Propriétés anti-inflammatoires des huiles essentielles d'agrumes

a11111
Richesenfibresalimentaires,envitamineC,enphénolsetenflavonoïdes,lesagrumessontréputéspourleurspropriétés
bénéfiquespotentiellespourlasanté[1].Leshuilesessentiellesd'agrumessontutiliséesdepuislongtempscomme
insecticides,médicamentsetcosmétiques[2].Leshuilesessentiellesextraitesdupéricarpedediversesespècesd'agrumes
sontlargementutiliséescommeagentsaromatisantsdanslesaliments,lesboissonsetlespréparationsculinaires.
,DanielLuizReisSimas2
VentesAlvianoMoreno3
JorgeLuisAmorim1
PatriciaDiasFernandes1* AntonioJorgeRibeirodaSilva2
MarianaMartinsGomesPinheiro1 Daniela
,
VentesCelutaAlviano3
, , ,
,
PLOSONE|DOI:10.1371/journal.pone.015364318avril2016
FédéraldeRiodeJaneiro,InstitutodeMicrobiologiaPaulodeGóes,LaboratóriodeEstruturasdeSuperfíciedeMicroorganismos,RiodeJaneiro,
Brésil
1UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro,InstitutodeCiênciasBiomédicas,LaboratóriodeFarmacologiadaDoredaInflamação,RiodeJaneiro,
Brésil,2UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro,Institutode
PesquisadeProdutosNaturais,LaboratóriodeAnáliseFitoquímica,RiodeJaneiro,Brésil,3Universidade
Droitsd'auteur:©2016Amorimetal.Cetarticleesten
libreaccèsetdistribuéselonlestermesdelalicence.
ACCÈSOUVERT
Espèces.PLoSONE11(4):e0153643.doi:10.1371/
journal.pone.0153643
Santé,ÉTATSUNIS
Conflitsd'intérêts:Lesauteursdéclarentn'avoiraucun
conflitd'intérêts.
Acceptéle1eravril2016
1/18
Propriétésantiinflammatoiresetcaractérisation
chimiquedeshuilesessentiellesdequatreagrumes
Rédacteurenchef:ParthaMukhopadhyay,Institutsnationauxde
Déclarationdedisponibilitédesdonnées:Touteslesdonnées
pertinentesfigurentdansl’articleetsesfichiersd’informationscomplémentaires.
ARTICLEDERECHERCHE
*[email protected];[email protected]
Citation:AmorimJL,SimasDLR,PinheiroMMG,
MorenoDSA,AlvianoCS,daSilvaAJR,etal.(2016)
Financement:CetravailareçulesoutienduConselho
NacionaldePesquisa(CNPq):303033/20134
(bourse)auPDF,473106/20124(subvention)auPDF
etdelaFundaçãodeAmparoaPesquisadoEstado
doRiodeJaneiro(FAPERJ):E26/210.141/2014
(subvention)auPDF,E26/010.002566/2014(subvention)
auPDF,E26/203.018/2015(bourse)auPDF.
Reçule11février2016
LicenceCreativeCommonsAttribution,quiautorise
l'utilisation,ladistributionetlareproductionsansrestriction
surtoutsupport,àconditionquel'auteuroriginaletlasource
soientmentionnés.
Publiéle18avril2016
Caractérisationdeshuilesessentiellesdequatre
Propriétésantiinflammatoiresetchimiques
Espècesd'agrumes
Abstrait
Introduction
Lesagrumespossèdentdespropriétésbénéfiquespotentiellespourlasantéetleurshuilesessentielles
sontutiliséesdepuislongtempsdansdenombreusesapplications.Comptetenudeseffetsbiologiques
décritspourcertainesespècesd'agrumesdanscetteétude,nosobjectifsétaientd'analyseretdecomparer
lacompositionphytochimiqueetd'évaluerl'effetantiinflammatoiredeshuilesessentielles(HE)
extraitesdequatreespècesdifférentesdeCitrus.DessourisontététraitéesavecdesHEextraitesdeC.
