ensemble des étiologies qui doivent être prises en compte lors du diagnostic différentiel en insistant sur l’attitude à adopter face à un avortement. Puis une synthèse des connaissances actuelles concernant les herpèsvirus équins de type 1 et 4 sera présentée. L’agent étiologique sera décrit ainsi que l’épidémiologie et la pathogénie des différentes affections dont il est responsable. Par la suite nous nous intéresserons plus particulièrement à la forme abortive de l’herpèsvirose équine. Nous soulignerons ainsi les méthodes utilisées pour le diagnostic, la prophylaxie et la surveillance des avortements herpétiques. I. Diagnostic différentiel des causes d’avortement en espèce équine La jument présente une activité sexuelle saisonnière de jours longs, la saison de reproduction s’étend du début du printemps au début de l’automne (soit de Mars à Octobre avec une activité maximale de Mai à Août). La durée de la gestation en espèce équine est de 11 mois (305 à 370 jours, avec une moyenne de 338 à 340 jours après l'ovulation). La jument donne généralement naissance à un seul poulain. Des cas de gémellité peuvent se produire mais ils présentent de nombreux risques pour la santé de la jument et pour le développement des deux jumeaux. Aussi les éleveurs et les vétérinaires mettront tout en œuvre pour éviter ces cas de gémellité (BLANCHARD et al., 2007). A. Définition d’un avortement Un avortement correspond à une interruption de la gestation avant que le fœtus ne soit capable de mener une vie libre extra-utérine (BLANCHARD et al., 2007). Afin de le distinguer des cas de mortalité embryonnaire précoce (1 à 40 jours de gestation), il est défini comme l’expulsion d’un fœtus mort ou non viable entre le 40ème jour et le terme de la gestation (LAUGIER & TAPPREST, 2012). Les avortements sont d’origine infectieuse ou non infectieuse. Les avortements à plus de quatre mois de gestation ne représentent qu’une partie des troubles de la gestation (environ 40% des interruptions de gestation) (BLANCHARD et al., 2007). Cependant les avortements survenant entre le 40ème jour et le 4ème mois de gestation sont rarement remarqués car le fœtus et ses annexes sont de petite taille et passent souvent inaperçus dans la litière ou dans les pâtures. Par ailleurs, la plupart des avortons faisant l’objet d’une déclaration et d’un examen nécropsique sont âgés de 6 à 11 mois (BLANCHARD et al., 2007). 23 B. Attitude à adopter face à un avortement (LAUGIER et al., 2009) Lorsque l’avortement se produit, le placenta, les liquides fœtaux, le fœtus doivent être considérés comme des sources potentielles de contamination pour les autres équidés jusqu’à ce qu’une éventuelle origine contagieuse ait été éliminée. Lorsque d’autres juments gestantes sont présentes sur les lieux, l’avortement doit être considéré comme un problème d’élevage et traité comme tel. Etant donné qu’aucun des signes macroscopiques observés sur le fœtus ou le placenta n’est spécifique d’un agent étiologique, le praticien doit faire appel à des analyses de laboratoire afin d’établir la cause de l’avortement. L’ensemble des commémoratifs doit accompagner les prélèvements expédiés au laboratoire. Les informations suivantes doivent au minimum être recueillies et fournies : - Les conditions de vie de la jument et son passé reproducteur (gestations avec ou sans dystocie, avortement, affection utérine, etc…) - Le stade de gestation auquel s’est produit l’avortement - Le nombre de fœtus - Si d’autres femelles gestantes sont en contact avec la jument - Si d’autres cas d’avortement sont recensés dans l’écurie - L’historique de l’effectif déclarant l’avortement : les protocoles de vaccination, les antécédents pathologiques et les mouvements de chevaux Les prélèvements doivent être réalisés et envoyés sous 24 heures au laboratoire d’analyse afin de limiter les altérations liées au phénomène d’autolyse. Les meilleurs échantillons sont : le fœtus et le placenta accompagnés d’un écouvillon utérin de la jument. Ils doivent être placés dans un emballage étanche et sous régime du froid positif (+4°C). S’il n’est pas possible d’acheminer le fœtus entier au laboratoire, une autopsie doit être réalisée sur place et les échantillons suivants doivent être transmis : l’estomac ligaturé, le foie, les poumons, les reins, la rate, les glandes surrénales, le placenta et les liquides présents dans l’utérus. L’ANNEXE 1 présente des recommandations concernant la démarche que doit suivre le vétérinaire praticien afin d’établir le diagnostic étiologique d’un avortement. Cette fiche a été rédigée par les membres du Laboratoire d’Etudes et de Recherches en Pathologie Equine (LERPE-ANSES) (LAUGIER et al., 2009). La démarche décrite encadre largement le protocole plus spécifique du RESPE qui sera décrit ultérieurement. 24 C. Etiologie des avortements équins 1. Avortements d’évolution aiguë ou chronique La majorité des avortements en espèce équine est liée à une altération de la fonction placentaire. Certains avortements surviennent très brutalement, d’une manière qui pourrait être qualifiée « d’aiguë » alors que d’autres sont moins subits et évoluent sur un mode clinique de type « chronique » (BLANCHARD et al., 2007). Dans la première catégorie d’évolution, peut-être cité en exemple l’avortement provoqué par l‘herpèsvirus équin de type 1 (EHV-1) qui survient de façon aiguë sans aucun prodrome apparent. Le deuxième type d’avortement, d’évolution plus chronique, peut être illustré par l’exemple des gestations gémellaires ou des infections mycosiques et bactériennes. La jument présente alors des symptômes avant la survenue de l’avortement. Dans la quasitotalité de ces cas le fœtus meurt in utero. Pour certaines affections le fœtus peut être expulsé vivant mais il ne sera pas viable au-delà de quelques jours (BLANCHARD et al., 2007). 2. Causes courantes d’avortement en espèce équine Il est possible d’établir un diagnostic étiologique pour environ 60% des avortements constatés dans l’espèce équine (BLANCHARD et al., 2007). Les principales causes d’avortements sont regroupées dans le TABLEAU 1. 25 Cause Etiologie Herpèsvirose (Rhinopneumonie) Herpèsvirus EHV-1 ou EHV-4 Avortement équin streptococcique Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Placentite équine à bactéries nocardioformes Bactéries du genre Nocardia Gram +, filamenteuses Autres avortements bactériens Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Aspergillus fumigatus Allescheria boydii Mucor spp. Affection ascendante primaire Avortement mycosique Leptospirose Anémie Infectieuse Equine Avortement à protozoaires (piroplasmose) Leptospira interrogans, sérotypes : pomona, canicola, autumnalis Rétrovirus Babesia caballi Theileria equi Signes cliniques Avortement tardif ou naissance d’un poulain faible (septicémie, virémie) Peut causer des épidémies d’avortements (1 à 90% des juments gestantes de l’effectif) Sporadique Plutôt à moins de 200 jours de gestation Sporadique Avortement tardif avec lésions étendues du placenta Symptômes fréquents (ex : lactation prématurée) Sporadique Plutôt à moins de 200 jours de gestation Sporadique Avortement tardif Rare Avortement tardif Parfois suivi de symptômes pendant 1 à 3 semaines Rare Avortement après 5 mois de gestation Parfois suite à un stress marqué Ictère prononcé et hémoglobinurie Artérite Virale Equine Togavirus Gémellité Insuffisance placentaire 65 à 70% des jumeaux sont mort-nés Rares épidémies avec des formes respiratoires, systémiques et abortives Avortement avec des signes cliniques modérés à absents Plutôt après 8 mois de gestation Œdème mammaire prématuré souvent présent avant l’avortement Gestation dans le corps utérin Insuffisance placentaire Plutôt après 8 mois de gestation TABLEAU 1 : PRINCIPALES ETIOLOGIES DES AVORTEMENTS EN ESPECE EQUINE. D’APRES (BLANCHARD ET AL., 2007). 26 D. Prévalence des différentes causes d’avortement en France Une étude réalisée au Laboratoire de pathologie équine (LERPE) de l’ANSES à Dozulé (Calvados) entre 1986 et 2009 à partir de fœtus autopsiés a permis d’estimer la prévalence de certaines causes d’avortement en France (LAUGIER & TAPPREST, 2012). Les principales étiologies d’avortement chez la jument ont été étudiées à partir de 1 726 avortons et de leurs enveloppes fœtales transmis au laboratoire pour autopsie et examens complémentaires. L’origine de l’avortement a pu être déterminée dans 74,4 % des cas (n=1284). Une étiologie non infectieuse a été identifiée dans 26,8 % des cas (n=462) (FIGURE 1). Parmi les avortements d’origine non infectieuse, la torsion excessive du cordon ombilical était l’étiologie la plus fréquente (n=276 soit 59,7 % des avortements non infectieux) et l’hypoplasie des villosités choriales représentait la deuxième cause (17,7 %). Venaient ensuite les malformations congénitales létales (7,1 %). Les causes d’insuffisance placentaire autres que l’hypoplasie des villosités (gémellité, hydropisie des enveloppes, décollement prématuré du placenta et gestation dans le corps placentaire) étaient moins fréquentes. 7% 9% 3% 2% 1,50% Torsion du cordon 55% Hypoplasie des villosités choriales Malformation congénitale Gémellité Hydropisie des enveloppes 22,50% Gestation dans le corps utérin Décollement placentaire FIGURE 1: REPARTITION DES CAUSES NON-INFECTIEUSES D’AVORTEMENT EN ESPECE EQUINE D’APRES (LAUGIER & TAPPREST, 2012). Les infections fœto -placentaires (n=822) représentaient 47,6 % de l’ensemble des cas et 68,4 % des avortements d’origine déterminée . Les causes infectieuses d’avortement étaient dominées par des infections bactériennes (79,4 % des avortements infectieux) devant les infections virales (15,7 %) et fongiques (1,8 %). Dans 25 cas (3,0 %), aucun agent pathogène spécifique n’a pu être identifié malgré la présence de lésions suggérant la présence d’un agent infectieux. Dans cette étude les EHV étaient responsables de la totalité des avortements d’origine virale identifiés. 27 2% 3% 15% 80% Origine bactérienne Origine virale (EHV-1 et 4) Origine fongique Agent pathogène non identifié FIGURE 2 : REPARTITION DES CAUSES INFECTIEUSES D’AVORTEMENT EN ESPECE EQUINE D’APRES (LAUGIER & TAPPREST, 2012). L’étiologie infectieuse d’origine bactérienne est majoritaire. Les bactéries les plus régulièrement en cause (Streptocoques et Leptospires) sont à l’origine d’avortements sporadiques. Les avortements d’origine virale sont la deuxième cause d’avortement infectieux en espèce équine. En revanche, les infections virales identifiées (EHV et plus rarement le virus de l’Artérite Virale Equine) sont potentiellement très contagieuses et par conséquent peuvent entraîner des pertes économiques majeures pour la filière équine. C’est pourquoi nous avons choisi de mener notre étude sur l’EHV, à l’origine d’un nombre conséquent d’avortements chez la jument. II. Présentation des Herpèsvirus Equins de type 1 et 4 La rhinopneumonie équine est un terme général couramment utilisé pour désigner plusieurs entités pathologiques contagieuses des équidés. Les agents responsables sont les herpèsvirus équins de type 1 et de type 4 (EHV-1 et EHV-4). L’infection par l’EHV-1 ou l’EHV-4 est caractérisée par une maladie primaire du tractus respiratoire d’une gravité variable selon l’âge et le statut immunitaire de l’animal infecté. Suite à une virémie, l’EHV peut provoquer des affections plus sévères telles que des avortements, des mortalités périnatales ou des atteintes nerveuses (ALLEN, 2008). 28 A. Etiologie 1. Présentation et classification des herpèsvirus équins Les herpèsvirus (Herpesviridae) sont une famille de virus à ADN responsables de maladies affectant à la fois les humains et les animaux. Cette famille se divise en trois groupes (α, β et γ), cette classification est faite selon leurs hôtes, leurs cycles reproductifs et la structure de leur génome (FORTIER et al., 2009). Ces virus sont parmi les plus anciens et les plus « adaptés » à leurs hôtes. Les équidés peuvent être infectés par 9 herpèsvirus différents (5 chez les chevaux, 3 chez les ânes et un chez les zèbres). Cinq herpèsvirus appartenant à deux sous-familles différentes peuvent infecter le cheval: les alpha-herpèsvirus : EHV-1, EHV-3 et EHV-4 ; et les gammaherpèsvirus : EHV-2 et EHV-5 (PRONOST et al., 2011). Ces cinq virus présentent des tropismes et des pouvoirs pathogènes différents : - EHV-1 : forme abortive, forme nerveuse ou forme respiratoire de la rhinopneumonie - EHV-2 : forme respiratoire, conjonctivite (considéré comme peu pathogène) - EHV-3 : agent de l’exanthème coïtal (affection vénérienne) - EHV-4 : forme respiratoire de la rhinopneumonie, et de façon plus sporadique forme abortive et nerveuse - EHV-5 : affection pulmonaire nodulaire profonde Un même individu peut être infecté par plusieurs virus ce qui peut entraîner des recombinaisons génomiques et donc l’apparition de nouvelles souches recombinantes. Des recherches menées au Japon en 2005 ont permis d’étudier la possibilité de recombinaison génomique entre l’EHV-1 et l’EHV-4. Il s’agit là du premier cas rapporté de recombinaison entre Alpha-herpèsvirus infectant une même espèce (PAGAMJAV et al., 2005) . 2. Structure des herpèsvirus équins Les herpèsvirus présentent une structure commune (FIGURE 3). Ils possèdent une molécule d’ADN linéaire double-brin de grande taille enfermée dans une cage protéique icosaédrique appelée capside. Cette capside est responsable des phénomènes d’hypersensibilité et est enveloppée dans une couche protéique appelée tégument. Le tégument contient à la fois les protéines virales et les ARNm. Ces protéines servent lors de la primo-infection car elles apportent tout ce dont le virus a besoin, dans un premier temps, pour se répliquer. Le tégument est bordé d’une bicouche lipidique appelée enveloppe et l’ensemble de ces structures constitue le virion (WELLER, 2006). 29 FIGURE 3 : SCHEMA DE LA STRUCTURE D’UN HERPESVIRUS. D’APRES (RESCHKE, 1994) L’enveloppe est de type tri-lamellaire, elle est acquise lors de la sortie des virions à la fin du cycle lytique et provient de la membrane cellulaire. Les spicules exprimés à la surface de l’enveloppe virale sont des glycoprotéines courtes codées par le virus, elles servent lors de la reconnaissance de l’hôte. La fragilité de cette enveloppe limite la survie des herpèsvirus dans l’environnement et les rend sensibles à l’action des désinfectants (BANDEL, 2007). 3. Génome viral Le génome des herpèsvirus de type 1 et 4 se compose d’une molécule d’ADN double brin linéaire de grande taille (140 à 150 kpb) qui présente une même structure (FIGURE 4) : une séquence unique longue (UL) est reliée à une séquence unique courte (US) et associée à des séquences répétées inversées (TRS/IRS) (TRS pour Séquence à Répétition Terminale/IRS pour Séquence de Répétition Interne). Grâce à la présence des séquences TRS/IRS les composants des génomes peuvent s'inverser les uns par rapport aux autres générant ainsi différents isomères génomiques (VAN MAANEN, 2002). Le génome viral code pour 76 gènes, 63 sont localisés sur la région UL, 4 sur la région US et 9 dans les régions de répétions inverses (IRS) (THIRY, 2006). 30 FIGURE 4 : SCHEMA D’UN HERPESVIRUS ET SON GENOME UL : SEQUENCE UNIQUE LONGUE – US : SEQUENCE UNIQUE COURTE – IR : REPETITION INTERNE – TR : REPETITION TERMINALE. D’APRES (THIRY, 2006) Il existe entre 55% et 84% d’homologie entre les séquences ADN de l’EHV-1 et de l’EHV-4 selon les gènes concernés. Le plus important pourcentage d’homologie protéique a été observé pour des protéines impliquées dans l’attachement cellulaire, l’entrée et la dissémination de cellule en cellule (REED & TORIBIO, 2004). Il faut donc connaître ces séquences communes et choisir des amorces spécifiques à chacun des virus pour établir un diagnostic par PCR. 4. Cycle viral La connaissance du cycle des herpèsvirus équins est nécessaire à la compréhension de la pathogénie de ces virus et permet notamment d’introduire le phénomène de latence (FIGURE 6). Lorsque l’hôte entre en contact avec une particule virale, celle-ci se fixe et s’introduit rapidement dans les cellules épithéliales de l’appareil respiratoire. Les glycoprotéines de membrane virale se lient aux récepteurs de surface de la cellule hôte et permettent alors la fusion de l’enveloppe virale et de la membrane cellulaire (REED & TORIBIO, 2004). 