Introduction Conclusion et perspectives Résultats Objectif
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Phénotypage cardiovasculaire de nouvelles lignées de souris mutantes dans le cadre du consortium IMPC Ghina Bouabout, Lahcen El fertak, Roy Combe, Julien Becker, Hugues Jacobs, Laurent Monassier, Mohamed Selloum, Tania Sorg-Guss, Yann Herault Institut Clinique de la souris, Centre Européen de Recherche en Biologie et en Médecine, Strasbourg Introduction • Phénotypage de modèles murins transgéniques: une porte vers des découvertes scientifiques et de nouvelles perspectives cliniques Objectif Conclusion et perspectives Identification de phénotypes cardiovasculaires pertinents pour les maladies humaines • Depuis 1 an, nous avons produit et caractérisé 30 mutants. • 20 d'entre eux ont révélé des phénotypes pertinents sur les fonctions cardio-vasculaires. • 10 phénotypes ont été détectés uniquement chez les mâles et 7 dans les deux sexes. • 14 phénotypes majeurs: cardiomyopathies et troubles de conduction. • Les phénotypes détectés dans les deux sexes vont être explorés plus finement (Doppler tissulaire, échocardiographie de contraste, évaluation hémodynamique…) afin de compléter leur caractérisation • International Mouse Phenotyping Consortium (IMPC): réseau international de phénotypage incluant l’Institut Clinique de la Souris • Identification de la fonction de gènes inconnus au moyen d’une batterie de tests fonctionnels et anatomiques chez la souris Animaux et plan de l’étude • Fond C57BL6/N Tac sous forme homozygote sauf létalité • Chaque mutant homo ou hétérozygote est comparé au contrôle C57BL6/N • 7 à 8 souris par sexe et par génotype Echocardiographie • • • • • Electrocardiographie Souris anesthésiées au tribromoéthanol (400-600 mg/kg). Echographe: Vevo 2100 (Vevo imaging System, VISUALSONICS, Amsterdam, The Netherlands). Coupes 2D: parasternales (grand et petit axe), apicale 4 cavités, arc aortique… Doppler: flux aortique, transmitral et tissulaire Paramètres obtenus: Morphologiques (diamètres des cavités, épaisseurs des parois), Fonctionnels (contractilité, relaxation, débits) Dérivation bipolaire des membres DII (électrocardiographe ISO DAM8 amplifier (World Precision Instruments, USA) ECG normal d’une souris male C57Bl6/J dissociation auriculo ventriculaire avec rythme auriculoventriculaire voisin du rythme sinusal Souris normale onde P: dépolarisation des oreillettes, QRS complexe: dépolarisation des ventricules onde T: repolarisation des ventricules Insuffisance cardiaque (dilatation ventriculaire et abaissement de la fraction de raccourcissement) Phénotype cardiaque Résultats Trouble de conduction Trouble de conduction 1 0 m u ta n ts s a n s 7 p h é n o ty p e s c a r d ia q u e (M a le s + fe m e lle s ) ( 3 4 .3 8 % ) (3 8 .1 % ) Trouble du rythme cardiaque 1 0 p h é n o ty p e s (m â le s u n iq u e m e n t 2 0 m u ta n ts a v e c Cardiomyopathies hypertrophiques ( 4 7 .6 % ) u n p h é n o ty p e c a r d ia q u e 3 ( 6 5 .6 3 % ) p h é n o ty p e s (f e m e lle s u n iq u e m e n t ( 1 4 .2 8 % ) Cardiomyopathies dilatées 3 c a r d io p a th ie s Hypoplasie ventriculaire et trouble de repolarisation m o d é r é s (1 5 % ) m a je u r e s ( 4 0 % ) Masse ventriculaire gauche (1 5 % ) 6 3 tr o u b le s d e r y th m e c a r d ia q u e m a je u rs (1 5 % ) Epaisseurs des parois p o s t é r ie u r e ** 5 r a t io L V M /B W ou 3 tr t io n duc con és dér mo ) (1 5 % Nol8 Gm12258 Nab2 Ino80 Sdsl Synpo2 Ncs1 Cdc26 Rab19 Timm50 Prdm10 Nae1 Yipf5 Otub1 Setbp1 Ahsa2 Kctd15 Ptdss1 Laptm4a Iah1 Types de protéines Protéine nucléaire fixant Ras-related GTP-binding proteins Protéine non caractérisée Protéine nucléaire fixant la protéine EGR (early growth response) Complexe chromatinien, fixation actine et myosine Serine dehydratase Synaptopodine fixant l’actine Protéines fixant le calcium, Neuronal calcium sensor Cyclosome, Division cellulaire Oncogène RAS Translocase de la membrane mitochondriale Facteur de transcription contenant le domaine C2H2 de type doigt de zinc Enzyme catalysant la condensation d’ATP dans le Cycle cellulaire Protéine de transport entre REG et Golgi Thio estérase de l’ubiquitine oncogène Co-chaperone stimulant l’activité ATPasique du HSP90 Domaine de tétramérisation cytoplasmique d’un canal potassique phosphatidylserine synthase Protéine lysosomial transmembranaire Lipase Cas d’une cardiomyopathie hypertrophique, Knock-out du gène Yipf5 (protéine de transport entre REG et Golgi) 8 c a r d io p a th ie s m a je u r e s de b le s Gène ♂+♀ ♂ ♂+♀ ♂ ♂+♀ ♂+♀ ♂ ♂ ♀ ♂+♀ ♂ ♂ ♂ ♂ ♂ ♂+♀ ♂+♀ ♀ ♂+♀ ♂+♀ 4 3 2 1 0 WT Y ip f5 K O 1 .0 Diamètre du VG en systole * 4 a n t é r ie u r e ** Fraction de raccourcissement ** Vésicules éosinophiles dans les myocytes Graisse intra et péri vasculaire Signes de dégénérescence myofibrillaire 30 ** 25 L V E S D (m m ) c o n d u c t io n E p a is s e u r d e s p a r o is ( m m ) 3 t r o u b le s d e Sexe Modéré Modéré Modéré Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Majeur Modéré Modéré Modéré Majeur Majeur 0 .8 0 .6 0 .4 3 20 F R (% ) p h é n o ty p e Intensité 2 15 10 1 5 0 .2 0 .0 0 0 W t Y ip f5 K O W t Y ip f5 K O WT Y ip f5 K O WT Y ip f5 K O