limon,C.latifolia,C.aurantifoliaouC.limonia(10à100mg/kg,parvoieorale)etleurseffetsanti
inflammatoiresontétéévaluéssurdesmodèlesd'inflammationinduitechimiquement(réponsedeléchage
induiteparlaformaline)etd'inflammationinduiteparlecarraghénane(modèledepoched'airsous
cutanée).Unéventueleffetantinociceptifaétéévaluéparletestdelaplaquechaude.Lesanalyses
phytochimiquesontrévélélaprésencedegéranial,delimonène,deγterpinèneetd'autrescomposés.Les
huilesessentiellesdeC.limon,C.aurantifoliaetC.limoniaontprésentédeseffetsantiinflammatoiresen
réduisantlamigrationcellulaire,laproductiondecytokinesetl'extravasationdeprotéinesinduites
parlacarraghénine.Ceseffetsontégalementétéobtenusavecdesquantitéssimilairesdelimonène
pur.IlaégalementétéobservéqueC.aurantifoliainduisaitunemyélotoxicitéchezlasouris.L'effetanti
inflammatoiredeC.limonetC.limoniaestprobablementdûàleurforteteneurenlimonène,tandisquela
myélotoxicitéobservéeavecC.aurantifoliaesttrèsprobablementdueàsaforteconcentrationencitral.
NosrésultatsindiquentqueceshuilesessentiellesdeC.limon,C.aurantifoliaetC.limoniapossèdentun
effetantiinflammatoiresignificatif;cependant,l'utilisationdeC.aurantifoliadoitêtreprudente.
Machine Translated by Google

Méthodes
Matièresvégétales
PLOSONE|DOI:10.1371/journal.pone.015364318avril2016
Huileessentielled'agrumesauxpropriétésantiinflammatoires
2/18
C.limon[(L.)Osbeck,citron«siciliano»],C.latifolia(TanakaexQ.Jimenez,citronvert«tahiti»),C.aurantifolia
[(Christm.)Swingle,citronvert«mirim»]etC.limonia[(L.)Osbeck,citronvert«cravo»)ontétécollectésdansla
fermedel'InstitutoVitalBrazil,RiodeJaneiro,Brésil,situéeàCachoeiradeMacacu,RoadRioFribourgKm32,5.Via
Magé,RJ122.LescoordonnéesGPSsont22°20'753”
Comptetenudelagrandediversitéd'espècesprésentessurtoutelaplanèteetdunombreimportantd'espèces
largementutiliséesauBrésil,cetteétudeviseàévaluerlacompositionchimiqueetlespropriétésantiinflammatoires
deshuilesessentiellesextraitesdesécorcesdesfruitsde*Citruslimon*,*Citrusaurantifolia*,*Citruslimonia*et*Citrus
latifolia*.Nousétudionségalementleséventuelseffetstoxiquesliésàl'utilisationdecesespèces.
confiseries[3].Desétudesrécentesindiquentlapossibilitéd'utiliserleshuilesd'agrumesouleursprincipesactifspour
préveniroutraiterplusieursaffectionspathologiques,oùellespeuventêtreutiliséescommeagentsantimicrobiens[4],
antifongiques[5],neuroprotecteurs[6],anxiolytiques,anticonvulsivantsetsédatifs[7],antinociceptifs[8],antiinflammatoires
[9]etantioxydants[10].
Lacompositionchimiquedeshuilesessentiellesd'agrumesestcomplexeetricheenlimonèneetautres
monoterpènes,telsqueleβpinèneetleγterpinène,ainsiqu'enquelquessesquiterpènesgénéralementprésentsen
faiblesquantités[11].SelonMehletal.[12],lafractionvolatile(85%à99%del'huileliquide)estcomposée
principalementdeterpènes(monoterpènesetsesquiterpènes)etdeleursdérivésoxygénés,ainsiqued'alcools
aliphatiques,d'estersetd'aldéhydes.Lelimonèneestleprincipalcomposantdeshuilesessentiellesd'agrumes(30%à
70%selonlesvariétés).Parmilesautrescomposantsimportantsfigurentl'αpinène,leβpinène,leγterpinène,le
terpinolèneetlesabinène.
S,42°42'858”O.L'identificationbotaniqueaétéréaliséeparleDrRosanaConradoLopes(Institutdebiologie,
UniversitéfédéraledeRiodeJaneiro,Brésil),etdesspécimensderéférencesontdéposésàl'herbierRFAde
l'UniversitéfédéraledeRiodeJaneiro,Brésil.Lesnumérosdesspécimensexsicquéssont:C.limonia(RFA39493),
C.aurantifolia(RFA39492),C.limon(RFA39494)etC.latifolia(RFA39491).