31 L’infection débute suite à cette fusion et le virion pénètre dans la cellule. Une fois dans le cytoplasme, le virus est transporté vers le noyau via le cytosquelette. La capside entre alors en contact avec la membrane nucléaire, et le génome viral est libéré. La transcription de l’ADN débute lorsque le génome viral atteint le nucléoplasme (SPECTER et al., 2009). Au niveau moléculaire la réplication du génome des Herpèsvirus est régulée en trois phases (REED & TORIBIO, 2004): - Une phase « très précoce » avec transcription des gènes IE (IE pour Immediate Early) codant des protéines activatrices. La cellule-hôte passe alors en phase de synthèse et apporte au virus tout ce dont il a besoin pour se répliquer et activer la seconde phase - Une phase « précoce » avec transcription des gènes E (E pour Early) codant des protéines enzymatiques dont une ADN polymérase virale, une thymidine kinase, des protéines de reconnaissance et de liaison. Grâce à ces protéines le virus peut se répliquer et activer les gènes de structure. - Une phase « tardive » avec transcription des gènes L (L pour Late) codant des composants protéiques de la capside et des glycoprotéines de l’enveloppe. Le génome de ces virus interagit avec les protéines TIF et VHS (Virus Host Shut-off) activent la transcription des gènes viraux et inhibent la synthèse des protéines propres à la cellule hôte. La régulation de ces gènes se fait en cascade (FIGURE 5), dès lors qu’un groupe de gènes est activé il déclenche à son tour l’activation du groupe suivant et exerce un rétrocontrôle négatif sur le précédent (REED & TORIBIO, 2004). FIGURE 5 : GENES INTERVENANT DANS LE CYCLE REPLICATIF DES HERPESVIRUS D’APRES (BANDEL, 2007) Les premières capsides matures apparaissent en moyenne 6 heures après le début de l’infection virale (REED & TORIBIO, 2004). La maturation des virions débute suite à l’interaction de la capside mature avec la partie interne de la membrane cellulaire. La formation de particules virales enveloppées résulte de cette interaction. (VAN DE WALLE et al., 2008). La réplication du virus permet ainsi la circulation des virions au sein de l’organisme mais elle permet aussi à l’agent pathogène de démarrer un nouveau cycle après une période de latence. Ce phénomène de latence sera développé ultérieurement. 32 FIGURE 6: CYCLE DE REPLICATION DES HERPESVIRUS D’APRES (PAILLOT ET AL., 2008) Le virus se fixe aux récepteurs (1) et fusionne avec la membrane cellulaire ou (2) entre par phagocytose. La nucléocapside est alors libérée dans le cytoplasme et attient le noyau cellulaire via les microtubules (3). L’ADN viral passe dans les complexes de pores nucléaires. (4) Dans le noyau la transcription de gènes IE débute. Les protéines IE sont synthétisées dans le cytoplasme (5). Elles déclenchent la transcription des gènes E (6) puis la synthèse des protéines E (7), qui déclenchent à leur tour la réplication de l’ADN viral (8). Les protéines L sont ensuite synthétisées dans le cytoplasme (9) et migrent dans le noyau pour former la capside (10). Une copie de l’ADN viral est encapsidé (11). Les protéines du tégument et la nouvelle nucléocapside migrent vers l’extérieur du noyau (12) puis passent la membrane cytoplasmique (13) avant d’être libérés (14). 33 B. Epidémiologie La rhinopneumonie équine est endémique dans les populations de chevaux domestiques, elle est présente dans de nombreux pays (ALLEN, 2008). 1. Epidémiologie clinique La prévalence des infections dues aux EHV-1 et 4 a été estimée dans plusieurs pays. Une étude menée aux Etats-Unis, au sein d’une population non vaccinée, a permis de mettre en évidence la présence d’anticorps anti EHV-1 chez 26% des juments et 12% des poulains testés, alors que 99% des juments et des poulains présentaient des anticorps antiEHV-4 (GILKERSON et al., 1999). Une étude menée dans un abattoir au Nord-Est de l’Angleterre a permis d’isoler l’EHV-1 par PCR à partir des nœuds lymphatiques bronchiques de 88% des 40 chevaux étudiés. La proportion de chevaux sains porteurs de ce virus sous forme latente est estimée à plus de 60%. Ces individus seraient une source majeure de contamination pour les autres chevaux de leur effectif (EDINGTON et al., 1994). 2. Epidémiologie analytique Les infections à EHV-1 et EHV-4 sont ubiquistes dans la population équine. Ces deux virus représentent les principales causes de maladies virales de l’appareil respiratoire supérieur chez le cheval (ALLEN, 2008). Les infections à EHV-1 et 4 présentent un caractère saisonnier et seraient plus fréquentes en période hivernale (THIRY, 2006). Ces virus circulent dans le monde entier avec des réservoirs générés par les cas de primoinfection chez les jeunes chevaux (sécrétions respiratoires), la réactivation et la ré-excrétion virale chez les adultes (avortons, sécrétions respiratoires) assurant une transmission horizontale et verticale dans les élevages (FORTIER et al., 2003). Les poulains âgés de 30 jours peuvent présenter des taux positifs d’anticorps anti-EHV-1. Cette découverte indique une possible infection dès les premiers jours de vie par les sécrétions nasales de la jument. La parturition ou la lactation représentent des évènements stressants pouvant causer la réactivation d’un virus latent chez la jument. Après infection du poulain, l’EHV-1 peut ensuite se transmettre à d’autres poulains par contact rapproché, avant ou après le sevrage (GILKERSON et al., 1999a). Les jeunes chevaux sevrés sont souvent infectés par un herpèsvirus dans leur première année de vie. Des épidémies de rhinopneumonie sont également observées chez les chevaux de course de plus de deux ans lorsqu’ils sont rassemblés en centre d’entraînement (THIRY, 2006). Il a été suggéré que les juments gravides et les poulains sont une population réservoir pour le virus EHV-1. Le contrôle de l’infection par l’EHV-1 chez les poulains, dès leur plus jeune âge, est donc un élément clé pour contrôler la maladie (GILKERSON et al., 1999b). 34 Les animaux hébergeant le virus sous sa forme latente excrètent le virus par intermittence, contribuant ainsi à la réémergence et la dissémination de la maladie (EDINGTON et al., 1994). Ces mécanismes sont bien connus chez l’homme (herpès simplex, virus de la varicelle-zona) et chez d’autres espèces animales (virus IBR chez les bovins, herpèsvirus félin intervenant dans le coryza du chat) (FORTIER et al., 2003). C. Pathogénie du virus et formes cliniques Chez le cheval, les virus EHV sont transmis par inhalation ou contact direct avec des matières contaminées telles qu’un fœtus avorté ou son placenta. La propagation de l’infection dans l’hôte implique de nombreux types cellulaires (REED & TORIBIO, 2004). 1. Primo-infection et propagation du virus La pathogenèse de l’infection par le virus EHV est clairement décrite après infection expérimentale. En l’absence d’anticorps au niveau des muqueuses, les cellules épithéliales des cavités nasales et nasopharyngées sont infectées par l’EHV-1 (KYDD et al., 1994b). Les antigènes viraux ainsi que des virus néoformés sont détectables dans l’épithélium respiratoire et les ganglions lymphatiques sous-mandibulaires, rétropharyngés et bronchiques dans les 12 à 24 heures suivant l’infection (VAN DER MEULEN et al., 2000). Quand les leucocytes sont infectés et la virémie établie, le virus EHV se propage rapidement (FIGURE 7). La dissémination de l’infection se fait par trois voies : le sang, le système nerveux et la transmission de cellule à cellule par l’intermédiaire de ponts cytoplasmiques (mettant ainsi le virus à l’abri des systèmes de défense immunitaires cellulaires et humoraux) (VAN DER MEULEN et al., 2006). La circulation de leucocytes infectés à travers les systèmes sanguin et lymphatique entraîne la dissémination du virus jusqu’à des zones distantes du site d’infection initial telles que les voies respiratoires profondes, l’utérus gravide ou le système nerveux central (THIRY, 2006). Le virus peut alors provoquer différentes formes de la maladie. L’endothélium des vaisseaux sanguins est infecté entre le 2ème et le 4ème jour post-infection (KYDD et al., 1994a). 35 FIGURE 7 : PATHOGENIE DE LA RHINOPNEUMONIE EQUINE D’APRES (THIRY, 2006) 2. Pathogénie des différentes formes cliniques Différentes formes cliniques de la rhinopneumonie peuvent survenir selon le statut de l’animal infecté, son système immunitaire et la souche virale concernée. Trois formes cliniques sont décrites : une forme respiratoire, une forme abortive et une forme nerveuse. Plusieurs de ces formes peuvent être observées chez un même animal (REED & TORIBIO, 2004). a. Forme respiratoire Les herpèsvirus de type 1 et 4 peuvent tous deux être à l’origine d’une forme respiratoire aigüe accompagnée d’un syndrome fébrile lors de la primo-infection. Dans la majorité des cas ces infections sont dues à l’EHV-4 et plus rarement à l’EHV-1 (VAN MAANEN, 2002). Les maladies respiratoires causées par les EHV-1 et 4 ne sont pas différenciables. Elles débutent toutes deux par une infection du tractus respiratoire supérieur après une incubation de 2 à 7 jours (REED & TORIBIO, 2004). 36 Chez les jeunes chevaux cette affection prend la forme d’une maladie respiratoire aigüe accompagnée d’un syndrome fébrile, caractérisée par une rhinopharyngite et une trachéobronchite qui peut rapidement se répandre dans un groupe de chevaux exposés et non immunisés (CRABB & STUDDERT, 1995). Chez les animaux adultes l’infection respiratoire induite par les EHV-1 et 4 est généralement légère ou subclinique (THIRY, 2006). Dans des cas d’infections primaires sans complications, une guérison clinique complète est observée en une à deux semaines. Une infection de ce type due à l’EHV1 ou 4 n’altère pas le pronostic vital et sportif de l’animal. Cependant des surinfections bactériennes sont possibles. La gravité de la maladie dépend de l’âge du cheval et du niveau d’immunité préexistant dû à une exposition naturelle ou à une vaccination (TIMONEY, 2006). La majorité des chevaux se remettent spontanément de l’infection en quelques semaines, sans traitement et ne gardent aucune séquelle. Cependant la majorité d’entre eux (60 à 75%) resteront porteurs du virus à vie, sous forme latente (ALLEN, 2006). Lors de réinfections ou de réactivations ultérieures les symptômes sont généralement modérés et l’excrétion virale moins importante et plus courte (VAN MAANEN, 2002). b. Forme nerveuse L’infection par l’EHV peut induire une maladie nerveuse sous la forme d’une myéloencéphalopathie. Dans la plupart des cas cette maladie résulte d’une infection par certaines souches d’EHV-1 et plus rarement par l’EHV-4 (CRABB & STUDDERT, 1995). Lors d’une épidémie le nombre d’animaux touchés varie : d’un cas isolé jusqu’à des cas multiples évoluant sur plusieurs semaines avec une mortalité allant jusqu’à 90% (THIRY, 2006). Au cours de la virémie cellulaire, le virus se propage aux vaisseaux sanguins du système nerveux central (FIGURE 8). La réplication du virus dans les cellules endothéliales, associée à des réactions d’hypersensibilité de type III, provoquerait des lésions vasculaires et modifieraient la perfusion du tissu nerveux (WILSON, 1997). Les foyers de nécrose seraient la cause primaire du dysfonctionnement du tissu nerveux (PRONOST et al., 2011). 37 FIGURE 8 : PATHOGENIE DE LA MYELOENCEPHALOPATHIE A EHV D’APRES (THIRY, 2006) Suite à une incubation d’environ une semaine, des symptômes nerveux (parésie, ataxie, paralysie ascendante) apparaissent brutalement. D’autres symptômes peuvent être associés tels qu’une hypotonie de la queue, de la vulve ou du pénis et une paralysie de la vessie et du rectum. Cette myélite s’accompagne d’une hyperthermie dans environ 50% des cas. Une encéphalite peut se manifester par de la cécité, un port anormal de la tête et une paralysie des nerfs crâniens (PUYALTO-MOUSSU et al., 2002). L’évolution classique est une détérioration sur 2 à 4 jours suivie d’une phase de stabilisation et d’une amélioration graduelle sur plusieurs semaines, voire plusieurs mois (PUYALTO-MOUSSU et al., 2002). Les chevaux gravement atteints évoluent en quelques jours vers une paralysie complète puis décèdent ou doivent être euthanasiés pour raisons éthiques (THIRY, 2006). Ces quinze dernières années une augmentation du nombre de cas de formes nerveuses de l’EHV-1 a été observée. Après l’analyse de 109 échantillons provenant de foyers d’infection par l’EHV-1 avec différentes origines géographiques (Amérique du Nord, Australie et Europe), l’incidence des signes neurologiques de la maladie a été estimée à 45% (NUGENT et al., 2006). L’émergence de souches neuropathogènes de l’EHV-1 a conduit à l’étude de l’origine génétique de la neuro-pathogénicité de ces souches. 38 Une enquête épidémiologique plus récente menée en France entre 2002 et 2009 démontre clairement que, contrairement à ce que les travaux précédents laissaient supposer, le déterminisme génétique moléculaire du pouvoir pathogène neurologique du virus EHV-1, n’est pas simple. Plusieurs facteurs doivent être pris en considération et d’autres études doivent être entreprises pour expliquer le phénotype neuropathogène ou non, du virus EHV-1 (PRONOST et al., 2010). La prise en charge des chevaux atteints d’encéphalomyélite est basée sur des mesures d’isolement, sur un environnement sain et sur l’apport de soins palliatifs (PUYALTO-MOUSSU et al., 2002). Lors de suspicion d’une forme nerveuse de la rhinopneumonie au sein d’un élevage, il est primordial d’isoler l’animal et de respecter des mesures d’hygiène strictes afin de limiter le risque d’avortement herpétique pour les poulinières de l’élevage. c. Forme abortive et maladie néonatale L’incidence des cas d’avortement liés à l’EHV-1 est bien documentée pour le Royaume-Uni. Entre 1988 et 1997, les avortements à EHV-1 ou 4 représentaient 6,5% des avortements équins recensés par les laboratoires (SMITH et al., 2003). Entre 2006 et 2010 les avortements à EHV représentaient en moyenne 13,5% (8 à 19%) des avortements équins recensés par les laboratoires anglais (BUTLER et al., 2011). Les formes abortives de l’EHV représentent des pertes économiques notables pour la filière de l’élevage. Ces avortements peuvent être sporadiques ou dans certains cas, épizootiques. L’infection peut avoir pour origine la réactivation d’un virus latent hébergé par la jument ou la contamination respiratoire à partir d’un autre animal de l’effectif ou d’un fœtus contaminé (MUMFORD et al., 1994). Le virus est transporté vers le tractus génital lors de la virémie (FIGURE 9). Une fois que le virus atteint l’utérus il infecte les cellules endothéliales des vaisseaux utérins provoquant alors une sévère vascularite endométriale. Cette vascularite est à l’origine de thromboses multifocales et de zones d’infarcissement des cotylédons placentaires (FIGURE 10). Ces lésions entraînent la séparation prématurée du placenta provoquant la mort du fœtus par anoxie. (ALLEN et al., 1999). Le virus peut être transmis au fœtus induisant alors de multiples lésions macroscopiques et microscopiques (ALLEN et al., 1999). 39 FIGURE 9 : PATHOGENIE DE L’AVORTEMENT DU A L’EHV-1 ET 4 D’APRES (THIRY, 2006) L’avortement peut survenir 9 à 120 jours après l’infection (DOLL & BRYANS, 1962). L’expulsion du fœtus et de ses annexes s’effectue, en général, sans que la jument ne présente de symptômes (THIRY, 2006). La majorité des avortements dus aux herpèsvirus équins se produisent entre le 7ème et le 11ème mois de gestation (ALLEN et al., 1999). Cependant certaines juments infectées très tardivement lors de leur gestation n’avortent pas. Elles donnent alors naissance à un poulain vivant infecté in utéro et présentant généralement une pneumonie diffuse d’origine virale. La sévérité de cette atteinte et les infections bactériennes secondaires provoquent une détresse respiratoire sévère en quelques jours (CRABB & STUDDERT, 1995). A ce jour aucun traitement n’a permis d’éviter l’issue fatale de l’infection du fœtus par l’EHV (OSTLUND, 1993). 40 FIGURE 10 : TRANSMISSION DE L’EHV-1 DE LA JUMENT AU FŒTUS – D’APRES (PAILLOT ET AL., 2008). 