Université des Sciences et Technologies de Lille THESE

Université des Sciences et Technologies de Lille
THESE DE DOCTORAT
Pour l’obtention du titre de
DOCTEUR DE L’UNIVERSITE DE LILLE
Ecole Doctorale Biologie-Santé de Lille
Présentée par
Jean-Philippe WILMET
ETUDE PROTEOMIQUE DU RECEPTEUR P75NTR DANS LE
CANCER DU SEIN
Soutenue le 8 Juillet 2011 devant la commission d’examen :
Président du jury : Dr. Florence PINET Institut Pasteur Lille
Rapporteurs : Pr. Jérome LEMOINE Université de Lyon
Pr. Philippe BECUWE Université de Nancy
Directeurs de Thèse : Pr. Hubert HONDERMARCK Université de Lille
Pr. Xuefen LE BOURHIS Université de Lille
Thèse de Jean-Philippe Wilmet, Lille 1, 2011
© 2011 Tous droits réservés.
http://doc.univ-lille1.fr

- 2 -
Thèse de Jean-Philippe Wilmet, Lille 1, 2011
© 2011 Tous droits réservés.
http://doc.univ-lille1.fr

REMERCIEMENTS
Les travaux présentés dans cette thèse ont été réalisés au sein du laboratoire INSERM
U908, « Signalisation des facteurs de croissance dans le cancer du sein – Protéomique
fonctionnelle », dirigé par le Professeur Hubert Hondermarck.
Pendant ces trois années, un soutien à ces recherches a été apporté par une allocation du
ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche que je tiens ici à remercier.
Je remercie vivement mon co-Directeur de thèse, Monsieur le Professeur Hubert
Hondermarck pour m’avoir accueilli dans son équipe. Votre rigueur scientifique, votre soutien,
ainsi que vos légendaires métaphores ont été essentiels à ma formation. Merci pour tout.
Je remercie également ma co-Directrice de thèse, Madame le Professeur Xuefen Le Bourhis
pour sa patience et son investissement dans la réalisation de ces travaux et de ma formation.
Pour l’honneur qu’ils me font en faisant partie de ce jury, je remercie profondément Madame
le Professeur Florence Pinet qui a accepté de le présider ainsi que Monsieur le Professeur
Jérome Lemoine et Monsieur le Professeur Philippe Becuwe qui ont bien voulu juger ce
travail.
Je tiens également à remercier chaleureusement Madame le Docteur Ikram El Yazidi
Belkoura pour m’avoir fait confiance à mes débuts, pour ses nombreux conseils, et pour tous
les moments que l’on a partagé. Merci.
Un grand Merci à tous les membres du laboratoire qui m’ont accompagné pendant cette
aventure :
Manue, merci pour nos discussions, ton écoute et tes conseils en toutes circonstances m’ont
été précieux.
Christophe, un grand merci pour l’implication personnelle dont tu as fait preuve à mon égard,
mais également pour nous avoir permis de travailler dans un labo flambant neuf !
Ingrid, merci de m’avoir (un peu) initié aux arcanes de la biologie moléculaire. Ta joie de
vivre fait toujours plaisir à voir, ne change surtout pas !
Robert-Alain, bien que nos relations aient été compliquées, tu as tout mon respect
scientifique.
Laura, les quelques mois où nous avons partagé notre bureau furent pour moi très
enrichissants. Je te souhaite bonne chance pour la suite.
Thèse de Jean-Philippe Wilmet, Lille 1, 2011
© 2011 Tous droits réservés.
http://doc.univ-lille1.fr