Lespeluresdefruitsontétéprélevéesmanuellementethomogénéiséesavecdel'eaudansunmixeur,puis
immédiatementsoumisesàunehydrodistillationdansunappareildetypeClevengermodifiépendant2heures.
Aprèsextraction,leshuilesontétéséchéessursulfatedesodiumanhydre(NaSO)etconservéesà18°C.
Typiquement,150gdepeluresdefruitsontétéutilisésetunrendementmoyende1,4%aétéobtenu.
LesanalysesGC/FIDont
étéréaliséesàl'aided'unchromatographeenphasegazeuseShimadzuGC2010(Tokyo,Japon)équipéd'un
détecteuràionisationdeflamme(FID)etd'unecolonnecapillaireensilicefondueDB5(30m,diamètreinterne0,25
mm,épaisseurdufilm0,25μm).Latempératuredufouraétéprogramméepouraugmenterde60°Cà246°Càune
vitessede3°C/min,puismaintenueà246°Cpendant20min.Lestempératuresdel'injecteuretdudétecteurontété
maintenuesrespectivementà220°Cet290°C.Leséchantillonsd'huileontétédissousdansduCHCletdes
aliquotesde1μLontétéinjectéesenmodesplitavecunrapportdesplitde1:33,enutilisantHcommegazvecteur(1,44mL/min).
AnalyseGCMSLes
analysesontétéréaliséessurunsystèmeShimadzuQP2010PlusutilisantunecolonnecapillaireensilicefondueDB5
MS(30m,diamètreinternede0,25mm,épaisseurdefilmde0,25μm).Latempératuredufouraétéprogrammée
LesindicesderétentiondeKovats(KI)descomposésontétédéterminésparinterpolationlinéaireparrapportaux
tempsderétentiond'unesériedenalcanes(C7–C30).Lesquantitésrelativesdescomposésontétécalculéesàpartir
desairesdespicsGC,sansfacteurdecorrection.
Machine Translated by Google

5
testdeplaquechauffante
Médicaments,réactifsettraitements
Identificationdescomposés
Animaux
3/18
Huileessentielled'agrumesauxpropriétésantiinflammatoires
PLOSONE|DOI:10.1371/journal.pone.015364318avril2016
Utilisationetsoinsdesanimauxdelaboratoire.Lesprotocolesexpérimentauxutilisésdanscetravailontsuiviles
(mêmequantitéd'huilequecelleutiliséeàladoselaplusélevée).Laconcentrationfinaled'huilen'apasdépassé0,5%.
Latempératuredevaitpasserde60°Cà246°Càunevitessede3°C/min,puisêtremaintenueàcettetempératurependant20min.Le
gazvecteurétaitdel'hélium(99,999%)avecundébitde1,03mL/minetlatempératuredel'injecteurétaitde[températuremanquante].
(Supelco,150x10mm;conditionsisocratiques,phasemobile:méthanol/eau60/40etdétecteurUVà254nm)àpartirdecitral.La
caractérisationdescomposésisolésaétéréaliséeparcomparaisondeleursspectresRMN13C(CDCl3,100MHz)aveclesdonnées
delalittérature[14].
etn'onteuaucuneffetensoi.Lesdosesd'ASAetdemorphineontétéchoisiessurlabased'expériencesprécédentesréaliséespar
notregroupeetontentraînéuneréductionde50%pourchaqueprotocole(IC50).
Lesrèglespréconiséesparlaloin°11794du8octobre2008duConseilnationaldecontrôledel’expérimentationanimale(CONCEA)
ontétéapprouvéesparleComitéd’éthiquedel’utilisationdesanimaux.