1 : DISSEMINATION DE L’EHV-1 DEPUIS LES LYMPHOCYTES MATERNELS JUSQU’A L’INTERFACE UTERO PLACENTAIRE ET CONTAMINATION DES LYMPHOCYTES FŒTAUX – 2 : DISSEMINATION SANGUINE DE L’EHV-1 JUSQU’A L’ENDOMETRE INDUISANT LESIONS DE VASCULARITE. L’ANOXIE PROVOQUE UNE SEPARATION PREMATUREE DU PLACENTA. La plupart des avortements à EHV-1 et 4 sont des cas isolés, cependant ces virus sont régulièrement mis en cause dans des cas d’avortements multiples (« abortion storm »). Dans ces épizooties plusieurs juments sont touchées et il s’agit la plupart du temps des primipares (DENNIS, 1997). Les antigènes viraux ne sont plus décelables chez la jument 48 heures après son avortement (CRABB & STUDDERT, 1995). 41 3. Excrétion Le virus EHV infecte en premier lieu les voies respiratoires supérieures puis il se multiplie dans les cellules de la muqueuse et du tissu lymphatique du tractus respiratoire provoquant ainsi leur nécrose. La multiplication intense du virus est accompagnée d’un jetage nasal et d’une sécrétion virale abondante pendant trois semaines (CRABB & STUDDERT, 1995). Une érosion tissulaire résultant de la nécrose cellulaire et de la réponse inflammatoire apparaît au cours de la première semaine suivant l’infection et entraîne l’excrétion du virus (REED & TORIBIO, 2004). Les chevaux sont contagieux pour toutes les formes, aussi bien la forme respiratoire, abortive que nerveuse. La contamination se fait par contact direct entre les chevaux, à partir de sécrétions nasales, des lochies, du placenta, de l’avorton et par voie indirecte à partir des personnes, des équipements et des matériaux contaminés (FRIDAY et al., 2000). Les animaux atteints sont d’avantage contagieux pendant la première semaine post-infection. La transmission virale par aérosols reste possible pendant 14 jours pour un animal naïf (TIMONEY, 2006). 4. Portage latent, réactivation et ré-excrétion Après une infection primaire ou une réinfection, les herpèsvirus sont capables de persister à l’état latent (sous forme d’ADN circulaire non intégré dans les cellules qu’ils ont infectées). Cette phase est stratégique pour la survie du virus dans l’organisme. Les sites de latence des EHV sont les ganglions trigéminaux et les tissus lymphoïdes associés à l’appareil respiratoire (SLATER et al., 1994). La persistance du virus chez des chevaux infectés en l’absence de signes cliniques constitue un réel risque pour l’élevage. La réactivation du virus à l’état latent peut être à l’origine de maladie pour l’animal porteur mais également pour les animaux qui sont en contact (THIRY, 2006). Suite à une réactivation le virus, qui se trouvait à l’état latent, peut débuter de nouveaux cycles de multiplication dans les cellules épithéliales des voies respiratoires (FIGURE 11). La réactivation peut induire tous les signes cliniques de la maladie, incluant une forme respiratoire ou nerveuse, un avortement et une séroconversion (SLATER et al., 1994). La réactivation d’un herpèsvirus latent chez une jument gestante peut provoquer un avortement tardif chez cette même jument ou chez d’autres juments gestantes se trouvant en contact à ce moment-là (TIMONEY, 2006). 42 Cette réactivation peut être provoquée par différents stimuli tels qu’un traitement immunosuppresseur, une maladie intercurrente, le sevrage, la castration, un transport ou un changement d’environnement (TAOUJI et al., 2002). Expérimentalement la réactivation peut être produite par l’injection de fortes doses de glucocorticoïdes (EDINGTON et al., 1985) ou de cyclophosphamide (AZMI, 1995). Entre deux épisodes de réactivation, les leucocytes infectés par des virus latents ne sont pas reconnus par le système de défense immunitaire. Aucun virus infectieux ne peut alors être isolé et aucun antigène viral n’est exprimé dans les cellules infectées par un virus latent (PRONOST et al., 2011). Seul l’ARN viral LAT (latent-associated transcript) est transcrit à partir du gène IE. La fonction exacte des LATs n’est pas encore bien comprise (PRONOST et al., 2011). FIGURE 11 : REGULATION DE LA LATENCE DES HERPESVIRUS EQUINS D’APRES (BORCHERS ET AL., 2006) 43 5. Transmission Les infections dues aux EHV peuvent se répandre très rapidement dans un effectif de chevaux. La transmission par les aérosols est importante, elle est dépendante de la quantité de virus excrétée et des conditions climatiques. La réactivation d’un EHV-1 latent chez la jument est maintenant considérée comme une des explications des avortements herpétiques. Le virus peut ensuite être transmis à d’autres juments en contact avec le fœtus, les membranes, les fluides fœtaux, du matériel ou des personnes contaminées (CRABB & STUDDERT, 1995). 6. Immunité La compréhension de la réponse immunitaire spécifique du virus joue un rôle essentiel dans le diagnostic de la maladie et dans l’évaluation des nouvelles stratégies de vaccination. L’immunité induite après une infection par un EHV est de courte durée et une infection peut se produire tous les 3 à 6 mois dans la vie d’un cheval. Une faible immunité par réaction croisée entre les deux types d’EHV se met en place après une infection primaire. Cette protection croisée augmente significativement au fur et à mesure des réinfections. Les anticorps neutralisants diminuent de manière significative la durée et l’importance de l’excrétion virale depuis les voies respiratoires (ALLEN & BRYANS, 1986). Malgré la présence d’un titre élevé en anticorps après des vaccinations répétées, les juments gestantes peuvent développer une virémie et avorter suite à une infection par un EHV (SMITH et al., 1992). L’immunité développée par les juments suite à un avortement semble être de plus longue durée que celle développée suite à une forme respiratoire. Sur le terrain il est rare d’observer plusieurs avortements herpétiques consécutifs sur une même jument. Aucun lien n’a pu être fait entre le stade de gestation ou le taux d’anticorps neutralisants et l’incidence des avortements induit par le virus (WILSON & PUSTERLA, 2010). III. Forme abortive et néonatale de l’herpèsvirose équine Dans cette partie, nous nous intéresserons plus particulièrement à la forme abortive et néonatale de l’herpèsvirose équine que nous avons choisi d’étudier au sein de la population Française. Les caractéristiques des avortements herpétiques seront rappelées avant de détailler les méthodes diagnostiques et prophylactiques utilisées. A. Expression clinique et diagnostic différentiel 44 A RETENIR Les avortements herpétiques équins: - sont provoqués suite à une infection ou une réactivation d’un EHV-1 ou 4 - surviennent entre une semaine et quatre mois après l’infection - se produisent tardivement dans la gestation (entre le 7ème et le 11ème mois) - ne sont généralement pas accompagnés de symptômes avant l’avortement ni de complications - donnent naissance à un fœtus mort ou à un poulain faible qui ne survit pas au-delà des premiers jours - sont potentiellement contagieux pour les autres équidés de l’élevage Les avortements herpétiques équins ne présentent donc pas des caractéristiques permettant de les différencier facilement des autres causes d’avortement en espèce équine. Lors d’un avortement tardif il faudra donc établir un diagnostic différentiel entre différentes causes d’avortements pouvant affecter l’espèce équine (EVANS, 2008). Parmi les causes non-infectieuses d’avortement tardif il faudra considérer les causes suivantes : - Défaut placentaire - Stress maternel - Gémellité Parmi les causes infectieuses d’avortement tardif il faudra considérer les agents suivants: - Streptococcus equi subsp. zooepidemicus - Escherichia coli - Staphylococcus aureus - Pseudomonas spp - Artérite Virale Equine - Infection fongique - EHV-1 ou 4 Lorsqu’une jument donne naissance à un poulain faible présentant des signes d’atteintes respiratoires il faudra établir un diagnostic différentiel entre les causes suivantes : - Septicémie - Syndrome de détresse respiratoire aigüe - Syndrome de malajustement néonatal - Isoérythrolyse néonatale - Dysmaturité - Malformation fœtale - Forme néonatale de l’herpèsvirose équine B. Lésions associées à la forme abortive de l’EHV 45 Certaines lésions observées lors d’avortements herpétiques permettent parfois d’orienter le diagnostic du praticien en l’absence d’analyse sérologique ou PCR. Des lésions de thrombose et des foyers de nécrose de l’endomètre sont fréquemment observés lors d’avortement herpétiques. Les annexes fœtales sont souvent œdématiées et ictériques. Le chorion présente des plaques de villosités surélevées de couleur rouge-brune et le liquide amniotique est de couleur jaune paille. Le fœtus présente souvent un ictère modéré et des pétéchies multiples sur les muqueuses (SMITH et al., 2004). Les avortements précoces (survenant à moins de 6 mois de gestation) sont caractérisés par une autolyse fœtale sévère. Dans les cas d’avortements tardifs plusieurs types de lésions macroscopiques sont observés : de l’œdème sous-cutané, un excès de liquide pleural, de l’œdème pulmonaire, une splénomégalie, des nécroses hépatiques multifocales. Les lésions histopathologiques sont surtout caractérisées par une nécrose des bronchioles et une hépatite associée à des corps d’inclusions intranucléaires acidophiles (VAN MAANEN, 2002). FIGURE 12 : FŒTUS ISSU D’UN AVORTEMENT HERPETIQUE TARDIF D’APRES (BLANCHARD ET AL., 2007) Les poulains infectés par l’EHV qui naissent vivants sont faibles et léthargiques. Ils présentent le plus souvent une lymphopénie, une hypoxémie et une détresse respiratoire sévère (ALLEN, 2003). Dans les cas de mortalité néonatale, les lésions concernent principalement le système respiratoire avec de l’atélectasie, une pneumonie interstitielle et de l’œdème pulmonaire. Des zones de nécrose diffuse du thymus sont parfois observées, elles sont associées à une raréfaction des lymphocytes thymiques et spléniques (VAN MAANEN, 2002). 46 C. Diagnostic Les lésions décrites précédemment peuvent permettre d’orienter le diagnostic mais aucune d’entre elles n’est spécifique des avortements herpétiques. Le diagnostic est d’abord clinique et épidémiologique puis il doit être confirmé par des examens de laboratoire. 1. Diagnostic direct Le virus ou ses constituants (antigènes, génome) peuvent être recherchés dans les sécrétions, les tissus infectés et les leucocytes. a. Immunofluorescence Cette technique est réalisée sur des coupes d’organes congelés, cet examen est donc indiqué lors des nécropsies. Les tissus sont mis en contact avec des anticorps marqués à la fluorescéine qui vont reconnaitre spécifiquement les antigènes viraux et s’y fixer. La fluorescence de l’échantillon révèle donc la présence d’antigènes viraux (BANDEL, 2007). b. Isolement viral L’isolement viral par mise en culture cellulaire (à partir d’organes, de LCR ou de sang) est la méthode de référence, mais le délai de réponse est long. L’isolement et l’identification du virus se font par culture cellulaire. La lignée cellulaire RK-13 (pour Rabbit Kidney) est fréquemment utilisée pour l’EHV-1 (BANDEL, 2007). c. Polymérase Chain Reaction (PCR) Il existe de nombreuses variantes de la technique d’amplification génique mais le principe de la méthode reste le même. Il consiste à amplifier un acide nucléique cible à l’aide d’amorces (petits brins d’ADN spécifiques du virus recherché). Cette réaction de synthèse d’ADN in vitro est rendue possible par l’utilisation d’une enzyme spécifique : la polymérase (PRONOST et al., 2011). La détection des EHV-1 et 4 peut être réalisée de façon simultanée et sur tous types de prélèvements (PRONOST et al., 2011). Les techniques de PCR assurent une détection des virus en 24 à 48 heures, plus rapide que les quatre à huit jours requis par les techniques de culture cellulaire. Leur sensibilité, leur spécificité et leur rapidité ont été aussi améliorées (DIALLE et al., 2007). Les herpèsvirus constituent un cas particulier du fait de leur possible état de latence et plusieurs tests de PCR (PCR ciblant l’ADN et RT-PCR ciblant les LATs) sont nécessaires pour caractériser l’état infectieux ou latent du virus (PRONOST et al., 2011). 47 2. Diagnostic indirect Il s’agit de tests sérologiques visant à détecter la présence d’anticorps spécifiques par différentes méthodes : ELISA, Fixation du complément ou Neutralisation virale. Ces techniques reposent sur l’augmentation significative du taux d’anticorps dans le sérum entre les phases d’infection et de convalescence (ALLEN, 2008). Les anticorps fixant le complément apparaissent rapidement (1 à 4 semaines postinfection) et persistent 3 à 4 mois. Les anticorps séro-neutralisants apparaissent plus tardivement et peuvent persister jusqu’à un an après l’infection. Les anticorps vaccinaux ne sont pas différentiables des anticorps liés à une infection. De ce fait seule la séroconversion (augmentation des titres viraux sur des sérums prélevés à 15 jours d’intervalle) permet réellement de conclure à une infection virale (PUYALTO-MOUSSU et al., 2002). D. Traitement Les avortements provoqués par l’EHV se produisent généralement avec une expulsion rapide et complète du fœtus et du placenta. Seuls quelques rares cas de rétention placentaire ou d’endométrite ont été rapportés. La plupart du temps, aucun traitement de la jument n’est nécessaire. Cependant il est recommandé de laver la queue et les membres pelviens à l’aide de désinfectants afin de détruire les éventuels virus présents dans cette région (VAN MAANEN, 2002). Les poulains atteints doivent recevoir des soins de nursing habituels tels que la mise en place de mesures de réchauffement, l’apport d’une nourriture et de médicaments appropriés. Il n’existe pas de traitement spécifique. Seul un traitement symptomatique doit être préconisé. En dépit de toutes les mesures entreprises, le traitement des poulains s’avère infructueux dans la majorité des cas. Du fait des atteintes étendues des organes parenchymateux et lymphoïdes et des surinfections bactériennes fréquentes, ces poulains sont souvent condamnés en quelques jours (ALLEN & BRYANS, 1986). E. Pronostic Chez les juments ayant avorté, le virus est rapidement éliminé du tractus génital. Dans des cas d’infections simples, sans complications associées, la fertilité des juments infectées ne semble pas modifiée. Les juments ayant avorté suite à une herpèsvirose ne sont pas immunisées contre un éventuel avortement herpétique lors des gestations suivantes (OSTLUND, 1993). Cependant les récidives sont rares (CRABB & STUDDERT, 1995). Une excrétion nasale du virus est possible dans de tels cas d’avortement aussi il est déconseillé de mettre les juments à la saillie pendant les 30 jours suivant l’avortement (OSTLUND, 1993). 48 Le pronostic vital des poulains infectés in utero par le virus est très sombre. Aucun traitement ne semble pouvoir améliorer ce pronostic (OSTLUND, 1993). F. Prophylaxie Différents vaccins contre l’EHV-1 et l’EHV-4 sont utilisés depuis plus de 40 ans. Bien que les populations de chevaux aient été vaccinées durant des dizaines d’années, des épidémies d’avortement infectieux liées aux EHV sont toujours observées à travers le monde (VAN MAANEN et al., 2001). Ces virus ont la faculté d’échapper aux défenses immunitaires et de demeurer à l’état latent, la vaccination ne peut donc pas assurer une protection complète et durable de ces viroses. Aussi, en l’absence d’une vaccination efficace, la prophylaxie sanitaire demeure le meilleur moyen de protection contre la maladie. La mise en place de mesures de défenses sanitaires permet d’assurer un contrôle satisfaisant de ces viroses et a permis une réduction significative des troubles cliniques, et en particulier de l’incidence des avortements (PRONOST et al., 2011). 1. Prophylaxie sanitaire Dans les cas d’épizootie de forme respiratoire de la rhinopneumonie des mesures strictes doivent impérativement être mises en place pour diminuer le risque d’apparition de formes nerveuses ou abortives. Les animaux touchés doivent être isolés et aucun cheval ne doit quitter l’élevage jusqu’à trois semaines après la disparition des derniers symptômes. Les écuries doivent être correctement nettoyées et le matériel désinfecté (WILSON & PUSTERLA, 2010). Les mesures zootechniques et sanitaires mises en place consistent principalement à contrôler les effectifs entrants (examen vétérinaire lors d’introduction, quarantaine, séparation des classes d’âges…) et à juguler et circonscrire rapidement tout début de foyer. Il faut rappeler à ce sujet que les fœtus issus d’un avortement herpétiques constituent de véritables « bombes » infectieuses dans les élevages et qu’il faudra prendre des mesures strictes vis à vis des locaux (box de poulinage), du matériel et du personnel et pratiquer rapidement un isolement de la jument ayant avorté. 