- 4 -
Nathalie, un grand merci pour ton aide technique et tes conseils avisés.
Je remercie également, Isabelle pour son implication, Valérie pour toutes mes commandes
« urgentes », Emilie pour son organisation et son aide, ainsi que Véro qui nous fait briller le
labo tous les jours !
Un grand merci à mes collègues et surtout ami(e)s thésard(e)s pour la bonne ambiance qu’il
y a toujours eu entre nous et pour tous les bons moments partagés.
Cyril, mon compagnon de « galère » depuis le Master 2, ton flegme et ton abnégation forcent
le respect. De connaissances nous sommes passés à collègues puis à amis. Bien que tu ne
connaisses rien (ou pas grand-chose) au foot et malgré mes récurrentes raclées au Bad,
notre amitié m’est très précieuse. Merci.
Elisa, tu m’as apporté l’Italie dans ton accent et ta bonne humeur. Nos discussions de
« série-phile » furent mémorables, et je tiens à ajouter que ton cœur est immense malgré ta
petite taille ! Buzzinga !
Léo, pour toi ce n’est que le début ! Le peu de temps que nous avons pu partager restera
pour moi de très bons souvenirs. Garde le cap et bon courage pour la suite !
Je remercie le Docteur Yo Demont pour son amitié, ses conseils, les soirées et tout le reste.
Malgré la distance, tout reste intact !
Je remercie le Docteur Stef Verbeke, alias « Maitresse », mes pauses clopes sont bien plus
tristes depuis que tu es partie ! Nos discussions de tout et de rien me manquent !
Je remercie le Docteur Rod Romon pour nos débats vidéo-ludiques et de littérature
japonaise. Je te souhaite de tout cœur le meilleur pour l’avenir.
Merci également à tous ceux qui m’ont accompagné d’une manière ou d’une autre : Elsa,
pour sa joie de vivre ; Sam, pour ses montages photos ; Vaik, pour les parties de Lineage ;
René, pour les soirées de décompression ; ainsi que Chann, Béné, Thomas et tous ceux que
j’aurai oubliés.
Enfin, je terminerai en remerciant du fond du cœur mes parents qui m’ont toujours
encouragé et soutenu dans les moments difficiles et Laurane, sans qui rien ne serait pareil.
Thèse de Jean-Philippe Wilmet, Lille 1, 2011
© 2011 Tous droits réservés.
http://doc.univ-lille1.fr

RESUME
Le facteur de croissance neurotrophique NGF (Nerve Growth Factor) est un facteur
mitogène et de survie pour les cellules de cancer du sein alors qu’il est sans effet sur la
croissance des cellules épithéliales mammaires normales. Ce facteur de croissance agit sur
ses cellules cibles par l’intermédiaire de deux récepteurs : TrkA, qui est un récepteur tyrosine
kinase, et p75NTR, dépourvu d’activité catalytique intrinsèque. Le NGF stimule la survie des
cellules cancéreuses mammaires via p75NTR en activant le facteur de transcription NF-ĸB. Au
cours de mes travaux de thèse, je me suis tout d’abord appliqué à décrire les modifications
du protéome induites par une surexpression de ce récepteur p75NTR. Pour cela, nous avons
établi une lignée cellulaire MCF-7 surexprimant stablement le récepteur p75NTR. Par la suite,
une étude par électrophorèse bidimensionnelle suivie par une analyse par spectrométrie de
masse de type MALDI-TOF/TOF a été réalisée en comparant des cellules non stressées à
des cellules induites en apoptose grâce à l’apoptogène TRAIL (TNF-related-apoptosis-
inducing-ligand). Au cours de cette étude, nous avons pu mettre en évidence un certain
nombre de protéines régulées par la présence de p75NTR en condition d’apoptose comme les
cytokératines 8, 18 et 19, la protéine chaperonne HSP27 ou bien encore la protéine
ribosomale RPLP0. Ces résultats suggèrent l’importance d’une réorganisation de ces
protéines afin que p75NTR puisse effectuer son effet de survie. L’autre partie de mes travaux
a consisté en une étude spécifique des partenaires de signalisation de p75NTR. Pour ce faire,
nous avons décidé d’appliquer la stratégie TAP-Tag (Tandem Affinity Purification-Tag), une
approche de protéomique fonctionnelle, au récepteur membranaire p75NTR. Une analyse
différentielle de plusieurs conditions de culture par spectrométrie de masse de type nanoLC-
MS/MS a abouti à l’obtention d’une liste de partenaires potentiels de signalisation de p75NTR
dans un contexte de survie cellulaire. Cependant, l’implication fonctionnelle de ces protéines
doit être confirmée. L’ensemble de ces travaux a permis d’ouvrir de nouvelles pistes de
recherche pour comprendre à la fois les mécanismes cellulaires mis en œuvre lors de la
survie des cellules cancéreuses mammaires, mais aussi les partenaires potentiels de
signalisation du récepteur p75NTR.
Thèse de Jean-Philippe Wilmet, Lille 1, 2011
© 2011 Tous droits réservés.
http://doc.univ-lille1.fr