Lesanimauxétaientsurveillésquotidiennementetceuxprésentantdessignesdesouffranceétaienteuthanasiés.Deplus,aucundesanimaux
etadapté
Avantchaqueexpérience,lesanimauxnerecevaientquedel'eauafind'évitertouteinterférencealimentaireavec
LessourisontététestéesselonlaméthodedécriteparSahleyetBerntson[15].
parCristália(SãoPaulo,Brésil).Leshuilesessentielles(HE)ontétédissoutesdansdel'huile(SigmaAldrich,USA)pour
lesparticipantssonttombésgravementmaladesousontdécédésàtoutmomentavantlafindel'expérience.
parMatheusetal.[16].Lesanimauxontétéplacéssuruneplaquechauffante(InsightEquipment,Brésil)régléeà
Lestestsontétéeffectuésetlesanimauxn'ontétéutilisésqu'uneseulefoisaucoursdesexpériences.L'étatphysiquedesanimauxétait
Préparerunesolutionmèreà100mg/ml.Lessolutionsontétéadministréespargavageoral,àdesdosesde10à
Solutionsalinetamponnée(PBS)justeavantutilisation.Legroupetémoinétaitcomposéduvéhicule(PBSavecle
Larechercheaétémenéeconformémentauxprincipesinternationalementacceptéspour
DessourismâlesSwissWebster(âgéesde2mois,pesantentre18et25g),gracieusementfourniesparl'InstitutoVitalBrazil,étaient
(CEUA),ScienceCenterHealth/UFRJetareçulenuméroDFBCICB01504/16.
cyclelumière/obscuritéde12heuresetaccèslibreàdesgranulésalimentaires(Nutrilab,Brésil)etàdel'eau.Douzeheures
absorptiondessubstances.Lesanimauxontétéacclimatésaulaboratoirependantaumoins1havant
Touslessolvantsétaientdequalitéchromatographique(Tedia,Brésil).L'acideacétylsalicylique(AAS),lecarraghénane,la
dexaméthasone,lecitraletlelimonèneontétéachetéschezSigmaAldrich(SaintLouis,Missouri,ÉtatsUnis).
Lesanimauxutilisésdanscetteétudeétaientlogésdansunepièceàtempératurecontrôlée(22±2°C)avecunsystèmede12
de40à1000D.
(rapport1:50).Lesspectresdemasseontétéobtenusparélectroionisationà70eVavecunegammedemassem/z
220°C.Leséchantillonsd'huileontétédiluésdansduCHCl3etdesaliquotesde1μLontétéinjectéesenmodesplit(split
L'identificationdescomposantsindividuelsétaitbaséesur(i)unecomparaisondesspectresdemasse
LesprofilsdefragmentationontétécomparésàceuxdelabibliothèquespectraledemasseNIST,etlesindicesderétentiondeKovats
(KI)obtenusparchromatographieenphasegazeusesurunecolonneDB5ontétécomparésàceuxdecomposésauthentiqueset
auxdonnéesdelalittérature[13].Legéranialetlenéralontégalementétéidentifiésparcoinjectiond'étalonsauthentiquesobtenus
parchromatographieliquidepréparativesurcolonneRP18.
ÉtatsUnis).LeformolaétéachetéchezMerck(Allemagne).Lesulfatedemorphineaétéaimablementfourni.
100mg/kg60minavantlesexpériences.Morphine(5mg/kg,peros),ASA(100mg/kg,peros)et
Ladexaméthasone(1,5mg/kg,ip)aétéutiliséecommemédicamentderéférence.Touslesmédicamentsontétédiluésdansduphosphate.
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QuantificationduTNFα,del'IL1β,del'IFNγetdesprotéines
Testàlaformaline
Mesuredesnitrates
PLOSONE|DOI:10.1371/journal.pone.015364318avril2016
Huileessentielled'agrumesauxpropriétésantiinflammatoires
4/18
Lecomportementdeléchageaétéexaminéimmédiatementaprèsl'injectiondeformoldanslapattepostérieure.
Lescomposés,levéhiculeoulamorphineontétéadministrésetlaréactionnormaledel'animalàlatempératureaétédéfinie.Lorsque
lesanimauxétaientmaintenussurlaplaquechauffantependantuneduréesupérieureàtroisfoisladuréedebase(seuild'arrêt),
ilsétaientretirésafind'éviterd'éventuelleslésionsauxpattes.
55±1°C.Àintervallessuccessifsde30minaprèsl'administrationoraled'huilesessentiellesoudevéhicule,letempsderéaction
aétéenregistrélorsquelesanimauxléchaientleurspattesavantetarrièreetsautaient.Lavaleurdebasecorrespondaitau
tempsderéactionmoyenobtenu60et30minavantl'administration.