49 2. Prophylaxie médicale a. Les différents vaccins Différents types de vaccins contre les EHV existent (FIGURE 13) : les vaccins vivants atténués, les vaccins inactivés, les vaccins sous-unité et les vaccins obtenus par génie génétique. FIGURE 13 : DIFFERENTS TYPES DE VACCINS DISPONIBLES CONTRE L’EHV-1 ET 4 (D’APRES PAILLOT ET AL., 2008) 1-VACCIN ATTENUE 2- VACCIN INACTIVE 3- VACCIN SOUS-UNITES 4-VACCIN OBTENU PAR GENIE GENETIQUE - Vaccins vivants atténués Les premiers vaccins atténués étaient préparés à partir d’une souche virale d’EHV-1 atténuée sur culture cellulaire de hamster et administrés par voie intranasale. Ces vaccins, utilisés jusqu’en 1979, diminuaient l’incidence des avortements mais s’avérèrent incapables de diminuer l’incidence globale de la maladie. De plus la souche vaccinale était susceptible de provoquer des avortements dans certains cas (FAYET, 2000). Bien que les vaccins vivants atténués soient susceptibles de développer une meilleure réponse immune de type cellulaire que les vaccins inactivés, leur utilisation demeure limitée ou interdite dans de nombreux pays (dont la France) du fait des risques élevés de retour à la virulence (FAYET, 2000). 50 - Vaccins inactivés Les premiers vaccins à base d’EHV-1 tués ont été introduits dans les années 1950-1960, ils étaient préparés à partir de tissus provenant de poulains ou de hamsters infectés. Ces préparations étaient inappropriées à la vaccination en raison d’une faible immunogénicité et de forte incidence de réactions secondaires (DOLL & BRYANS, 1963). Aujourd’hui, les vaccins à base de virus EHV-1 complets inactivés sont largement utilisés (TABLEAU 2). Ces vaccins provoquent une augmentation des taux d’anticorps chez les poulains et les juments gravides après 1 ou 2 immunisations. Au cours d’une étude plus récente, le développement d’une réponse humorale après 1 ou 2 immunisations avec un vaccin conventionnel à base de virus EHV-1 et 4 complets inactivés a été confirmé. Une durée d’immunité de 6 mois contre les signes cliniques respiratoires de la maladie a été rapportée après vaccination avec ce type de vaccin (MINKE et al., 1999). La réalité sur le terrain est beaucoup moins optimiste. Une étude réalisée en Australie a porté sur la séroconversion de 159 juments et de 101 poulains après 3 vaccinations avec un vaccin EHV-1 et 4 inactivés. Moins de 30% des juments et 50% des poulains ont répondu à la vaccination (FOOTE et al., 2002). - Vaccins sous-unités Les glycoprotéines du virus EHV-1 sont essentielles pour la reconnaissance des récepteurs du virus à la surface de la cellule cible ainsi que l’infection de ces cellules. Ces protéines sont donc des candidats naturels pour la fabrication de vaccins sous-unitaires contre ce virus (ALLEN et al., 1992). L’isolement de ces glycoprotéines a permis le développement de nouveaux vaccins mieux tolérés et entraînant une réponse sérologique plus importante. Cependant ces vaccins, tout en diminuant l’excrétion virale après épreuve, ne peuvent empêcher la virémie (HANNANT et al., 1993). 51 - Vaccins obtenus par génie génétique En 1989, Guo et al. incluent les gènes codant les glycoprotéines gP13 et gP14 dans un Poxvirus. Testé sur un modèle hamster, ce vaccin induit une séroconversion et une protection vis-à-vis d’une épreuve virulente (GUO et al., 1989). Dans un modèle murin, l’injection d’un plasmide ADN codant la glycoprotéine D et d’un Baculovirus renfermant le gène codant cette même glycoprotéine de l’EHV-1, a entraîné une protection clinique vis-à-vis d’une épreuve virulente (RUITENBERG et al., 2000). La vaccination ADN stimule efficacement une réponse à base d’anticorps chez le cheval, la réponse à médiation cellulaire n’a pas encore été étudiée dans ce contexte de vaccination. La protection conférée par ce type de vaccin nécessite une étude plus approfondie (PAILLOT, 2007). Nom déposé Valence(s) Pneumequine ® EHV-1 Equiffa ® EHV-1 Grippe équine EHV-1 EHV-4 Duvaxyn 1,4 ® Type de vaccin Inactivé Usage indiqué par le fabricant Forme respiratoire Laboratoire Mérial Inactivé Forme respiratoire Mérial Inactivé Forme respiratoire et avortements Fort Dodge TABLEAU 2 : VACCINS ACTUELLEMENT DISPONIBLES EN FRANCE CONTRE LES EHV-1 ET 4 D’APRES (PETIT, 2011) b. Difficultés de mise en place d’une stratégie vaccinale Au sein des élevages l’objectif est d’éviter la première contamination des chevaux et de limiter ainsi les risques de portage latent et de réactivation lors de situations stressantes. Il est donc recommandé de vacciner les poulains dès l’âge de 6 mois et de renouveler ces vaccinations tous les 6 mois en moyenne (ALLEN, 2003). Aucun vaccin actuel n’est en mesure d’inhiber totalement la virémie, d’empêcher le phénomène de latence ni l’excrétion virale (VAN DER MEULEN, 2006). Néanmoins, la vaccination régulière des effectifs permet de limiter la durée, la gravité des symptômes et les complications (FORTIER et al., 2003). Chez la jument gestante, le but de la vaccination est de limiter au maximum la virémie afin d’empêcher le virus d’atteindre les enveloppes fœtales et d’induire des lésions vasculaires responsables d’avortement (FAYET, 2000). 52 Une stratégie vaccinale intéressante consiste à primo-vacciner les juments avant leur première saillie (deux injections à un mois d’intervalle), puis d’effectuer des rappels au 5-7 et 9ème mois de gestation (ZIENTARA, 1993). La vaccination régulière de l’ensemble de l’effectif, incluant les étalons et les jeunes chevaux, est également à recommander. Les programmes vaccinaux ne constituent qu’un complément aux mesures de prophylaxie sanitaire. En matière de troubles respiratoires, la vaccination réduit la sévérité des troubles cliniques ainsi que la durée et l’intensité de l’excrétion virale. En matière de protection contre l’avortement à EHV on ne peut escompter une protection strictement individuelle mais une réduction importante du nombre d’avortements. Une étude menée sur deux groupes de juments gestantes montre que l’incidence des cas d’avortement est significativement réduite chez les juments vaccinées (1 cas sur 5 juments) par rapport au groupe contrôle (4 cas sur 4 juments) (HELDENS et al., 2001). En France, comme dans beaucoup d’autres pays, la vaccination contre la rhinopneumonie n’est pas systématique. Si la vaccination des juments gestantes est effectuée régulièrement dans la quasi-totalité des grands haras, cette vaccination est encore peu pratiquée chez les chevaux de course et pratiquement pas dans les centres équestres. Les raisons de ce peu d’intérêt pour la vaccination contre l’herpèsvirose sont multiples : aucune obligation règlementaire, une efficacité souvent limitée, un coût supplémentaire et des rappels fréquents. Les éleveurs s’interrogent souvent sur l’innocuité des vaccins utilisés. Les vaccins inactivés n’ont pas d’effets indésirables sur la gestation et peuvent donc être utilisés à tout moment de la gestation (sauf dans les 3-4 semaines suivant la fécondation en raison du stress lié à l’acte vaccinal). Cette étude des moyens de prophylaxie disponibles à ce jour nous rappelle que la vaccination est une aide nécessaire pour lutter contre les avortements herpétiques mais elle n’est pas suffisante pour assurer une protection efficace et durable. Des mesures de prévention sanitaires doivent être mises en œuvre dans les élevages en plus de la vaccination afin de limiter le risque d’épizootie d’avortement. Une surveillance à l’échelle nationale est également nécessaire afin de suivre la progression de ces avortements. Un réseau d’épidémiosurveillance (le RESPE) a été créé en France afin de répondre à cette demande. 53 IV. Le RESPE et le sous-réseau « Avortements » Dans cette partie nous parlerons du RESPE et de son fonctionnement afin de présenter les moyens de surveillance mis en place pour l’étude des avortements équins sur le territoire français. Les données de ce réseau sont la base de l’étude épidémiologique menée sur les avortements à EHV. A. Présentation du RESPE Le RESPE, « Réseau d’Epidémio-Surveillance en Pathologie Equine » est le premier réseau de ce type en Europe. Il repose sur un réseau de plus de 400 vétérinaires sentinelles répartis sur le territoire français. Issu du travail bénévole de la commission « Maladies Infectieuses et parasitaires » de l’Association Vétérinaire Equine Française (AVEF) et actif depuis 1999, ce réseau a permis certaines avancées scientifiques et de terrain, mais à l’époque ses moyens ne lui permettaient pas de répondre suffisamment rapidement et efficacement aux attentes croissantes de la filière équine. L'épizootie d’artérite virale équine au cours de l'été 2007 a démontré la nécessité de disposer d'informations fiables, chiffrées et disponibles très rapidement. Il était alors important de développer une structure réactive capable de suivre, d'illustrer et d'éditer des comptes-rendus de l'évolution des situations épidémiologiques (CHAFFAUX, 2009). L’intérêt du RESPE est reconnu, tant au niveau local pour les vétérinaires praticiens, qu’au niveau régional, national et international pour tous les acteurs de la filière équine et pour les responsables en charge de missions sanitaires dans cette espèce. Cependant, son identité était parfois mal perçue. C’est pourquoi le RESPE est devenu le 08 avril 2008, un réseau indépendant (association loi 1901) de veille et d'alerte sanitaire en pathologie équine, au service de l'ensemble de la filière (CHAFFAUX, 2009). B. Objectifs du RESPE Ce réseau a un quadruple objectif (CHAFFAUX, 2009): 1) Assurer une veille sanitaire des maladies équines en particulier celles présentant une contagiosité importante, occasionnant des pertes économiques majeures ou présentant un risque en santé publique. 54 Cette veille sanitaire est assurée au travers de cinq sous réseaux : - le réseau « Syndrome respiratoire aigu » (créé en 1999 – suivi de la grippe équine, de la rhinopneumonie forme respiratoire et de l’artérite virale forme respiratoire) - le réseau « Myopathie atypique » (créé en 2002) - le réseau « Syndrome nerveux » (créé en 2003 – suivi de la rhinopneumonie forme nerveuse, de la maladie de West Nile et de la maladie de Borna) - le réseau « Gourme » (créé en 2006) - le réseau « Avortements » (créé en 2009 – suivi de l’artérite virale équine, de la rhinopneumonie sous sa forme abortive et de la leptospirose) 2) Développer un réseau de compétences vétérinaires permettant une collecte rapide d’informations épidémiologiques 3) Alerter les autorités sanitaires, les socioprofessionnels et les pouvoirs publics le cas échéant 4) Gérer les crises sanitaires hors maladies réglementées grâce à un réseau d’alerte et la constitution d’une cellule de crise. Le réseau est une aide pour les praticiens et leurs clients par le diagnostic et la gestion des affections surveillées, notamment par la prise en charge des analyses de laboratoire. Il devrait permettre, grâce aux études de prévalence et d’incidence, la mise en place et le contrôle de prophylaxies sanitaires et médicales raisonnées. La représentativité des données du RESPE et leur intérêt pour l’ensemble de la filière passent par une sensibilisation et une participation renforcée des différents acteurs de ce réseau. Une sensibilisation des vétérinaires est indispensable afin de rappeler la nécessité de développer le réseau des vétérinaires- sentinelles sur l’ensemble du territoire (CHAFFAUX, 2009). En effet le RESPE fonctionne grâce à plus de 400 vétérinaires sentinelles répartis sur 87 départements mais il existe une hétérogénéité importante concernant la couverture géographique du réseau. Par exemple certains départements, comme l’Ardèche ou la Haute Marne, ne compte pas de vétérinaires sentinelles alors que d’autres, comme le Calvados, l’Orne et la Manche, possèdent de nombreux vétérinaires sentinelles. De plus, le réseau couvre uniquement 40% de la population équine recensée sur le territoire français (DAIX, 2012). Pour pallier ces limites, le RESPE s’est fixé deux objectifs : 1) évoluer vers une meilleure répartition des vétérinaires sentinelles sur le territoire 2) améliorer l’épidémio-surveillance et assurer une meilleure représentativité 55 C. Fonctionnement du RESPE (VALON, 1999) Depuis 2008, l'organisation du RESPE répond à celle d'une association classique. Il existe un conseil d’administration comportant 7 sièges vétérinaires et 6 sièges socioprofessionnels, secondé par un bureau constitué de 2 représentants vétérinaires (Association des Vétérinaires Equins Français : AVEF) et 2 représentants socioprofessionnels (Fédération Nationale du Cheval et Syndicat des Éleveurs de Pur-Sang). Cette parité souhaitée entre vétérinaires et socioprofessionnels permet des prises de décisions aux bénéfices de l'ensemble de la filière. L'association possède également un conseil scientifique et technique. Il se compose de personnes ayant des compétences en pathologie équine ou en épidémiologie. Sa mission est de veiller à la cohérence de la politique scientifique de l’association. La majorité des analyses biologiques sont effectuées dans le cadre du réseau par le laboratoire partenaire, le laboratoire Frank Duncombe (Calvados). Les Ecoles Vétérinaires, ainsi que certaines universités, participent également au fonctionnement du réseau (investigations complémentaires sur des cas identifiés par les vétérinaires sentinelles, examens nécropsiques, analyses épidémiologiques…) en fonction des compétences et des spécialités de chacun. Les vétérinaires sentinelles sont le cœur du système en assurant la collecte des informations. Les données épidémiologiques sont collectées grâce à l’activité de plus de 400 vétérinaires sentinelles (VS) qui sont des vétérinaires praticiens et volontaires. Tout vétérinaire peut devenir sentinelle, en signant pour cela la charte d’adhésion (ANNEXE 2). Enfin, la forte implication des socioprofessionnels de toutes les filières dans le RESPE devrait permettre de sensibiliser les propriétaires et les détenteurs de chevaux à une démarche de prévention fondée sur ce réseau d’épidémio-surveillance. 56 D. Moyens de communication Lors de suspicion, les vétérinaires sentinelles préviennent le RESPE par le biais d’une fiche de déclaration. Ils effectuent alors des prélèvements selon un protocole clairement établi et diffusé par le RESPE. Ces derniers sont adressés à un laboratoire compétent avec une fiche de commémoratifs standardisée disponible sur le réseau du RESPE. Depuis 2011, la «Déclaration en ligne » est obligatoire et s'effectue sur le site Internet du RESPE. Chaque vétérinaire dispose pour ce faire d'un identifiant et d'un mot de passe personnels. Le RESPE assure donc la centralisation des informations épidémiologiques et la diffusion de l’information aux membres du réseau (FIGURE 14). Les laboratoires analysent les prélèvements et restituent ensuite les résultats au RESPE ainsi qu'aux vétérinaires sentinelles. La diffusion des informations épidémiologiques du RESPE est effectuée par l’envoi d’un bulletin électronique régulier à tous les vétérinaires sentinelles ainsi qu’aux autres membres. Le site Internet du RESPE (www.respe.net) permet un accès aux informations épidémiologiques (éditées dans les bulletins, communiqués, actualité nationale et internationale et bilans annuels) ainsi qu’un accès aux conseils pratiques (modalités de prélèvement des échantillons, l’information des propriétaires) (VALON, 1999). De plus, les praticiens peuvent consulter des fiches informatives concernant d’autres affections équines telles que les maladies virales, bactériennes, métaboliques ou toxiques (CHAFFAUX, 2009). FIGURE 14 : CIRCULATION DES INFORMATIONS AU SEIN DU RESPE (D’APRES WWW.RESPE.NET) 57 E. Le sous-réseau « Avortements » Une enquête conduite en 2008 par le réseau REFErences (associant l’Institut de l’élevage et les Haras nationaux) a fait ressortir une faible productivité des élevages équins français malgré des taux de fécondation satisfaisants chez les juments mises à la reproduction (permis par les avancées techniques de la gynécologie équine). Ces résultats sont malheureusement « détériorés » par des taux d’avortement importants (en moyenne 7,5%) ainsi que par des taux de mortalité néonatale élevés (en moyenne 5%). Des taux similaires sont rapportés par les enquêtes conduites à l’étranger. Pour améliorer la productivité des élevages français il fallait donc diminuer ces pertes durant la gestation et les premiers jours de vie (CHAFFAUX, 2009). Comme le montre le bilan des causes d’avortement établi par le Dr J.Tapprest, à partir des fœtus autopsiés au LERPE (ANSES-Dozulé), l’étiologie infectieuse d’origine bactérienne est majoritaire (LAUGIRE & TAPPREST, 2012). Les bactéries les plus régulièrement en cause sont à l’origine d’avortements sporadiques. En revanche, les infections virales identifiées (virus de la rhinopneumonie et de l’artérite équine) sont potentiellement très contagieuses et par conséquent peuvent entraîner des pertes économiques majeures pour la filière. Cette situation normande semble identique à celle décrite dans d’autres pays et ne semble pas évoluer (CHAFFAUX, 2009). C’est dans ce contexte que le collège « Avortement » a vu le jour en 2008 au sein du RESPE. Le premier objectif que s’est fixé le sous-réseau est la surveillance des avortements infectieux contagieux de la Jument d’importance sanitaire, économique et/ou: c’est-à-dire la rhinopneumonie sous sa forme abortive (EHV-1 et EHV-4), l’Artérite virale et la Leptospirose, zoonose considérée comme maladie émergente (TRUFFERT, 2009). Le but était alors de pouvoir évaluer l’incidence et la répartition géographique sur le territoire national, de ces trois infections abortives. Par ailleurs, la récolte des informations épidémiologiques et cliniques devait permettre de préciser certains facteurs de risque de ces pathologies. L’ensemble des données collectées serait une aide déterminante pour la gestion des crises et pour la prise de décision, en cas d’épizootie (CHAFFAUX, 1999). 