TD Chromatographie échangeur d’ion
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Série 3 : des travaux dirigés
Chromatographie échangeur d’ions
Exercice 1
La colonne est ensuite éluée au moyen d une solution à pH = 5.4 avec un gradient croissant
de concentration en sel.
Protéine
pHi
Albumine d œuf
4.6
Beta lactoglobuline
5.2
Chymotrypsinoène
9.5
Ce mélange est déposé sur une colonne de DEAE cellulose (Diéthyloamino éthyl cellulose) à
pH = 5.4 . NB à pH = 5.4 la DEAE est chargée positivement
Donnez l’ordre d’élution des protéines tout en justifiant votre réponse
Exercice 2
On change une colonne DEAE cellulose à pH = 6.5 avec un mélange de protéines.
Protéine
pHi
Ovalbumine
4.6
Uréase
5.
Myoglobine
7
La colonne sera éluée avec un tampon à pH= 6.5 à préciser qu’ à pH de 6.5 la DEAE est
positive. Le même tampon avec des concentrations croissantes de Na Cl sera utilisé pour
l’élution.
Dans quel ordre sortiront les protéines
Exercice 3
La carboxyméthylcellulose (CM-cellulose) est le support utilisé pour une chromatographie
échangeuse d’ions.
A pH 7 quelles sont les protéines qui seront fixées sur la colonne
Ovalbumine (pHi = 4,6),
Cytochrome c (pHi = 10,65)
Lysozyme (pHi =11)
justifiez votre réponse
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Exercice 4
A l aide de la chromatographie sur une résine a groupement fonctinel sulfonate (SO3-), on
souhaite séparer à 25 °C trois acides-aminés :
L-glutamique à pH isoélectriques 3,22,
L-leucine à pH isoélectriques 5,98
L-lysine à pH isoélectriques 9,74
Ces 3 acides aminés sont déposés sur la colonne, à pH 2, puis on élue en amenant
progressivement le pH à7.
a)Quels est l'ordre d'élution des acides aminés?
b) Que proposez vous pour éluer tous les acides aminés
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