L'antinociceptionaétéquantifiéesoitcommel'augmentationdelavaleurdebase(%)calculéeparlaformule(tempsderéactionx100/
valeurdebase)–100.
LaprocédureétaitsimilaireàlaméthodedécriteparHunskaaretHole[17]etadaptéeparGomesetal.[18].Dessourisontreçu
uneinjectionde20μLdeformol(2,5%v/v)surlafacedorsaledelapattepostérieuregauche.Letempspasséparl'animalàlécherla
patteinjectéeaétéimmédiatementenregistré.Laréponsenociceptiveetinflammatoiresecomposededeuxphases:lapremièredure
jusqu'à5minaprèsl'injectiondeformol(premièrephase,réponseàladouleurneurogène),etlasecondesurvient15à30min
aprèsl'injectiondeformol(secondephase,réponseàladouleurinflammatoire).Lesanimauxontétéprétraitésparvoieorale
avecdeshuilesessentielles,unvéhiculeoudel'acideacétylsalicylique(AAS)60minavantl'administrationdeformol.
Modèledepoched'airsouscutanée(PAS):Lesanimauxontété
utilisésselonlaméthodedécriteparSedgwicketal.[19],avecdesmodificationsapportéesparRaymundoetal.[20].Aprèsinjection
souscutanéede10mLd'airstériledanslarégiondorsale,troisjourssurdeux,unesuspensionstériledecarraghénane(1%;1mL)
aétéinjectéedanslaPASformée.Lessourisontétérépartiesenquatregroupes:groupetémoin(véhicule),groupestraitésavecdes
huilesessentielles(10,30ou100mg/kg,parvoieorale),etgroupestraitésavecdeladexaméthasone(1,5mg/kg,parvoie
intrapéritonéale),uneheureavantl'injectiondecarraghénane.Ungroupetémoin(véhiculeseul)areçu1mLdePBS(solutionsaline
tamponnéeauphosphate)danslaPAS.Après24h,touslesgroupesontétésacrifiés,laPASaétélavéeavec1mLdePBSstérile
etl'exsudataétérecueilli.Lescellulesdemoelleosseuseontétéobtenuesparrinçagedelacavitéfémoraleavec1mLdesolution
salinetamponnéeauphosphate(PBS).Dusangpériphériqueaétéprélevédansuntubehépariné.Lenombredecellulesdansdes
aliquotesdecellulesdemoelleosseuse,desuspensionsdecellulessanguinesoud'exsudatsaétédéterminéàl'aided'un
analyseurd'hématologieCellPocH100iVDiff(Sysmex).Lesexsudatsontégalementétécentrifugés(5000g,10min,4°C)et
desaliquotesdessurnageantsontétéconservéesà20°Cjusqu'àleuranalyse.
analyses.
Pourévaluerlaproductiond'oxydenitrique(NO),lenitrateaccumulédanslesexsudatsdeSAPaétémesuréselonlaméthode
décriteparBartholomew[21]etadaptéeparRaymundoetal.[20].Lesconcentrationsdenitriteobtenuesaprèsconversiondu
nitrateontétémesuréesenmélangeantdesvolumeségauxd'échantillonetderéactifdeGriess(1%desulfanilamide,0,1%de
dichlorhydratedeN(1naphtyl)éthylènediamine,10%deHPO)[22].LelecteurdemicroplaquesFlexStation(Molecular)aété
utilisé.
LessurnageantsdesexsudatscollectésàpartirduSAPontétéutiliséspourmesurerlefacteurdenécrosetumoraleα(TNFα),
l'interleukine1β(IL1β),l'interféronγ(IFNγ)pardosageimmunoenzymatique(ELISA)selonlesinstructionsdufabricant(B&D,États
Unis)etlesprotéinesextravaséesdéterminéesàl'aidedelaméthodeBCA(kitdedosagedesprotéinesBCA™,Pierce).
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D’aprèslesrésultatsconcernantlecomportementdeléchageinduitparlaformaline,nousavonsdécidédetesterdes
dosesplusfaiblesdeshuilesessentiellesayantdémontréuneffetsignificatif(C.limon,C.limoniaetC.aurantifolia).Lafigure2
montrequetoutesleshuilesessentiellesontréduitlaréponsedeléchageuniquementàladoselaplusélevée(100mg/kg).
Aucunedesdosesplusfaibles(10et30mg/kg)n’ainhibésignificativementlaréponseàlaformaline.