58 DEUXIEME PARTIE : Enquête épidémiologique des avortements herpétiques équins en partenariat avec le RESPE I. Motivations et objectifs de l’étude La rhinopneumonie est une maladie répandue en France, fréquemment rencontrée par les vétérinaires et bien connue des éleveurs. Les cas de forme respiratoire de la rhinopneumonie sont surveillés par le réseau SRA (Syndrome Respiratoire Aigu) du RESPE depuis 1999. Les formes nerveuses, quant à elles, font partie des affections suivies par le réseau « Syndrome nerveux». Cependant jusqu’en 2008 il n’existait pas de réseau de surveillance s’intéressant aux avortements équins, il existait donc peu de données épidémiologiques concernant les formes abortives de l’herpèsvirose. Or la prévention de nouvelles épizooties est un point clé de la lutte contre l’affection et passe par une meilleure connaissance de la situation épidémiologique sur le territoire. Cette amélioration des connaissances n’est possible que si toutes les informations sont centralisées et analysées à l’échelle nationale. Dans ce but, le réseau « Avortements » a été créé au sein du RESPE. Ce travail s’appuie sur les données du sous-réseau « Avortements », il a pour objectif d’estimer la prévalence des avortements herpétiques équins dans les élevages français et de mettre en évidence des facteurs de risque des avortements à EHV. Après une présentation du cadre de l’étude, des méthodes de collecte et d’analyse des données, nous présenterons une étude descriptive des cas d’avortements recensées par le réseau sur cette période. Les résultats de l’analyse statistique des facteurs de risque et des facteurs protecteurs vis-à-vis des avortements à EHV seront ensuite présentés et discutés. II. Sujets, matériels et méthodes A. Définition du cadre de l’étude 1. Durée de l’étude Dans le cadre de cette thèse, et du partenariat avec le RESPE, nous avons exploité les données recueillies entre le 1er Janvier 2009 et le 31 Décembre 2011 par le sous-réseau « Avortements ». Nous avons choisi de nous intéresser à la plus longue période possible : les premières données ont été recueillies fin 2008, nous avons considéré que les premières semaines de l’étude correspondaient à une période de test avant la finalisation du protocole et un fonctionnement optimal du réseau. Aussi nous avons décidé de commencer notre étude début 2009. La fin de la période d’étude a été fixée au 31 Décembre 2011 afin de pouvoir travailler sur trois années complètes et de pouvoir en déduire des statistiques annuelles. 59 2. Définition des critères d’inclusion Les cas pris en compte dans cette étude correspondent aux avortements déclarés au RESPE entre 2009 et 2011 et pouvant être inclus dans le protocole « Avortement » (cf. ANNEXE 3). Il s’agit, pour cette étude, des juments ayant avorté après 45 jours de gestation ou ayant donné naissance à un poulain étant décédé dans les 3 premiers jours de vie. Le fœtus et/ou le placenta et/ou des lochies utérines doivent avoir été prélevés pour que le cas soit intégré dans la base de données et la fiche de déclaration doit être complétée par le vétérinaire praticien. 3. Définition des cas positifs et des cas témoins Dans le cadre de cette étude des avortements herpétiques équins les cas positifs et les cas témoins sont définis selon les critères suivants : - un groupe « positif » : qui regroupe toutes les juments déclarées au RESPE, ayant avorté entre 2009 et 2011 et pour lesquelles au moins un prélèvement est positif (faiblement à fortement) à l’analyse PCR EHV-1 ou EHV-4. Ce résultat d’analyse peut avoir été obtenu à partir du fœtus, du placenta ou de l’écouvillon utérin. - un groupe « témoin » : qui regroupe toutes les juments déclarées au RESPE, ayant avorté pendant cette période et pour lesquelles tous les prélèvements disponibles sont négatifs aux analyses PCR EHV-1 et EHV-4. B. Déclaration des avortements Les déclarations d’avortement sont des documents renseignés par les vétérinaires sentinelles qui travaillent sur le terrain et transmettent les informations au RESPE. 1. Protocole de déclaration (ANNEXE 3) Le protocole « Avortement » rappelle les critères d’inclusion du sous-réseau. Les cas de mortalité embryonnaire précoce ne sont pas pris en compte. Les poulains vivants à la naissance mais présentant des malformations congénitales graves connues comme létales sont également exclus de cette étude. Les interruptions de gestation pour lesquelles ni le fœtus, ni les annexes ne sont retrouvés ne peuvent pas être pris en considération, cependant la présence de lochies au col de la jument peut suffire à l’inclusion du cas. Lors du recueil d’un cas la fiche de déclaration et les prélèvements standardisés doivent être transmis en vue d’une analyse. 60 2. La fiche de déclaration (ANNEXE 4) La fiche de déclaration comporte une première partie consacrée à l’identification du praticien, du propriétaire et de la jument. La seconde partie permet de caractériser le foyer et l’effectif global (type d’utilisation des équidés, antécédents pathologiques au sein de l’effectif, mouvements de chevaux, etc…). Une troisième partie est dédiée à la jument ayant avorté, elle permet de décrire les signes cliniques observés ainsi que les antécédents médicaux et reproducteurs de la jument. Enfin une dernière partie est consacrée à l’avorton et aux prélèvements effectués : nombre, nature et observations. 3. La déclaration en ligne (ANNEXE 5) Depuis 2011 les déclarations d’avortement sont effectuées en ligne sur le site « www.respe.net. » et seuls les vétérinaires sentinelles sont autorisés à déclarer un cas. Le formulaire de déclaration a été légèrement modifié lors de sa mise en ligne. Par exemple le nouveau questionnaire ne demande pas de renseignements concernant la vaccination de l’ensemble de l’effectif. Il est également moins détaillé pour les signes cliniques de la jument et de son passé reproducteur. Lorsque les déclarations étaient transmises par écrit un grand nombre d’informations n’étaient pas renseignées. L’utilisation d’un formulaire de déclaration en ligne permet maintenant de faciliter la procédure pour les praticiens mais elle permet également de rendre un certain nombre de réponses obligatoires. Le but est de réduire ainsi le nombre de données manquantes. C. Les prélèvements et analyses effectués 1. Les prélèvements Différents prélèvements peuvent être effectués sur la jument : le placenta, un écouvillon utérin (pour un avortement récent) et le sérum ou sang prélevé sur tube sec. Des prélèvements du fœtus sont également exploités. Il s’agit des reins, du foie, des poumons et du thymus. Le fœtus entier peut aussi être prélevé pour autopsie (ANNEXE 3). Les autres chevaux de l’effectif ne sont pas prélevés (sauf dans le cas d’un autre avortement pouvant être inclus dans l’étude). 61 2. Les analyses de laboratoire Les prélèvements doivent être envoyés rapidement et sous régime du froid positif (+4°C) pour les recherches par PCR. En cas d’envoi différé, les prélèvements d’organes et de tissus doivent être congelés. Le prélèvement intra utérin est réalisé au moyen d’un écouvillon placé dans un tube stérile sans milieu de transport mais humidifié (NaCl) si besoin. Les prélèvements réalisés sont transmis au laboratoire accompagnés d’une fiche de renseignements. Les colis sont envoyés par le praticien au LFD (Laboratoire Frank Duncombe – Calvados) qui effectue la totalité des analyses prévues dans le protocole. Les examens suivants sont proposés et pris en charge systématiquement par le RESPE dans la mesure où le protocole est respecté. Ces examens sont : - La recherche par technique PCR des deux virus responsables des avortements contagieux : l’Herpèsvirus équin (EHV-1 et EHV-4) et le virus de l’Artérite Virale Equine, sur le fœtus, son placenta et un écouvillon utérin - La sérologie leptospirose sur le sang de la jument avortée - La recherche par technique PCR de la leptospirose sur le fœtus et son placenta, si une sérologie leptospirose a été effectuée sur le sang de la jument et que son taux est supérieur ou égal à 1/800 (ANNEXE 3). Pour le diagnostic par PCR des EHV-1 et 4, l’ADN est extrait à partir des différents échantillons à l’aide des kits QIAamp® DNA mini kit conformément aux instructions du fabricant (Qiagen, Coutaboeuf, France). Les amorces utilisées pour l’amplification de l’ADN correspondent à des séquences spécifiques codant les glycoprotéines B des EHV-1 et 4 synthétisées par Proligo (Australie). La solution de travail (TaqMan Universal PCR Master Mix, Applied Biosystems, France) et les amorces spécifiques aux EHV-1 et 4 sont ajoutées au mélange réactionnel avant de procéder à l’amplification. Un cycle seuil est établi pour cette méthode (Ct = 30.5 ± 1) et la limite de détection est estimée à huit copies par réaction (PRONOST et al., 2012). Les autres analyses effectuées sur demande du vétérinaire sentinelle en vue de la recherche d’une autre cause, infectieuse ou non, de l’avortement ne sont pas prises en charge par le RESPE mais les résultats sont intégrés à la base de données. Il s’agit de : - L’autopsie du fœtus ou du poulain La bactériologie réalisée sur les organes du fœtus et le placenta 62 Les analyses effectuées n’étant pas prises en charge par le RESPE peuvent être confiées à d’autres laboratoires (entre autres les Laboratoires Vétérinaires Départementaux et l’ANSES) en spécifiant la demande de transfert au LFD du résultat des analyses prévues par le protocole (EHV, artérite virale équine et leptospirose). Dans ce cas une copie de la fiche de déclaration d’avortement doit accompagner les prélèvements. D. Analyse statistique de la base de données « Avortements » du RESPE 1. Description de l’échantillon de l’étude L’ensemble des déclarations recensées entre 2009 et 2011 ont été saisies sur le logiciel Microsoft Excel® afin de constituer une base de données. Dans un premier temps l’étude sera consacrée à la description des résultats recueillis au cours de ces trois années. Elle visera à décrire et caractériser la population des juments ayant avorté ainsi que les effectifs auxquels elles appartiennent. La prévalence annuelle des trois étiologies contagieuses suivies par le réseau « Avortements » sera calculée (Herpèsvirose, Artérite Virale et Leptospirose). La prévalence annuelle est définie par le nombre de cas positifs recensés en une année au sein de l’échantillon. 2. Etude des facteurs de risques et des caractéristiques des avortements herpétiques équins L’étude analytique a été menée à partir de la base de données « Avortements ». Les analyses statistiques ont ensuite été réalisées en utilisant le logiciel SAS/STAT Software® produit par SAS Analytics® (Statistical Analysis Software). Les facteurs de risque pouvant intervenir dans l’apparition d’un avortement herpétique ont été étudiés. Certaines caractéristiques cliniques et lésionnelles de ces avortements ont également été analysées (FIGURE 15). Les variables qualitatives et quantitatives sont traitées différemment. 63 64 FIGURE 15 : FACTEURS DE RISQUES POTENTIELS ET CARACTERISTIQUES DES AVORTEMENTS A EHV ANALYSES DANS L’ETUDE Remarque : Au cours de nos analyses nous avons choisis de définir des effectifs « à risque » (FIGURE 15). Ces effectifs correspondent aux 148 écuries ayant déclaré un autre avortement ou un cheval malade. Ce critère a été défini afin de pouvoir comparer l’efficacité de la vaccination contre l’EHV dans les effectifs « à risque » avec l’efficacité de la vaccination dans l’ensemble des élevages. a. Analyse des variables qualitatives Pour vérifier si une exposition à un facteur qualitatif donné influe ou non sur le risque d’apparition de la maladie. L’Odds Ratio (OR) est calculé, il correspond au ratio des cotes, les cotes étant les rapports de probabilités d’exposition chez les malades et les témoins (FIGURE 16). En se basant sur un risque de première espèce α égal à 0,05, l’intervalle de confiance à 95% permet de déterminer la significativité d’un OR. Si la valeur 1 est incluse dans cet intervalle de confiance alors la différence entre les deux groupes (positifs et témoins) n’est pas significative. S’il ne contient pas la valeur 1 alors il s’agit soit d’un facteur de risque (OR>1), soit d’un facteur protecteur (OR <1). FIGURE 16 : PRINCIPE DE CALCUL DES ODDS RATIO (OR) ET DES INTERVALLES DE CONFIANCE A 95% b. Analyse des variables qualitatives Un certain nombre des paramètres choisis correspondent à des variables quantitatives. Ces variables donnent lieu à des séries dans notre base de données et ne seront donc pas traitées selon la méthode présentée précédemment. Pour ces variables nous utiliserons des tests de comparaison des moyennes pouvant être appliqués à des séries indépendantes. Pour ce faire nous appliquons la méthode exposée dans le schéma suivant (FIGURE 17). 65 FIGURE 17 : METHODE D’ETUDE STATISTIQUE DES VARIABLES QUANTITATIVES DE L’ETUDE Ces tests permettent de savoir si la distribution et les moyennes de nos deux lots sont significativement différentes. III. Résultats de l’étude A. Description de l’échantillon de l’étude L’ensemble des déclarations d’avortement recensées entre 2000 et 2011 sont décrites selon leurs origines, les caractéristiques des effectifs déclarants et de la jument ayant avorté. 1. Les déclarations Pendant la période d’étude 732 déclarations d’avortements ont été enregistrées par le sous-réseau Avortements du RESPE (format papier ou bien en ligne via Internet). 66 a. Nombre de déclarations au cours de la période d’étude Nombre de déclarations recensées par le RESPE 300 276 250 247 200 209 150 100 50 0 2009 2010 2011 Année FIGURE 18 : EVOLUTION DU NOMBRE DE DECLARATIONS D’AVORTEMENT RECENSEES PAR LE RESPE AU COURS DE LA PERIODE 2009-2011 De façon générale, le nombre de déclarations augmente régulièrement au cours de ces trois années d’étude. Ce nombre de déclarations augmente de 18% entre 2009 et 2010 puis de 12% entre 2010 et 2011 (FIGURE 18). b. Vétérinaires déclarants Au cours de la période d’étude, sur les 418 vétérinaires sentinelles (VS) recensés, 189 ont réalisé au moins une déclaration d’avortement soit environ 45% de l’effectif des VS enregistrés. Les déclarations faites par des VS représentent 92% des déclarations recensées entre 2009 et 2011. D’autre part, 30 vétérinaires n’étant pas vétérinaires-sentinelles du RESPE ont également effectué des déclarations d’avortement entre 2009 et 2010. Ils représentent 8% des déclarations recensées par le RESPE (soit 30 déclarations rédigées par 30 vétérinaires différents). A partir de 2011 les déclarations d’avortement sont faites uniquement en ligne et par des vétérinaires sentinelles. 67 Le nombre d’avortements déclaré par vétérinaire varie entre 1 et 61 au cours de la période étudiée (Q1=1,2 ; médiane=6,9 ; Q3=11,3). Globalement, un petit nombre de vétérinaires déclarent un grand nombre d’avortements tandis qu’un nombre élevé de vétérinaires ne déclarent chacun que peu d’avortements. - 30 vétérinaires sentinelles ont déclaré plus de 5 avortements en 3 ans 79 vétérinaires sentinelles ont déclaré entre 2 et 5 avortements. 80 vétérinaires sentinelles ont déclaré un seul avortement et les 30 vétérinaires non sentinelles ont également déclaré un seul avortement chacun en 3 ans. Les cinq vétérinaires sentinelles ayant déclaré le plus d’avortement entre 2009 et 2011 ont déclaré à eux seuls 20% des avortements recensés. L’un d’entre eux a déclaré jusqu’à 61 avortements sur cette période. Il est à noter que ces vétérinaires sont tous localisés en Basse-Normandie, dans le Calvados. De plus ils travaillent avec l’ANSES qui fournit plus de 65% des déclarations du sous-réseau « Avortements » du RESPE. c. Provenance des déclarations La répartition géographique des 732 déclarations d’avortement a été étudiée. Les résultats sont présentés sur la carte ci-après (FIGURE 19). 68 FIGURE 19 : REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES DECLARATIONS D’AVORTEMENT RECENSEES PAR LE RESPE ENTRE 2009 ET 2011 Les déclarations d’avortement proviennent très majoritairement des départements de l’Orne (61), du Calvados (14) et de la Manche (50) qui composent la région Basse Normandie. Cette région totalise 459 déclarations soit environ 63% des déclarations. Les régions des Pays de Loire et la Bretagne sont en seconde position et représentent 5,6% des déclarations chacune, soit 40 déclarations en trois ans. Cette répartition des déclarations d’avortements se superpose à la répartition des vétérinaires-sentinelles du RESPE sur le territoire Français (ANNEXE 6). 69 2. Les élevages déclarants a. Activité des effectifs Les effectifs déclarant un avortement sont classés en 5 catégories selon leur type d’activité : élevage, centre équestre, centre d’entrainement, sport et autre (qui rassemble essentiellement les chevaux de loisirs). 5% 3% 1% 1% Elevage Centre équestre Entrainement Sport Autre 90% FIGURE 20 : REPARTITION DES DECLARATIONS RECENSEES ENTRE 2009 ET 2011 EN FONCTION DE L’ACTIVITE PRINCIPALE DE L’EFFECTIF AYANT DECLARE L’AVORTEMENT. La répartition des déclarations reste inchangée au cours des trois années de la période étudiée (FIGURE 20). La grande majorité des déclarations, soit en moyenne 90% (89% à 92%) de ces déclarations, proviennent des élevages. Les avortements concernent donc principalement des juments utilisées uniquement en tant que poulinières pour la reproduction. La répartition des poulinières en France permet d’expliquer ce résultat : en effet les juments reproductrices sont généralement regroupées dans les élevages et la proportion de juments gestantes suivies dans des centres équestres ou des écuries de compétition est anecdotique. b. Importance des effectifs Le nombre d’équidés présents sur le lieu d’élevage au moment de l’avortement est renseigné dans 63% des déclarations. 70 2% 14% 37% 1 à 15 16 à 30 14% 31 à 50 51 à 100 16% 17% 101 à 200 201 à 269 FIGURE 21 : REPARTITION DES DECLARATIONS EN FONCTION DE L’EFFECTIF DE L’ELEVAGE DECLARANT UN AVORTEMENT Dans plus de 50% des cas les avortements surviennent dans des effectifs de moins de 30 chevaux (FIGURE 21). c. Antécédents pathologiques au sein de l’effectif Pour 37% des cas enregistrés le praticien a signalé la présence d’au moins un cheval malade dans l’effectif. Dans 26% des cas un seul cheval est déclaré comme étant malade. Dans 11% des cas plusieurs chevaux de l’effectif sont malades, ce nombre varie entre 2 et 10 équidés malades. Seuls 12% des déclarations contiennent une réponse à la question : « nombre de chevaux morts au sein de l’effectif ». Nous pouvons cependant supposer que lorsqu’un (ou plusieurs) cas mortel survient au sein d’un effectif il est systématiquement signalé dans la déclaration. En effet les éleveurs ne manquent pas de communiquer ce type d’information à leur vétérinaire. Au total 25 chevaux répartis dans 14 effectifs différents ont été déclarés morts au cours de ces trois années. Le nombre de chevaux décédés varie entre 1 et 3 selon les élevages. Les propriétaires signalant au moins un autre cas d’avortement dans leur effectif représentent 13,5% des déclarations. Le nombre d’avortement survenus au sein d’un même élevage varie entre 1 et 3. Un ensemble de déclarations se démarque des autres dans la base de données : il s’agit de 6 déclarations d’avortement en provenance d’un même effectif de chevaux de trait. Ces cas ont tous été déclarés dans un intervalle d’un mois, début 2011. Dans cet effectif 93 chevaux sont déclarés malades sur un effectif de 160 équidés, 8 sont décédés et 6 avortements ont été déclarés. Le cas de cette épizootie sera abordé dans la discussion (partie III). Lors de l’étude descriptive des données recueillies nous avons choisi d’écarter ces déclarations qui faussaient les résultats statistiques de par leur taux de morbidité et de mortalité particulièrement élevé. 71 d. Statut vaccinal des effectifs Le questionnaire utilisé à ce jour ne permet pas d’obtenir des renseignements concernant la vaccination des autres équidés de l’effectif et les protocoles utilisés. e. Mouvements de chevaux au sein de l’effectif Nous avons considéré des « mouvements de chevaux » dans l’effectif à partir du moment où le propriétaire a répondu « Oui » à au moins une des deux questions suivantes : - Déplacement de chevaux de l’effectif : oui-non? - Introduction de nouveaux chevaux : oui-non ? Pour 20% des déclarations, des mouvements d’équidés sont rapportés au sein de l’effectif. Cependant il faut prendre en compte que le taux de non-réponse à cette question est de 45%. 3. Les juments concernées a. Race des juments Pour une meilleure lisibilité, les races ont été regroupées dans les catégories suivantes (TABLEAU 3) : Races Catégories Pur-Sang + Autre Que Pur-Sang (AQPS) Trotteur Français + Trotteur Etranger Autres Poneys, Connemara, Haflinger, Highland, Shetland, Pottok, Welsh, Poney Français de Selle SANG Holsteiner, Anglo-Arabe, Arabe, Akhal-Teke, Pur-Sang Arabe, BWP, KWPN SPECTACLE Lusitanien, Brumby, Paint Horse, Pur Race Espagnol, Quarter Horse LOURD ou ANE Mérens, Anes, Percheron, Trait, Shire, Cob CHEVAL DE SELLE Selle Français et Cheval de Selle ONS (Origine Non Spécifiée) Origine Inconnue, Origine non constatée, Origine constatée TABLEAU 3 : LISTE DES DIFFERENTES CATEGORIES DE RACE UTILISEES DANS L’ETUDE PUR SANG TROTTEUR PONEY 72 2% 2% 5% PS 4% TROTTEUR 5% 35% CS PONEY 17% LOURD - ANE SANG ONS 30% SPECTACLE FIGURE 22: REPARTITION DES DECLARATIONS D’AVORTEMENT EN FONCTION DE LA RACE DE LA JUMENT AYANT AVORTE Les proportions des différentes races restent les mêmes au cours des trois années de la période étudiée (FIGURE 22). Trois races se démarquent systématiquement: il s’agit des PurSang, des Trotteurs et des Chevaux de Selle. b. Age des juments FIGURE 23 : REPARTITION DES DECLARATIONS EN FONCTION DE L’AGE DE LA JUMENT AYANT AVORTE Pour cette population, l’âge moyen est d’environ 10,8 ans. Les valeurs extrêmes de cette population sont de 2 ans pour l’âge minimal et 34 ans pour l’âge maximal (FIGURE 23). Ce dernier individu peut correspondre à une valeur atypique dans cette population. Il est recensé en 2010. 73 c. Statut vaccinal des juments Nous avons choisi de considérer que les juments sont « correctement vaccinées » lorsque le dernier rappel vaccinal a été effectué dans les douze derniers mois. Les juments ayant avorté sont, dans la grande majorité des cas, correctement vaccinées contre le tétanos et la grippe équine (respectivement 90 et 94% des juments). En ce qui concerne la vaccination contre l’herpèsvirus équin, 62% des juments ayant fait l’objet d’une déclaration d’avortement sont correctement vaccinées contre l’herpèsvirus équin. Une minorité de juments est vaccinée contre le virus de West-Nile (2 parmi les 130 ayant répondu à cette question). Une jument est également vaccinée contre le virus de la Rage et deux ont reçu des injections d’auto-vaccin contre la Rhodococcose. d. Statut primipare/multipare des juments Pour l’ensemble des déclarations des trois années étudiées, l’information jument primipare/multipare n’est pas renseignée dans 34% des cas. Au sein de cette population 17% des juments sont des primipares. e. Antécédents d’avortement des juments 12% des juments faisant l’objet d’une déclaration ont déjà avorté auparavant. Cependant cette valeur est à interpréter avec précautions car seuls 36% des questionnaires contiennent une réponse à cette question. f. Stade de gestation des juments Durée de gestation des juments avant l'avortement Effectif 140 120 100 80 60 40 20 0 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Mois FIGURE 24 : REPARTITION DES DECLARATIONS EN FONCTION DE LA DUREE DE GESTATION AVANT L’AVORTEMENT 74 Les juments de l’échantillon ont avorté entre 3 et 13 mois de gestation (FIGURE 24). Le stade de gestation moyen au moment de l’avortement est de 8 mois et 2 semaines pour la population étudiée, avec un pic d’avortement à 9 mois de gestation. g. Statut clinique de juments Pour 262 juments au moins une anomalie est signalée lors de l’examen clinique, soit 36% des déclarations (FIGURE 25). asymptomatique 7% hyperthermie 15% hypothermie 3% 2% 5% 0% ictère 57% pétéchies œdème des membres 11% pertes vulvaires autre FIGURE 25 : REPARTITION DES DECLARATIONS D’AVORTEMENT EN FONCTION DES SYMPTOMES DE LA JUMENT La catégorie « Autre » regroupe des symptômes très divers : coliques, boiteries, pieds chauds, pouls digités, faiblesse, ataxie, muqueuses pâles, uvéite fulgurante, torsion utérine, jetage et polydipsie sévère. Des sécrétions mammaires sont observées dans 12% des cas. 4. Les avortons et les annexes fœtales a. Rétention placentaire suite aux avortements Dans 9,4% des cas une rétention placentaire est constatée. Cependant 50% des déclarations ne contiennent pas de réponse à cette question. 75 b. Mortinatalité et mortalité néonatale Pour cette étude la mortinatalité est définie comme un avortement « vrai » c’est-à-dire l’expulsion par la jument d’un fœtus mort, à terme ou non. Elle représente 75% des cas de notre étude (FIGURE 26). La mortalité néonatale est définie comme la mortalité précoce (dans les trois premiers jours de vie) d’un poulain né-vivant. Elle représente 15% des cas de notre étude. 10% Fœtus mort 15% Fœtus vivant 75% Pas d'information FIGURE 26 : REPARTITION DES CAS DE MORTINATALITE ET DE MORTALITE NEONATALE DANS NOTRE ETUDE c. Résultats de l’autopsie Une autopsie du fœtus et/ou des annexes fœtales a pu être réalisée dans 74% des 732 cas d’avortements recensés en France entre 2009 et 2011. Parmi les 540 autopsies réalisées, 340 (63%) ont permis de mettre une évidence au moins une anomalie sur le fœtus et/ou les annexes fœtales. Pour les cas présentant au moins une anomalie à l’autopsie, les conclusions du laboratoire ont été répertoriées et classées selon plusieurs critères. Les cas ont tout d’abord été séparés en deux catégories selon que les lésions observées affectaient principalement le fœtus (FIGURE 27) ou ses annexes (FIGURE 28). Pour de nombreux cas seul un de ces deux éléments a été transmis au laboratoire. 76 92 27% Présence d'une anomalie affectant principalement les annexes foetales Présence d'une anomalie affectant principalement le fœtus 248 73% FIGURE 27 : REPARTITION DES RESULTATS D’AUTOPSIE SELON QUE LES LESIONS TROUVEES AFFECTENT PRINCIPALEMENT LE FŒTUS OU SES ANNEXES Pour les 92 cas où les anomalies affectent principalement les annexes fœtales, les lésions ont été classées en 3 catégories : - Lésions de placentite - Anomalies du cordon ombilical (torsion, striction, anomalie de longueur ou d’épaisseur, hématome, signes d’inflammation marquée, etc…) - Divers : catégorie regroupant des lésions plus anecdotiques telles qu’un épaississement sous allantoïdien ou la présence de kystes sur la membrane amniotique 7 8% 47 51% DIVERS 38 41% CORDON PLACENTITE FIGURES 28 : REPARTITION DES LESIONS AFFECTANT PRINCIPALEMENT LES ANNEXES FŒTALES Pour les 248 cas où lésions affectent principalement le fœtus, les lésions ont été regroupées en 10 catégories : - Autolyse - Lésions inflammatoires - Lésions compatibles avec une infection - Lésions hémorragiques - Malformation congénitale - Atteinte pulmonaire - Atteinte hépatique - Œdème localisé ou généralisé - Ictère - Divers : autres lésions 77 7 3% 8 3% 10 4% 89 36% HEMORRAGIE 14 6% 14 6% ICTERE ATTEINTE HEPATIQUE MALFORMATIONS CONGENITALES 20 8% 20 8% OEDEME ATTEINTE PULMONAIRE AUTOLYSE DIVERS INFECTIEUX 41 16% 25 10% INFLAMMATION FIGURE 29 : REPARTITION DES LESIONS AFFECTANT PRINCIPALEMENT LE FŒTUS Les signes d’inflammation généralisée du fœtus prédominent largement (36%), viennent ensuite les signes d’infection qui représentent 16% des anomalies observées sur les fœtus (FIGURE 29). 5. Prévalence des maladies abortives surveillées par le RESPE a. Prévalence des cas positifs au sein de la population étudiée Rappel : Un avortement est considéré comme un cas positif à partir du moment où l’EHV-1 ou 4 a été identifié par PCR à partir d’un des prélèvements transmis (fœtus, placenta ou écouvillon utérin). 39 cas positifs à ont été mis en évidence durant cette période. 78 300 258 239 250 196 200 Positifs 150 Négatifs 100 6,2% 3,2% 13 8 2009 2010 6,5% 50 18 0 2011 FIGURE 30: PREVALENCE ANNUELLE DES CAS POSITIFS (EHV-1 ET EHV-4) DE NOTRE ETUDE La prévalence annuelle moyenne des cas d’avortements à EHV est de 5,3% (3,2% à 6,5%) au cours de la période d’étude (FIGURE 30). Répartition des cas d'EHV-1 et EHV-4 parmi les positifs 18 18 16 14 12 10 8 6 Positifs EHV-1 8 5 Positifs EHV-4 6 4 2 2 0 0 2009 2010 2011 FIGURE 31: REPARTITION DES CAS D’EHV-1 ET EHV-4 PARMI LES 39 CAS POSITIFS DE L’ETUDE Parmi les 39 cas positifs de notre étude, 29 sont positifs pour l’EHV-1 (4,0% des avortements) et 10 sont positifs pour l’EHV-4 (1,4%) (FIGURE 31). 79 En 2011 le nombre d’avortements à EHV-1 est multiplié par 3 par rapport aux années précédentes. Cette valeur élevée peut-être expliquée par l’apparition d’un foyer d’avortements à EHV-1 début 2011 survenue au printemps 2011 dans le département de l’Orne (61) où 9 avortements ont été diagnostiqués positifs à l’EHV-1. b. Répartition des cas positifs sur la période d’étude FIGURE 32 : REPARTITION CHRONOLOGIQUE DES 39 CAS POSITIFS SUR LA PERIODE D’ETUDE Les déclarations positives sont recensées entre Janvier et Mai de chaque année (à une exception près) avec un effectif plus important en 2011 (FIGURE 32). De façon générale, les déclarations positives sont régulièrement diagnostiquées au cours des hivers et printemps de chaque année. c. Répartition géographique des cas positifs La carte ci-dessous illustre la répartition géographique des 39 cas d’avortements positifs à l’EHV-1 ou EHV-4 déclarés au RESPE entre 2009 et 2011 (FIGURE 33). 80 FIGURE 33 : REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES 39 CAS POSITIFS RECENSES PAR LE RESPE ENTRE 2009 ET 2011 La majorité des déclarations positives à l’EHV sont issues de la région Basse Normandie (Départements du Calvados et de l’Orne surtout). La seconde région mise en évidence est la région Rhône-Alpes avec le département de l’Ain. La Haute Normandie et les Pays de la Loire sont en troisième et cinquième position. 