Chaquegroupeexpérimentalétaitcomposéde6à10souris.Lesrésultatssontprésentéssousformedemoyenne±écarttype.
Pourévaluerunéventueleffettoxique,nousavonsadaptélaméthodeutiliséeparLorke[23].Brièvement,différentsgroupesde
sourisontététraitésavec500mg/kgdechaquehuileessentielle.Pendant5joursconsécutifs,plusieursparamètres
(convulsions,sédation,respiration,consommationd'eauetd'aliments)ontétéobservés.
Unappareil(Devices,ÉtatsUnis)aétéutilisépourmesurerl'absorbanceà540nm.Laconcentrationennitritesaété
mesuréeparcomparaisonavecunecourbed'étalonnagedenitritedesodium.
Auboutdecinqjours,lesanimauxontétéeuthanasiésparunesurdosedekétamine/xilazine(150mg/10mg/kg).Leursestomacs
ontétéprélevésetouvertsafind'observerd'éventuelssignesd'hyperémieetlaprésenceoul'absenced'ulcères.
Lasignificativitéstatistiqueentrelesgroupesaétéévaluéeparuneanalysedevariance(ANOVA)suiviedutestde
Bonferroni.Lesvaleursdepinférieuresà0,05(p<0,05)ontétéconsidéréescommesignificatives.
Letableau1présentelesindicesderétentionetlespourcentagesdechaquecomposéidentifiédansleshuilesessentielles
desespècesd'agrumesétudiées.Vingtetunàtrenteetuncomposésontétéidentifiés,représentantde94,8%à99,4%des
huiles.Lelimonène(31,1%à65,7%),leβpinène(5,1%à13,1%)etleγterpinène(10,8%à12,2%)étaientlescomposés
lesplusconcentrés.Leshuilesdecesespècessedistinguentparleurfaibleteneurenlimonène(moinsde70%)comparéeà
celledesoranges,etparleursteneursrelativementélevéesenαpinène,βpinène,sabinèneetγterpinène[24].Les
sesquiterpènesβbisabolène,transαbergamotèneetβcaryophyllèneétaientprésentsenfaiblesquantitésdansleshuiles
essentiellesdetouslesagrumesétudiés.Lamajoritédescomposésidentifiéssontdesmonoterpèneshydrocarbonés.Les
indicesdeKovats(KI)ontétécomparésàlalittérature[25].
Activitéantiinflammatoire.Afind'évaluerles
éventuelseffetsantiinflammatoiresouantinociceptifsdeshuilesessentiellesextraitesdeC.limon,C.aurantifolia,C.latifoliaet
C.limonia,lepremiermodèleutiliséfutleléchagedelapatteinduitparlaformaline.Aprèsinjectionsousplantairedeformaline
(2%),unléchageintense,diviséendeuxphasesdistinctes,aétéobservé.Lapremièrephases'estdéveloppéedurantles5
premièresminutessuivantl'injectiondeformaline,lessourisdugroupetémoincontinuantàlécherlapattependant41,3±5
secondes.Lasecondephases'estdéveloppéeentre15et30minutesaprèsl'injectiondeformaline,lessouriscontinuantàlécher
lapatteinjectéependant143,8±15,7secondes.Aucunedeshuilesessentiellesn'ainhibélapremièrephase,tandisquele
prétraitementdessourisavec100mg/kgdechaquehuileessentielleaentraînéuneinhibitionsignificativedelasecondephase
duléchageinduitparlaformalinepourleshuilesessentiellesdeC.limon,C.limoniaetC.aurantifolia(Fig.1).Afind'exclure
uneéventuelleactivitéantinociceptivecentraledeshuilesessentielles,nousavonségalementévaluéleurseffetsdansletestde
laplaquechaude.Mêmeladoselaplusélevée(100mg/kg)dechaquehuileessentiellen'amontréaucuneactivitéantinociceptive
danscemodèle,indiquantl'absenced'effetcentral(Fig.S1).
PLOSONE|DOI:10.1371/journal.pone.015364318avril2016
Huileessentielled'agrumesauxpropriétésantiinflammatoires
5/18
Résultats
Observationscomportementalesetdigestives
Analysestatistique
Caractérisationchimiquedeshuilesessentielles
Machine Translated by Google