81 d. Prévalence des autres maladies abortives surveillées par le RESPE: Artérite Virale Equine et Leptospirose Pendant cette période aucun cas d’avortement positif à la Leptospirose n’a été mis en évidence. Les leptospires sont suspectés d’être responsables de l’avortement lorsque les anticorps sont détectables, pour au moins un sérovar, à une dilution égale ou supérieure à 1/1 600. Parmi les 309 résultats sérologiques, 25 (soit 8 %) sont positifs pour au moins un sérovar, à une dilution égale ou supérieure à 1/1 600. Mais ces suspicions n’ont jamais été confirmées par PCR (LAUGIER & TAPPREST, 2012). Durant ces trois années, 4 cas positifs à l’artérite virale ont été mis en évidence. Le premier, survenu en 2009, concerne une jument positive à la fois à l’EHV-4 et l’artérite virale. Les trois autres cas sont survenus en 2010, à quelques semaines d’écart et dans la même zone géographique. Ces trois avortements se sont révélés être positifs pour l’artérite virale uniquement. B. Etude des facteurs de risque et des caractéristiques des avortements à EHV Un certain nombre de paramètres ont été testés dans cette étude afin d’étudier les différents facteurs de risque pouvant intervenir dans les avortements à EHV. Ces facteurs ont été présentés dans la FIGURE 14. Les résultats de l’étude des facteurs de risque relatifs aux écuries seront présentés dans un premier temps. Puis nous présenterons l’étude des facteurs de risque relatifs aux juments et quelques caractéristiques des avortements à EHV. 1. Etude des facteurs de risque relatifs à l’écurie Les variables relatives aux écuries concernent principalement l’environnement des juments, le fonctionnement et la gestion de l’élevage (TABLEAUX 4 ET 5). Variable quantitative étudiée Localisation géographique (par département) Activité principale de l’écurie Valeur de p p=0,68 (>0,05) Significativité Non significatif p=0,71 (>0,05) Non significatif TABLEAU 4 : RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUANTITATIVES CONCERNANT LES ECURIES 82 Variable qualitative étudiée Mouvements de chevaux Présence de chevaux malades dans l’effectif Autre avortement dans l’effectif Décès dans l’effectif Proportion parmi les cas positifs 8,5% Proportion parmi les cas témoins 7,6% Odds Ratio 7,8% 3,9% 2,11 25,8% 15,1% 1,71 10,3% 1,4% 7,80 IC 95% Significativité 1,12 [0,54-2,35] Non significatif [1,10-4,03] Significatif [0,76-3,83] Non significatif [2,33-26,13] Significatif TABLEAU 5: RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUALITATIVES CONCERNANT LES ECURIES (ODDS RATIO) 2. Etude des facteurs de risque relatifs aux juments et des caractéristiques des avortements à EHV Les variables relatives aux juments concernent principalement la gestion des juments, leurs antécédents et l’avortement en lui-même (TABLEAUX 6 ET 7). Variable quantitative étudiée Age des juments Race des juments Durée de gestation avant l’avortement Moyenne « positifs » 10,6 * 9,32 Moyenne « témoins » 10,8 * 8,35 Significativité Non significatif p=0,89 Significatif p=0,002 Significatif p=0,001 TABLEAU 6: RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUANTITATIVES CONCERNANT LES JUMENTS * Les chevaux de Selle sont significativement plus touchés que les autres races par les avortements herpétiques. Les Trotteurs français sont significativement moins touchés que les autres races. 83 Variable qualitative étudiée Proportion parmi les cas positifs 16,1% Proportion parmi les cas témoins 17,4% Odds Ratio Antécédent d’avortement 14,3% 36,9% 0,28 Vaccination contre l’EHV 46,2% 63,6% 0,49 Vaccination contre l’EHV (dans les effectifs « à risque ») Absence de symptômes au moment de l’avortement Rétention placentaire 23,4% 61,4% 0,20 82,8% 54,1% 4,08 10,3% 19,9% 0,46 15,6% 17,3% 0 ,89 61,5% 63,0% 0,94 38,5% 6,4% 9,17 Statut primipare Mortalité néonatale (poulain né vivant) Lésions sur le fœtus et/ou les annexes fœtales Lésions pulmonaires sur le fœtus 0,91 IC 95% Significativité [0,34-2,44] Non significatif [0,09-0,85] Significatif [0,26-0,94] Significatif [0,07-0,57] Significatif [1,50-11,1] Significatif [0,16-1,64] Non significatif [0,32-2,39] Non significatif [0,42-2,11] Non significatif [2,67-31,9] Significatif TABLEAU 7 : RESULTATS DE L’ETUDE DES VARIABLES QUALITATIVES CONCERNANT LES JUMENTS (ODDS RATIO) Les résultats de l’étude sont synthétisés dans le schéma suivant (FIGURE 34). 84 85 FIGURE 34: SCHEMA RECAPITULATIF DES RESULTATS DE L’ETUDE ROUGE: FACTEURS DE RISQUE DES AVORTEMENTS A EHV CONFIRMES PAR L’ETUDE VERT : FACTEURS PROTECTEURS JAUNE : CARACTERISTIQUES SIGNIFICATIVES DES AVORTEMENTS A EHV BLANC : RESULTATS NON SIGNIFICATIFS POUR CETTE ETUDE 86 TROISIEME PARTIE : Discussion des résultats de l’étude Avant de discuter les résultats de l’étude analytique, nous nous attarderons sur les différents biais pouvant interférer avec cette étude et sur l’influence qu’ils peuvent avoir sur les résultats. L’ensemble des résultats présentés seront ensuite discutés et comparés aux données de la bibliographie. Enfin quelques suggestions seront faites en vue de la rédaction d’une nouvelle fiche de déclaration, adaptée à la situation épidémiologique actuelle. I. Biais susceptibles d’interférer avec l’étude Plusieurs biais peuvent interférer avec l’étude et influencer nos conclusions. Ces biais seront présentés dans une première partie et nous en tiendrons compte lors de l’analyse de nos résultats. Un biais correspond, par définition, à une erreur non aléatoire, c’est-à-dire à une différence par rapport à la réalité que l’on retrouve de manière systématique dans une étude. Comme toute erreur, un biais a pour conséquence une image différente de la réalité (TOMA et al., 2001). Des biais peuvent survenir à chaque étape de l’étude. Ils sont regroupés en quatre grandes catégories : - Les biais d’échantillonnage ou de sélection - Les biais d’observation - Les biais d’analyse - Les biais de confusion A. Biais d’échantillonnage ou de sélection Ces biais sont fréquents et sont à l’origine d’un manque de représentativité des échantillons. Dans ce cas précis ils sont dus à plusieurs facteurs. La constitution d’une base de données sur la base du volontariat et sans tirage au sort aléatoire correspond au premier biais de cette étude. En effet, en France, la déclaration des avortements en espèce équine n’est pas une obligation, elle est faite sur demande de l’éleveur et sous réserve que le praticien soit un vétérinaire sentinelle du RESPE. 87 Le recrutement des cas sur la base du volontariat implique que seuls les avortements ayant été signalés spontanément par les éleveurs à leur vétérinaire sont pris en compte. Il est certain que tous les avortements ne sont pas déclarés (FIGURE 35). Par exemple une jument âgée peu fertile avortant seule au milieu des pâtures ne sera probablement pas immédiatement remarquée ni signalée. Tandis que pour une jument ayant un potentiel génétique intéressant et avortant de manière inexpliquée (pas d’antécédent médical, de traumatisme ou de problème sanitaire dans l’élevage) l’éleveur prendra le temps de contacter son vétérinaire et investira dans des analyses. De la même façon lorsque plusieurs avortements surviennent au cours de la même saison, les éleveurs redoutent une épidémie virale abortive et souhaitent obtenir un diagnostic au plus vite pour anticiper une éventuelle crise. FIGURE 35 : PYRAMIDE SCHEMATISANT LES OBSTACLES SUCCESSIFS A L’OBTENTION D’UNE DECLARATION D’AVORTEMENT Ces biais sont connus et ont été acceptés dès le début de l’enquête dans la mesure où il n’est pas facile d’obtenir l’implication de tous les éleveurs et tous les praticiens. Des études de représentativité ont été menées au sein du RESPE en 2005 et 2011 afin d’estimer la couverture du réseau. La détermination de la couverture du réseau a été faite par comparaison du nombre de chevaux suivis par les vétérinaires sentinelle en France et au nombre d’équidés recensés dans le pays (données nationales IFCE) (DAIX, 2012). La couverture du RESPE en 2005 était estimée à 30%, correspondant à environ 137 000 chevaux suivis par les VS pour un effectif national recensé de près de 460 000 équidés. En 2011, la représentativité estimée est de 40% soit environ 274 000 équidés suivis pour 685 000 équidés à l'échelle nationale. Cependant aucune donnée n’est disponible concernant le nombre d’avortements survenant chaque année sur le territoire. L’étude de la couverture du RESPE montre une évolution positive du suivi réalisé par le réseau à l'échelle nationale. Le RESPE espère encore s'améliorer dans les années à venir. 88 B. Biais d’observation Ils ont pour conséquences des réponses erronées ou incomplètes. Ils peuvent avoir différentes origines : le questionnaire, l’éleveur ou le vétérinaire déclarant. La subjectivité, la méfiance, le manque de motivation et la mémoire peuvent également induire des réponses biaisées. Dans l’analyse de nos résultats le taux élevé de non-réponse est apparu comme étant le principal défaut de notre étude. En effet les données manquantes sont très fréquentes et rendent nos interprétations difficiles. La mise en place des déclarations en ligne systématiques depuis 2011 a permis de réduire le taux de non-réponse en rendant obligatoire la réponse à certaines questions. Le questionnaire en lui-même peut également représenter un biais. En effet il ne nous permet pas toujours de préciser le contexte dans lequel l’avortement est survenu. De ce fait il est difficile d’interpréter certains de nos résultats. Il serait par exemple intéressant de savoir comment l’élevage est géré (vaccination, hygiène, séparation des classes d’âge, etc..). C. Biais d’analyse et de classification Les biais d’analyse peuvent être liés à un défaut du prélèvement ou de la méthode d’analyse proprement dite. Dans cette étude il peut exister des erreurs dues à la qualité des prélèvements (qualité de réalisation, de conservation, de transport) ou à la sensibilité et la spécificité des analyses. La diversité des prélèvements fournis est également un important biais d’analyse. En effet comme nous avons pu le voir dans l’étude bibliographique les résultats obtenus sur les différents prélèvements ne sont pas toujours les mêmes. Considérons une jument ayant avorté et pour laquelle seul le fœtus est transmis au laboratoire. Si le prélèvement est négatif et la jument sera classée dans le lot témoin. Or il est possible qu’en réalité l’avortement soit causé par un EHV et que seul le placenta soit positif à l’EHV (SMITH et al., 1992). De tels cas sont à l’origine de faux négatifs dans notre étude. Le RESPE recommande dans son protocole de transmettre les trois types de prélèvements (placenta, écouvillon utérin et fœtus). Ces trois prélèvements sont transmis dans 366 cas (50%) seulement, l’incidence des herpèsvirus dans notre étude est donc probablement sous-estimée. 89 D. Biais de confusion Un facteur de confusion est un facteur réellement responsable de la différence (ou d’une partie de la différence) entre deux groupes, attribuée par erreur, à un autre élément (TOMA et al., 2001). Au sein de notre étude, la répartition des élevages équins sur le territoire peut apparaître comme étant un facteur de confusion. En effet dans notre étude la race des Chevaux de Selle est significativement plus touchée que les autres races par les avortements à EHV (35% de CS dans le lot positif, 17% dans le lot témoin, p=0,002). Pourtant il est peu probable que cette race soit plus sensible aux avortements herpétiques que les autres. Les cas positifs sont recensés dans des régions où les Chevaux de Selle sont nombreux (BasseNormandie) voire majoritaires (Rhône). La répartition très hétérogène des cas positifs sur le territoire est donc à l’origine d’un biais de confusion concernant les races. Cette hypothèse sera développée dans le paragraphe IV.C. 2. Ces biais sont inéluctables mais il est possible de les identifier et d’en tenir compte lors de l’interprétation de nos résultats. II. Discussion des résultats de l’étude L’ensemble des résultats de notre étude ont été comparés avec les données de la bibliographie. Par la suite nous discuterons certains résultats qui nous semblaient intéressants de développer. Enfin quelques suggestions seront faites en vue d’améliorer la fiche de déclaration et de l’adapter au mieux à la situation épidémiologique actuelle. A. Limites de ces résultats et de leur interprétation Avant toute chose il est essentiel de rappeler les limites de cette étude afin d’interpréter les résultats avec précautions. En effet les conclusions qui vont être présentées sont propres à cette étude rétrospective et à la base de données « Avortement » du RESPE pour la période 2009-2011. La population étudiée ici n’est qu’un échantillon du cheptel équin français et il est important de bien tenir compte des différents biais exposés précédemment. Aussi la portée de cette étude peut paraître limitée, mais elle a le mérite de présenter un premier bilan du statut actuel des avortements herpétiques équins en France. 90 B. Comparaison des résultats de l’étude avec la bibliographie 1. Résultats de l’étude comparables aux données bibliographiques a. Prévalence des avortements à EHV Dans notre étude la prévalence annuelle des avortements à EHV varie entre 3,2 et 6,5% pour l’ensemble des deux virus EHV-1 et EHV-4. En Angleterre la prévalence annuelle des avortements à EHV varie entre 2 et 18 % des avortements équins recensés par les laboratoires, avec une moyenne de 6,5% entre 1988 et 1997 (SMITH et al., 2003) et une moyenne de 13,5% entre 2006 et 2010 (BUTLER et al., 2011). La prévalence annuelle Française semble donc inférieure. Les avortements à EHV-1 représentent 4,0% des avortements sur notre période d’étude tandis que les avortements à EHV-4 représentent 1,4%. Une étude menée au Kentucky entre 1983 et 1992 a permis de montrer que l’EHV-4 est une cause moins fréquente d’avortement que l’EHV-1. L’EHV-4 représente moins d’1% des avortements dans cette étude (OSTLUND, 1993). b. Age des juments Dans notre étude l’âge de la jument n’est pas un facteur de risque des avortements à EHV. Les données bibliographiques confirment que les avortements herpétiques surviennent chez des juments de tout âge (REED & TORIBIO, 2004). c. Activité principale des écuries déclarant un avortement Dans notre étude les avortements à EHV ne surviennent pas significativement plus souvent dans les élevages, les centres d’entrainement ou les centres équestres. L’activité de l’écurie n’est donc pas un facteur de risque des avortements à EHV. Les données bibliographiques confirment que les avortements herpétiques surviennent chez des juments de toute discipline (REED & TORIBIO, 2004). d. Antécédents au sein de l’écurie La présence d’un cheval malade et la survenue d’un décès récent au sein de l’effectif représentent des facteurs de risque des avortements à EHV. Le déplacement ou l’introduction d’un nouveau cheval dans l’effectif ne représente pas un facteur de risque des avortements à EHV. 91 e. Vaccination contre l’EHV Dans notre étude les juments « correctement vaccinées » contre l’EHV ont significativement moins de risque d’avorter suite à une infection par un EHV. La vaccination est donc bien un facteur protecteur vis-à-vis des avortements à EHV. f. Durée de gestation Dans notre étude les avortements à EHV sont significativement plus tardifs que les autres. Ce résultat est confirmé par les données bibliographiques (BLANCHARD et al., 2007). g. Symptômes de la jument Dans notre étude les juments positives à l’EHV présentent significativement moins de symptômes que les autres (ANNEXE 7). Les avortements herpétiques se produisent généralement sans aucun signe annonciateur (BLANCHARD et al., 2007) et sans symptômes cliniques de la jument. (REED & TORIBIO., 20004). h. Rétention placentaire Dans notre étude il n’existe pas de corrélation entre les avortements positifs à l’EHV et le risque de rétention placentaire. Les données bibliographiques affirment que les avortements à EHV se produisent généralement sans complications et le virus est rapidement éliminé du tractus génital de la jument (OSTLUND, 1993). i. Lésions pulmonaires du fœtus Dans notre étude il existe une corrélation positive entre les avortements à EHV et la présence de lésions pulmonaires sur le fœtus (ANNEXE 8). Les données de la bibliographie décrivent, dans les cas d’avortements à EHV tardifs, plusieurs types de lésions macroscopiques pulmonaires : un excès de liquide pleural, de l’œdème pulmonaire, une nécrose des bronchioles, etc… (VAN MAANEN, 2002). 92 2. Résultats de l’étude contraires aux données bibliographiques ou non documentés a. Localisation géographique de l’élevage Dans notre étude la localisation géographique de l’élevage n’est pas un facteur de risque des avortements à EHV. Lors des études menées par le RESPE sur les formes nerveuses et respiratoires de la rhinopneumonie la localisation de l’élevage apparaissait comme un facteur de risque de la maladie (TRITZ et al., 2007 ; MARCILLAUD-PITEL et al., 2008). Ce résultat est donc plutôt inattendu. b. Antécédent d’avortement au sein de l’élevage Dans notre étude la survenue d’un autre avortement au sein de l’élevage et au cours de la saison n’est pas un facteur de risque des avortements à EHV. Ce résultat n’est pas confirmé par la bibliographie qui décrit des cas d’épidémie d’avortements à EHV (BLANCHARD et al., 2007). Aussi il est surprenant de constater que, dans notre étude, lorsque plusieurs avortements surviennent au sein d’un même effectif ils ne sont généralement pas causés par l’une des 3 causes infectieuses suivies par le RESPE. c. Race de la jument La race des juments apparaît comme étant un facteur de risque des avortements à EHV dans cette étude. Or les données de la bibliographie rappellent que les avortements à EHV surviennent chez des juments de toutes races, sans aucune prédisposition (REED & TORIBIO, 2004). Une hypothèse sera proposée pour expliquer ce résultat dans la partie suivante. d. Statut primipare/multipare Le statut primipare ou multipare de la jument n’est pas un facteur de risque dans notre étude. Ce résultat contredit les données bibliographiques selon lesquelles les avortements à EHV surviennent la plupart du temps chez des primipares (DENNIS, 1997). e. Antécédent d’avortement de la jument Dans notre étude les juments ayant déjà avorté auparavant sont significativement moins touchées par les avortements à EHV. Aussi la survenue d’un avortement lors des précédentes gestations peut être considérée comme un facteur protecteur. Ce résultat paraît surprenant. En effet, les juments ayant avorté suite à une herpèsvirose ne sont pas immunisées contre un éventuel avortement herpétique lors des gestations suivantes (OSTLUND, 1993). 93 f. Mortinatalité/mortalité néonatale En ce qui concerne la proportion de cas de mortinatalité et de mortalité néonatale, il n’existe pas de différence significative dans notre étude entre les juments positives et les juments témoins. Ce résultat n’est pas documenté dans la bibliographie vétérinaire. g. Vaccination contre l’EHV dans les effectifs « à risque » La vaccination contre l’EHV est un facteur protecteur plus efficace dans les effectifs « à risque » (OR=0,20 - IC95=[0,07-0,57]) que dans l’ensemble des élevages (OR=0,49 – IC95=[0,26-0,94]). Ce résultat n’est pas documenté dans la bibliographie vétérinaire. C. Quelques résultats intéressants à développer 1. Un cas d’épizootie au sein de la base de données « Avortements » Lors de la description de l’échantillon (partie II), un ensemble de déclarations se démarquait des autres dans la base de données. Dans cet effectif 93 chevaux sont déclarés malades sur un effectif de 160 équidés, 8 sont décédés et 6 avortements ont été déclarés. Ces cas ont tous été déclarés dans un intervalle d’un mois, début 2011. Il s’agit en réalité d’une importante épidémie de Grippe Equine survenue en BasseNormandie dans un effectif de chevaux de trait non-vaccinés (contre le Grippe Equine) après introduction d’un nouvel individu malade. Cet exemple tragique illustre la contagiosité de cette maladie ainsi que les différentes formes qu’elle peut prendre au sein d’un élevage (atteinte respiratoire pouvant évoluer vers la mort et provoquer des avortements). Cela nous rappelle également l’intérêt d’assurer une prévention efficace contre les épizooties par le biais de la vaccination, de la quarantaine et des alertes sanitaires (via un réseau tel que le RESPE par exemple). 2. La répartition par race des cas positifs et des témoins : un résultat surprenant ? Il existe une différence significative dans la répartition par race des cas positifs et des cas témoins (FIGURE 36). Ce résultat paraît surprenant et propre à cette étude. 94 FIGURE 36 : REPARTITION PAR RACE DES JUMENTS POSITIVES A L’EHV (A GAUCHE) ET DES JUMENTS TEMOINS (A DROITE) Comment expliquer cette prépondérance des Chevaux de Selle et cette faible proportion de Trotteurs parmi les positifs? Ces différences sont à mettre en lien avec la répartition géographique des cas de formes abortives de l’EHV. En effet voici la répartition des cas d’avortements à EHV et la répartition des cheptels de chevaux de courses et des chevaux de sport et loisirs en France selon l’IFCE (Institut Français du Cheval et de l’Equitation) (FIGURE 37). FIGURE 37 : REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES CHEVAUX DE COURSES (A GAUCHE)ET DES CHEVAUX DE SPORT ET LOISIR (AU MILIEU) SELON L’IFCE. REPARTITION GEOGRAPHIQUE DES AVORTEMENTS HERPETIQUES DE NOTRE ETUDE (A DROITE) Les deux régions les plus touchées par les avortements EHV sont : la Basse-Normandie et le Rhône-Alpes. Ces deux régions totalisent à elles-seules près de 77000 chevaux de sport et loisir (parmi lesquels les Chevaux de Selle sont largement majoritaires) et près de 37000 95 chevaux de course (Trotteurs et Pur-sang). La race la plus représentée dans les régions touchées par les avortements à EHV est donc celle des Chevaux de Selle, ce qui pourrait expliquer cette prépondérance des Chevaux de Selle et cette faible proportion de Trotteurs parmi les cas positifs. Ainsi la répartition géographique des cas d’avortements à EHV pourrait expliquer que certaines races semblent significativement plus touchées que d’autres par les avortements à EHV. Il s’agirait donc d’un biais de confusion de cette étude. Une étude multivariée pourrait être réalisée pour confirmer ce biais. III. Perspectives Les résultats obtenus à partir de la base de données du RESPE ont permis d’établir un premier bilan de la situation épidémiologique des avortements équins en France. Il est essentiel d’essayer d’adapter au mieux le suivi des avortements pour les années à venir. A. Perspectives pour le sous-réseau Avortements du RESPE Au cours de ce travail nous avons pu nous rendre compte qu’il est essentiel pour les praticiens et les éleveurs d’avoir accès à un réseau d’épidémio-surveillance accessible, réactif et adapté à la situation épidémiologique. En effet la réussite des mesures de prévention est conditionnée par une appréciation correcte du contexte épidémiologique. Afin d’apprécier au mieux la prévalence des avortements sur le territoire il est nécessaire d’améliorer la couverture du réseau des vétérinaires-sentinelles. Il est donc essentiel de sensibiliser les praticiens et d’inciter les éleveurs à déclarer systématiquement les avortements survenus dans leurs effectifs. Il pourrait également être intéressant d’établir des liens entre différents sous-réseaux du RESPE : le réseau SRA (Syndrome Respiratoire Aigu) et le réseau Syndrome nerveux qui suivent les formes respiratoires et nerveuses de la rhinopneumonie. Comme nous avons pu le voir lors de l’étude de la forme abortive, nous manquons souvent d’informations concernant les antécédents et les affections du reste de l’effectif. Il est donc difficile d’émettre des hypothèses quant à l’origine de l’infection virale. Dans certains cas il pourrait s’agir d’un avortement herpétique survenu dans un contexte d’épidémie de forme respiratoire (accompagnée ou non de cas sporadiques de forme nerveuse). Dans d’autres cas il pourrait s’agir d’un avortement isolé à EHV. Cependant il est difficile d’émettre de telles hypothèses en l’absence de renseignements suffisants concernant le reste de l’effectif. Il serait alors intéressant de contacter les éleveurs (ou les vétérinaires) afin d’en savoir plus sur le statut clinique de leurs élevages. Néanmoins cela pourrait entraîner quelques réticences pour des raisons de confidentialité des données. Une autre possibilité serait d’adapter au mieux le questionnaire. 96 B. Vers une amélioration du questionnaire ? Au cours de nos analyses nous avons identifié un certain nombre d’informations qu’il pourrait être intéressant d’ajouter au questionnaire afin de mieux évaluer les facteurs de risque des avortements herpétiques sur le territoire. 1. Les élevages déclarants Il serait intéressant d’obtenir d’avantage de précisions concernant les antécédents pathologiques de l’effectif. Aussi lorsqu’un autre équidé malade est déclaré il serait utile de compléter de manière succincte la nature des symptômes observés (respiratoire, nerveux, coliques, plaie, etc…) afin d’établir s’il peut exister un lien entre l’individu malade et l’avortement survenu dans l’élevage.. De la même façon il serait intéressant d’obtenir des détails lorsqu’un autre avortement est survenu au sein de l’effectif et qu’il n’a pas été déclaré au RESPE. - Dans quel contexte est-il survenu ? - Quel était l’âge de la jument ? - A quel stade de gestation l’avortement est survenu ? - La jument présentait-t ’elle des symptômes ? - Le fœtus présentait-t’ il des anomalies ? - Des analyses ont-elles été réalisées ? - Des mesures sanitaires ont-elles été mises en place suite au premier avortement ? Il serait tout aussi utile d’avoir des renseignements sur les décès survenus au sein de l’effectif. Afin d’estimer s’il pourrait s’agir d’une mort suspecte pouvant impliquer une cause infectieuse. Au cours de nos analyses nous nous sommes souvent interrogés sur la gestion des élevages. Il pourrait être demandé aux éleveurs de préciser si : - Les poulinières sont séparées des autres chevaux de l’effectifs - Les mères suitées sont en contact avec les poulinières gestantes ou avec le placenta/fœtus des juments ayant avorté - Les poulains de différentes classes d’âge sont séparés - Une quarantaine est respectée lors de l’introduction d’un nouvel individu dans l’élevage Les informations qui pourraient être utiles sont nombreuses et ne peuvent malheureusement pas toutes être incluses dans le questionnaire. Mais si quelques-unes peuvent être ajoutées il serait judicieux de choisir en premier lieu les questions concernant la vaccination. 97 2. La vaccination contre l’EHV Le questionnaire mis à disposition ne permet pas de renseigner toutes les informations qui seraient utiles afin de juger de l’efficacité des différents protocoles vaccinaux. Dans le questionnaire actuel les propriétaires peuvent simplement indiquer si la jument est vaccinée contre l‘EHV (Oui/Non) et éventuellement y ajouter la date du dernier rappel. Pourtant, afin d’évaluer au juger l’effet protecteur de la vaccination, il serait pertinent de savoir: - Si la primo-vaccination a été correctement réalisée - Si la jument a toujours été à jour dans ses rappels - Depuis combien d’années la jument est vaccinée contre l’EHV - A quelle fréquence la jument est vaccinée contre l’EHV (annuel/biannuel) - Si la jument a ou n’a pas bénéficié d’un protocole de vaccination renforcé (vaccination mise à jour avant la saillie, puis rappel à 5, 7 et 9 mois de gestation - Quel type de vaccin a été utilisé (EHV-1 seul/EHV-4 seul/EHV-1 et 4) - Quel est le protocole de vaccination du reste de l’effectif 3. Suivi des effectifs après avortement Il pourrait être intéressant de suivre les effectifs ayant déclaré un cas positif à l’EHV un mois après la survenue de l’avortement par exemple. Ce suivi pourrait se faire par le biais d’une fiche demandant au propriétaire si des symptômes respiratoires ou nerveux sont apparus sur les autres chevaux de l’effectif pouvant alors évoquer un foyer de rhinopneumonie. Ces informations permettraient de mieux cerner l’épidémiologie des avortements herpétiques sur le territoire. Il serait alors possible de juger si la vaccination des juments, accompagnée de mesures sanitaires adéquates, suffit réellement à limiter la propagation du virus au sein d’un élevage. 4. Suivi des étalons Le virus EHV est, entre autre, excrété dans le sperme des étalons. Une étude menée en 2009 a révélé la présence d’ADN viral d’EHV-1 dans 13% des 390 échantillons testés. La transmission horizontale à la jument n’est à ce jour pas établie en espèce équine mais elle est bien connue pour d’autres espèces (HEBIA-FELLA et al., 2009). Le risque d’avortement suite à une contamination par l’EHV lors de la saillie n’est également pas étudié. Aussi il serait intéressant de connaître les étalons ayant été utilisés pour chacune des juments ayant avorté ainsi que la technique utilisée (monte naturelle, insémination à partir de semence réfrigérée/congelée ou transfert d’embryon). Ces informations pourraient permettre d’évaluer la part de risque provenant de l’étalon. 98 99 100 Sources bibliographiques ALLEN.G.P. (2003). Respiratory infections by equine herpesvirus type 1 and 4 In Equine Respiratory Diseases (ed. Lekeux.P), pp. 2-11: International Veterinary Information Service. ALLEN.G.P. (2006). Antemortem detection of latent infection with neuropathogenic strains of equine herpesvirus-1 in horses. 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In Le point Vétérinaire, vol. 24, pp. 737-742. 106 Annexe 1 : Conduite du vétérinaire praticien pour établir le diagnostic étiologique d’un avortement - Fiche rédigée par le LERPE 107 108 Annexe 2 : Charte du Vétérinaire Sentinelle au RESPE 109 110 Annexe 3 : Protocole de déclaration d’un avortement au RESPE 111 112 Annexe 4 : Fiche de déclaration d’avortement au RESPE disponible jusqu’en Décembre 2010 113 114 Annexe 5 : Fiche de déclaration d’avortement en ligne sur le site du RESPE 115 116 Annexe 6 : Carte de répartition des vétérinaires sentinelles au RESPE 117 118 Annexe 7 : Répartition des symptômes observés chez les juments positives et chez les juments témoins Répartition des symptômes parmi les juments positives à l'EHV asymptomatique 10% hyperthermie 7% hypothermie ictère pétéchies œdème des membres 83% pertes vulvaires autre Répartition des symptômes parmi les juments témoins asymptomatique 7% hyperthermie 16% hypothermie ictère 4% 54% 2% 5% œdème des membres 12% 0% pétéchies pertes vulvaires autre 119 120 Annexe 8 : Répartition des lésions observés sur les fœtus issus d’avortements positifs à l’EHV et sur les témoins Répartition des lésions fœtales pour les avortements positifs HEMORRAGIE ICTERE 9% 9% 37% ATTEINTE HEPATIQUE MALFORMATIONS CONGENITALES 18% OEDEME ATTEINTE PULMONAIRE AUTOLYSE 9% 18% SIGNES INFECTIEUX SIGNES INFLAMMATOIRES DIVERS Répartition des lésions fœtales pour les avortements témoins 3% 3% 4% HEMORRAGIE 11% 6% ICTERE 5% ATTEINTE HEPATIQUE 8% 36% 8% 16% MALFORMATIONS CONGENITALES OEDEME ATTEINTE PULMONAIRE AUTOLYSE SIGNES INFECTIEUX SIGNES INFLAMMATOIRES DIVERS 121 RIOUSSET ISABELLE ETUDE EPIDEMIOLOGIQUE DES AVORTEMENTS HERPETIQUES EQUINS DECLARES AU RESPE ENTRE 2009 ET 2011 Thèse d’Etat de Doctorat Vétérinaire : Lyon, 05 Octobre 2012 RESUME : La rhinopneumonie est une maladie infectieuse due aux herpèsvirus EHV-1 et -4 et peut entraîner des signes respiratoires, neurologiques et/ou des avortements chez les chevaux infectés. Les infections à herpèsvirus sont d’importance économique majeure dans la filière équine du fait de leur contagiosité. Un réseau de surveillance a été développé en France depuis 2008 par le RESPE (Réseau d’EpidémioSurveillance en Pathologie Equine) afin de mieux connaître la prévalence des avortements herpétiques et leurs facteurs de risque, et donc de proposer des mesures de prévention et de contrôle adaptées. Sept cent trente-deux déclarations d’avortement ont été enregistrées par le réseau de 2009 à 2011 et l’un des virus EHV-1 ou -4 a été mis en évidence dans 39 cas. La prévalence des avortements herpétiques est de 5,3% et est comparable à celle des autres régions du monde. Malgré les biais influençant l’analyse des données, cette étude nous a permis d’établir un premier bilan de la situation actuelle des avortements à EHV sur le territoire. L’exploitation de ces données a mis en évidence un certain nombre de facteurs de risque (race de la jument, présence d’un cheval malade ou d’un décès dans l’effectif) et de facteurs protecteurs (vaccination contre l’EHV et antécédent d’avortement de la jument) vis-à-vis de cette affection. Si la plupart des conclusions issues de cette étude sont en accord avec la littérature vétérinaire, un certain nombre d’entre elles restent néanmoins plus surprenantes ou inédites. MOTS CLES : - CHEVAL - HERPESVIRIDAE - AVORTEMENT - EPIDEMIOLOGIE VETERINAIRE JURY : Président : Monsieur le Professeur Christian CHIDIAC 1er Assesseur : Madame le Professeur Agnès LEBLOND 2ème Assesseur : Monsieur le Professeur Pierre GUERIN DATE DE SOUTENANCE : 5 OCTOBRE 2012 ADRESSE DE L’AUTEUR : 72 RUE MAURICE ARNOUX 92120 MONTROUGE
